Page 66 - 《中国药房》2021年5期

mitochondrial membrane permeability，Caspase-3 protein activity and protein expression of Cyt-C and Caspase-9 were significantly
increased，while the mitochondrial membrane potential and Bcl-2/Bax ratio were decreased significantly （P＜0.05 or P＜0.01）.
Compared with negative control group，mitochondrial membrane permeability and Bcl-2/Bax ratio were decreased significantly in
administration groups，while mitochondrial permeability，Caspase-3 protein activity and protein expression of Cyt-C and Caspase-9
were significantly increased （P＜0.05 or P＜0.01）. CONCLUSIONS：Lycorine can induce the apoptosis of tumor cells in
H22-bearing mice，the effects of which may be associated with opening mitochondrial membrane permeability transition pore to
increase mitochondrial permeability， decreasing mitochondrial membrane potential and up-regulating the expression of
apoptosis-related proteins.
KEYWORDS Lycorine；Tumor-bearing mice；Mitochondrial；Anti-tumor；Apoptosis；Mechanism

石蒜碱广泛存在于石蒜科植物中，是一种异喹啉类 （β-actin）多克隆抗体（批号AF5003）、考马斯亮蓝快速染
生物碱 [1 － 3] 。该化合物的分子量为 287.30，化学式为 色液（批号 P0017）均购自碧云天生物技术研究所；台盼
C16H17NO4，纯品为无色棱柱状的结构晶体，熔点为275～ 蓝染液（批号：C0040）购自北京索莱宝科技有限公司；胰
280 ℃，微溶于氯仿、乙醇和石油醚，可溶于稀酸，但难溶 酶（批号C0202）、PI染色细胞凋亡试剂盒（批号C1056）、
于水 [1－3] 。现有研究表明，石蒜碱主要是从石蒜的鳞茎、 线 粒 体 通 透 性 转 换 孔（MPTP）检 测 试 剂 盒（批 号
文殊兰的种子和叶片、朱顶红的叶片中被提取出来的 [4－7] ， C2006）、荧光探针钙黄绿素乙酰甲酯（Calcein AM）染料
具有广泛的药理活性，如抗肿瘤、抗病毒、镇静等 [8－12] 。 （批号C2009S）、裂解液（批号P0013）、十二烷基硫酸钠-
近年来，国内外专家学者对石蒜碱的抗肿瘤作用进行了 聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）上样缓冲液（批号
诸多研究，发现该化合物对人乳腺癌 MCF-7 细胞 [13－15] 、 P0015）均购自上海碧云天生物技术有限公司；小牛血清
人早幼粒白血病 HL-60 细胞 [16 － 17] 、人白血病 U937 细 （批号 11011-8611）购自浙江天杭生物科技股份有限公
[20]
[18]
胞 、人食管癌Eca-109细胞 、人肝癌HepG2细胞 、人 司；Reagent A溶液（批号23221）购自北京诺为生物科技
[19]
[21]
胃癌 SGC-7901 细胞 均具有显著的抑制作用，但现有 有限公司；AP-NBT/BICT 显色液（批号 5972）购自上海
研究大多以体外试验为主，缺少对石蒜碱体内抗肿瘤药 一 基 生 物 试 剂 有 限 公 司 ；RPMI 1640 培 养 基（批 号
效学研究的相关报道，且抗肿瘤作用机制尚未明确。因 10491）购自北京博奥华医生物科技有限公司；其余试剂
此，本研究以此为切入点，通过建立小鼠体内肿瘤模型， 均为分析纯或实验常用规格，水为蒸馏水。
从细胞水平、分子水平对石蒜碱的抗肿瘤活性进行探 1.3 动物与细胞
讨，并初步挖掘其作用机制，旨在为石蒜碱抗肿瘤作用 清洁级健康昆明种小鼠雌雄各半，5 周龄，体质量
机制的阐明以及其相关抗肿瘤新药的研发和应用提供 18～22 g，由黑龙江中医药大学佳木斯学院动物实验室
基础数据和理论参考。 提供[动物使用许可证号 SYXK（黑）2017-010]；小鼠 H22
1 材料 肝癌细胞株由哈尔滨商业大学理学院提供。
1.1 主要仪器 2 方法
本研究所用主要仪器包括ECO-170P-230型培养箱 2.1 石蒜碱对H22荷瘤小鼠抗肿瘤作用研究
（美 国 NBS 公 司），CKX-41-32 型 倒 置 显 微 镜（日 本 2.1.1 H22荷瘤小鼠实体瘤模型的建立 取出冻存好的
Olympus 公司），标准型 PB-10 pH 计（德国 Sartorius 公 H22肝癌细胞株复苏后，以 RPMI 1640 培养基重悬为 5×
司），AR1140 型 分 析 天 平（美 国 OHAUS 公 司）， 10 个/mL 的细胞悬液。取小鼠，于腹腔部位消毒后，取
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DL-CJ-1N 型医用型超净工作台（北京东联哈尔仪器制 上述细胞悬液按0.2 mL/只腹腔接种，常规饲养5～8天，
造有限公司），TCS-SP2型激光共聚焦扫描显微镜（德国 以腹腔明显变大、腹水饱满为接种成功。随后，于无菌
Leica公司），L-90K型低温高速离心机（美国Beckman公 条件下对小鼠腹部进行消毒，并用一次性医用注射器抽
司），680型酶标仪（美国Bio-Rad公司），DYY-7C型电泳 取接种成功的小鼠的淡黄色腹水（即肿瘤液），使用显微
仪、WD-9413C型凝胶成像系统（北京六一仪器厂）等。 镜观察腹水状态并以细胞计算板进行计数；采用台盼蓝
1.2 主要药品与试剂 拒染法检测细胞活性（保证其活性在95％以上），然后用
石蒜碱原料药（批号 34296，纯度 98％）购自阿拉丁 4 ℃无菌生理盐水调整细胞密度为 5×10 个/mL，再按
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试剂有限公司；羟基喜树碱原料药（批号20130112，纯度 0.2 mL/只皮下接种于正常小鼠右前肢腋部，常规饲养直
98％）购自哈尔滨圣泰药业有限公司；荧光染料 Rhoda- 至出现明显瘤体为造模成功。
mine 123（批号C2215S）、辣根过氧化物酶标记的山羊抗 2.1.2 H22荷瘤小鼠腹水瘤模型的建立 取出冻存好的
兔 IgG（H+L）二抗（批号 A0277）、兔 Bcl-2 多克隆抗体 H22肝癌细胞株复苏后，以 RPMI 1640 培养基重悬为 5×
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（批号AB116）、小鼠细胞色素C（Cyc-C）多克隆抗体（批 10 个/mL的细胞悬液。取小鼠，按“2.1.1”项下方法接种
号AC908）、小鼠Bax多克隆抗体（批号AB026）、胱天蛋 并抽取淡黄色腹水（即肿瘤液）；同法调整细胞密度为5×
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白酶 3（Caspase-3）活性检测试剂盒（批号 AC033）、兔 10 个/mL，再按 0.2 mL/只接种于正常小鼠腹腔，常规饲
Caspase-9 多克隆抗体（批号 AC062）、兔β-肌动蛋白 养直至其腹腔明显变大、腹水饱满为造模成功。

·572 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 5 中国药房 2021年第32卷第5期