Page 70 - 《中国药房》2021年5期

Cyt-C、Caspase-9 蛋白的表达水平均显著降低，Cyt-C、 瘤细胞。在细胞发生凋亡的过程中，线粒体是首个发生
Caspase-9蛋白的表达水平均显著升高，且显著低于或高 变化的细胞器：在细胞凋亡初期，线粒体形态会发生改
于正常对照组（P＜0.01），同时石蒜碱各剂量组小鼠肿 变；而当抗肿瘤药物刺激细胞线粒体时，位于线粒体内
瘤细胞内Bcl-2/Bax比值和Cyt-C、Caspase-9的蛋白表达 外膜中间的MPTP被打开，使得线粒体膜内外渗透压发
水平有随剂量增加而降低或升高的趋势，详见图4、表5。 生改变、膜电位降低，同时细胞质内流导致线粒体体积
增加、外膜破裂，从而进一步促进线粒体内膜与外膜之
Bcl-2 28 kDa
间的凋亡相关因子释放，这些诱导因子可以直接破坏细
胞核内染色质，激活Caspase家族蛋白，最终启动细胞凋
Bax 21 kDa
亡程序；此外有研究指出，当细胞内线粒体膜电位一旦
Cyc-C 15 kDa 发生异常，即使排除与细胞凋亡有关的所有诱导因素，
细胞依然会发生凋亡，并且这种凋亡是不可逆转的，可
Caspase-9 35 kDa
见线粒体膜电位一旦降低，细胞必然会不可逆转地发生
凋亡 [26－29] 。本研究结果显示，经不同剂量的石蒜碱作用
β-actin 42 kDa
后，各药物组H22荷瘤小鼠的瘤体质量显著降低、生存时
正常对 阴性对 阳性对 石蒜碱低 石蒜碱中 石蒜碱高
照组 照组 照组 剂量组 剂量组 剂量组 间显著延长、早期凋亡率显著升高，石蒜碱低、中、高剂
图 4 石蒜碱对 H22荷瘤小鼠肿瘤细胞内凋亡蛋白表达 量组的抑瘤率有随剂量增加而升高的趋势；同时，各给
影响的电泳图 药组荷瘤小鼠肿瘤细胞的线粒体膜通透性均显著增强，
Fig 4 Electrophoretogram of the effects of lycorine on 而线粒体膜电位均显著降低，且均有剂量依赖性趋势，
the expression of apoptosis-related protein of tu- 提示石蒜碱能增加肿瘤细胞线粒体膜的通透性和降低
mor cells in H22-bearing mice 其膜电位，破坏线粒体内环境的稳定。
有研究指出，线粒体膜电位的产生主要与线粒体膜
表 5 石蒜碱对 H22荷瘤小鼠肿瘤细胞内凋亡蛋白表达
内外质子分布不对称有关，抗肿瘤药物刺激线粒体膜，
水平的影响（x±±s，n＝10）
导致 MPTP 开放，促使线粒体膜电位降低，线粒体膜内
Tab 5 Effects of lycorine on the expression of apopto-
外凋亡诱导因子等就会排放或流入细胞质内，这些因子
sis-related protein of tumor cells in H22-bearing
就会激活Caspase家族，导致细胞凋亡 [30－32] 。基于此，本
mice（x±±s，n＝10） 研究对凋亡启动蛋白Caspase-3活性以及凋亡调控蛋白
组别 Bcl-2/Bax Cyt-C/β-actin Caspase-9/β-actin Bcl-2、Bax、Cyt-C、Caspase-9 蛋白的表达情况进行了检
正常对照组 188.31±1.24 50.31±1.33 75.47±2.05 测。结果显示，与阴性对照组比较，各药物组小鼠肿瘤
阴性对照组 144.61±3.18 ＊＊ 70.23±2.01 ＊＊ 95.95±1.61 ＊＊
阳性对照组 66.76±1.75 ＊＊## 122.58±1.96 ＊＊## 133.25±2.73 ＊＊## 细胞内Caspase-3蛋白的活性和Cyt-C、Caspase-9蛋白的
石蒜碱低剂量组 89.31±1.04 ＊＊## 112.24±2.27 ＊＊## 114.24±1.98 ＊＊## 表达水平均显著升高，Bcl-2/Bax 比值均显著降低，提示
石蒜碱中剂量组 69.55±1.28 ＊＊## 127.49±2.33 ＊＊## 137.49±2.33 ＊＊## 石蒜碱能够促进细胞内外膜间的凋亡调控蛋白Cyt-C释
石蒜碱高剂量组 54.03±1.29 ＊＊## 145.01±2.93 ＊＊## 146.34±1.02 ＊＊##
放，并与Caspase-9蛋白发生级联反应，最终启动细胞凋
##
注：与正常对照组比较， P＜0.01；与阴性对照组比较，P＜0.01
＊＊
亡程序。
Note：vs. normal control group， ＊ ＊ P＜0.01；vs. negative control
##
group，P＜0.01 综上所述，石蒜碱在 H22荷瘤小鼠体内具有抗肿瘤
4 讨论 作用；其能通过破坏肿瘤细胞线粒体膜结构功能，导致
石蒜碱具有很高的药用价值，但由于对该化合物抗 线粒体内促细胞凋亡因子的释放，进而启动细胞凋亡程
肿瘤作用的研究起步较晚且不够深入 ，导致其抗肿瘤 序，最终发挥抗肿瘤作用。但本研究只对线粒体膜通透
[3]
性以及膜电位等指标进行了检测，而未分析线粒体膜损
作用机制尚未完全阐明。因此，为了明确石蒜碱抗肿瘤
作用机制，充分发挥其抗肿瘤药用价值，本研究以肝癌 伤的超微结构以及线粒体损伤后的功能变化，有待后续
研究进一步深入探索，以便更全面系统地阐释石蒜碱基
细胞 H22荷瘤模型小鼠为对象，对石蒜碱的体内抗肿瘤
于线粒体损伤途径的抗肿瘤机制。
活性进行了研究。此外，羟基喜树碱作为市售抗肿瘤药
物，抗肿瘤机制明确 [24－25] ，加之其与石蒜碱同为生物碱， 参考文献
[ 1 ] WANG LY，QIU BL，XIA H，ET AL. Isoquinoline-derived
均为五环结构，分子量接近，因此本研究将其选作阳性
alkaloid enantiomers from corydalis yanhusuo and their
对照药物。
biological activity[J]. J Asian Nat Prod Res，2020，83（2）：
首先，本研究为验证石蒜碱能否抑制小鼠瘤体增长
489-496.
而采用了实体瘤小鼠模型，拟通过观察瘤体的质量变化 [ 2 ] 果婷婷，王辉强，李玉环，等.石蒜碱及其衍生物的药理作
来计算石蒜碱抑瘤率；同时，为证实石蒜碱能否有效延 用研究进展[J].中国医药生物技术，2018，13（5）：463-466.
长小鼠生存时间并诱导肿瘤细胞发生凋亡而采用了腹 [ 3 ] 辛国松，季宇彬，于淼，等.基于线粒体靶向机制的石蒜碱
水瘤小鼠模型，以便能快速、简便地从小鼠体内取出肿 抗肝癌作用研究[J].中草药，2018，49（5）：1132-1138.

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