Page 123 - 《中国药房》2021年07期
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然药物资源扩展及新药研发提供参考。                                  脓性链球菌的生长，其半数抑制浓度（IC50 ）值小于 10
        1 药用植物内生菌的分离及鉴定                                    μmol/L；体外杀菌动力学研究表明，这些化合物具有良
            寄生于药用植物的内生菌种属繁多，其次级代谢产                         好的杀菌活性，其在体外可抑制细菌基因的转录/翻译，
        物的种类更是庞杂，因此在进行药用植物次级代谢产物                           也可抑制金黄色葡萄球菌中葡萄球菌黄素的产生。研
        的药理活性研究前，首先要进行内生菌及其次级代谢产                           究发现，甘肃野生与栽培品甘草内生菌次生代谢产物对
        物的分离、提取和鉴定。传统的分离培养法（如组织块                           金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌和大肠埃希菌均具有抑制
        法、平板划线法）可分离出内生菌株实体，是分离植物内                          活性，且JTZB005菌株的次级代谢产物对肺炎链球菌的
        生菌最主要且不可替代的方法。其主要步骤包括采集                            抑菌活性强于栽培甘草水煎液和总皂苷，而JTZB018菌
        新鲜植物材料、选取拟研究的部位清洗干净、用 75％乙                         株的次级代谢产物对大肠埃希菌的抑菌活性强于栽培
                                                                                            [24]
        醇等灭菌后用无菌水冲洗并晾干、去除植物外部组织、                           甘草水煎液和总黄酮          [22－23] 。Pansanit等 发现，卡萨蒙纳
        用无菌刀片将内部组织切成薄片后植入培养基中，当有                           姜内生真菌Arthrinium sp. MFLUCC16-1053的次级代谢
        菌丝长出后，挑出菌丝于新的培养基上做进一步培养分                           产物的乙酸乙酯提取物具有抗革兰氏阳性菌和革兰氏
        离纯化，直至得到纯化的菌株，然后通过分子生物学方                           阴性菌的作用，对葡萄球菌和大肠埃希菌的最小抑菌浓
                  [13]
        法进行鉴定 。随着分子生物学的发展，寄生于药用植                           度（MIC）分别为31.25、7.81 µg/mL；气相色谱分析发现，
        物的内生菌种属可通过非培养方法进行高通量快速鉴                            其乙酸乙酯粗提物中含有β-环柠檬醛、3E-西柏烯、
        定，如采用分子杂交、DNA 指纹技术、rDNA 序列分析、                      Laurenan-2-one、香紫苏醇、2，6-金合欢醇、β-isocomene
        宏基因组方法等，但这些方法无法得到内生菌株实体，                           和γ-姜黄烯等化合物。从药用植物Euphorbia geniculate
                                          [14]
        从而限制了对其代谢产物的进一步研究 。                                中分离的内生真菌可产生生物碱和萜类，具有抗真菌活
        2 药用植物内生菌的次级代谢产物概况                                 性 。黄花蒿极少被植物致病性真菌所侵染，提示其可
                                                             [6]
                                                                                    [25]
            内生菌从寄主植物中吸取营养，通过新陈代谢产生                         能具有抗真菌的活性，Liu等 研究发现，从黄花蒿种分
        的物质称为次级代谢产物           [10－11] 。研究发现，药用植物内          离出的 39 株内生菌的发酵液具有良好的抗植物真菌作
        生菌不仅可以产生与宿主植物活性成分相同或相似的                            用，但其是否可抗人致病真菌，还有待进一步研究。由
        次级代谢产物，而且还能合成具有生物活性的新代谢产                           此可见，内生菌次级代谢产物有助于宿主抵抗病原菌，
                                                                                            [26]
                     [15]
        物。例如Yin等 从川芎中分离出5株可产生川芎嗪的                          亦可抗人致病真菌，是抗生素的资源库 。
        枯草芽孢杆菌，其中 1 株在发酵 144 h 后的产量高达                      3.2  抗炎
                                                                                                       [16]
                      [16]
        10.69 g/L。Qi等 从雷公藤内生曲霉属真菌，分离发现                         雷公藤是治疗风湿性关节炎的常用中药，Qi等 从
        了4种新的丁烯酸内酯（Terrusnolides A-D），可显著抑制                其内生曲霉属真菌次级代谢物中分离发现了具有抗炎
        脂多糖诱导的 RAW264.7 巨噬细胞释放白细胞介素 1β                     活性的物质，且与临床抗炎药物吲哚美辛的活性比较无
                                                                               [27]
       （IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和一氧化氮（NO），且                   显著差异。Maharjan等 从黄芩根中分离出内生真菌镰
        其抑制活性与临床抗炎药物吲哚美辛的活性无显著差                            孢菌 Fusarium sp. QF001，并在其次级代谢产物中发现
                  [17]
        异。Kim 等 从魁蒿的内生真菌 Phoma sp.PF2 分离出                  了对光敏感的同分异构体，这些化合物可抑制脂多糖诱
        了2个新的异色酮和6个已知化合物，这8个物质均可中                          导的巨噬细胞中 NO 的产生、抑制促炎性细胞因子的表
        等强度地抑制脂多糖诱导的 RAW264.7 巨噬细胞中 NO                     达，提示其可能是潜在的抗炎药物。杨志军等 分离
                                                                                                     [28]
        的释放，且其中4个化合物无明显的细胞毒性。另外，内                          的甘草内生细菌 JTYB006 和 JTYB029 属于芽孢杆菌
        生放线菌也可产生生物碱、多肽、聚酮类、萜类等多种生                          Bacillus.属、内生真菌JTYF023属于曲霉属，其发酵液提
        物活性物质 。                                            取物对二甲苯致小鼠耳肿胀、冰醋酸致小鼠腹腔毛细血
                  [18]
        3 药用植物内生菌次级代谢产物的药理活性                               管通透性增高均具有缓解作用；进一步研究发现，甘草
        3.1 抗菌                                             内生菌 JTZB005、JTZB006 和 JTZB063 的次级代谢产物
            青霉菌是抗生素（青霉素）最著名的真菌属，研究者                        可使痰浊阻肺模型大鼠肺组织中NO、TNF-α、细胞间黏
        们在多种药用植物中分离出了内生青霉菌，这些内生菌                           附分子 1 的含量及环氧化酶 2 的活性均显著降低，并显
        产生的次级代谢产物具有良好的抗菌活性 。除青霉                            著升高水通道蛋白 AQP1、AQP5 的表达水平，提示甘草
                                             [19]
        菌属外，其他很多内生菌的次级代谢产物也具有抗菌活                           内生菌的次级代谢产物具有良好的抗炎祛痰作用                     [29－30] 。
        性。Shah 等   [20] 从光果甘草中分离的内生菌 Fusarium              3.3 抗肿瘤
        solani 可产生具有抗菌作用的化合物。Arora 等 从甘                        1993 年，Stierle 等 从短叶紫杉中分离到 1 株内生
                                                  [21]
                                                                               [12]
        草真菌培养物 GG1F1 中萃取的提取物具有显著的抗菌                        真菌Taxomyces andreanae，其可产生与宿主植物一样的
        活性，经鉴定为硫代二酮哌嗪衍生物；其中的2种化合物                          肿瘤治疗剂紫杉醇及相关物质，并在微生物中找到了紫
        均能抑制多种细菌的生长，特别是金黄色葡萄球菌和化                           杉醇的合成路径。美登素（Maytansine）是一种强烈的微


        中国药房    2021年第32卷第7期                                               China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 7  ·881 ·
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