Page 60 - 《中国药房》2021年5期
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国 Millipore 公司）、BT25S 型十万分之一分析天平[赛多                 会批准，批准号为HUCMS201910010。
        利斯科学仪器（北京）有限公司]、AL204型万分之一分析                        2 方法与结果
        天平（瑞士 Metter Toledo 公司）；SCIENTZ-10ND 型真空            2.1 茯苓水提物UPLC指纹图谱的建立
        冷 冻 干 燥 机（宁 波 新 芝 生 物 科 技 股 份 有 限 公 司）、             2.1.1  茯苓水提物的制备          10 批不同产地茯苓药材打
        DZF-6050 型真空干燥箱（上海博讯实业有限公司）、                        粉，过三号筛后，称取药材粉末 500 g，置于 10 L 圆底烧
        KQ-500DE 型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限                        瓶中，加入 10 倍量（按 mL/g 计，下同）水浸泡过夜，加热
        公司）、JSB6-02 型电子计重秤（上海浦春计量仪器有限                       回流2 h，用300目滤布趁热滤过，收集滤液；残渣继续加
        公司）、RE-6000 型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）、                      10 倍量水回流提取 1 h，用 300 目滤布趁热滤过；合并 2
        5810R 型 高 速 冷 冻 离 心 机（德 国 Eppendorf 公 司）、           次滤液，于 100 ℃水浴条件下浓缩为浸膏，再于真空条
        PC3830A型三排A型秒表计时器（深圳市惠波工贸有限                         件下冷冻干燥，粉碎，即得茯苓水提物粉末。按茯苓生
        公司）。                                                药量计，S1～S10 号茯苓水提物的得率分别为 2.77％、
        1.2 主要药品与试剂                                         3.11％、6.43％、4.33％、3.16％、3.77％、3.04％、3.45％、
            本研究所用的 10 批不同产地茯苓药材由本课题组                        4.25％、3.64％。
        前期在茯苓种植区收集，经湖北中医药大学药学院叶晓                            2.1.2  色谱条件      色谱柱为 Waters HSS-C18 （100 mm×
        川教授鉴定均为多孔菌科真菌茯苓Poria cocos（Schw.）                   2.1 mm，1.8 μm）；流动相为0.1％磷酸溶液（A）-乙腈（B）-
        Wolf 的菌核（10 批茯苓药材来源信息见表 1）。其它药                      甲醇（C），梯度洗脱（0～4 min，42％A→12％A，55％B→
        品与试剂有：16-羟基松苓新酸、16α-hydroxytrametenolic             85％ B，流 速 为 0.4～0.2 mL/min；4～8 min，12％ A→
        acid、茯苓酸B、去氢土莫酸、茯苓酸A、猪苓酸C、3-O-乙
                                                            0％A，85％B→97％B，流速为 0.2 mL/min；8～10 min，
        酰基-16α-羟基松苓新酸、去氢茯苓酸、茯苓酸、脱氢齿孔
                                                            97％B→100％B，3％C→0％C，流速为0.2～0.4 mL/min；
        酸对照品（成都普思生物科技股份有限公司，批号分别
                                                            10～15 min，100％B，流速为 0.4 mL/min）；进样量为 2
        为 PS010073、 PS011188、 PS010102、 PS19092902、
                                                            μL；柱温为 40 ℃；检测波长为 210、242 nm[采用二极管
        PS010109、PS011211、PS010088、PS010110、PS010086、
                                                            阵列检测器（DAD）]。
        PS010087），松苓新酸对照品（上海源叶生物科技有限公
                                                            2.1.3  供试品溶液制备         取“2.1.1”项下 10 批不同产地
        司，批号Y08J7H8750），氯化钠注射液（武汉滨湖双鹤药
                                                            茯苓水提物粉末各约1 g，精密称定，分别置于50 mL锥
        业有限责任公司，批号 1901070801，规格 100 mL ∶ 0.9
                                                            形瓶中，加入甲醇 20 mL，超声（功率 500 W，频率 40
        g），戊巴比妥钠（天津天力化学试剂有限公司，批号
                                                            kHz）提取60 min，放冷后加甲醇补足丢失质量；以3 500
        20130307），艾司唑仑片（华中药业股份有限公司，批号
                                                            r/min离心15 min，取上清液5 mL于试管中，置于真空干
        20190303，规格1 mg/片），安神胶囊（长春海外制药集团
                                                            燥箱中于 60 ℃挥干溶剂，再加入 1 mL 甲醇复溶，用
        有限公司，批号 20190401，规格 0.25 g/粒）；甲醇、乙腈、
                                                            0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
        磷酸均为色谱纯，水为超纯水。
                                                            2.1.4  对照品溶液制备        分别精密称取16-羟基松苓新
                   表1 10批茯苓药材来源信息
                                                            酸 1.14 mg、16α-hydroxytrametenolic acid 1.08 mg、茯苓
          Tab 1  Information of 10 batches of P. cocos sources
                                                            酸B 1.32 mg、去氢土莫酸1.02 mg、茯苓酸A 1.01 mg、猪
        编号                    产地                   批号
        S1                  云南省丽江市                 201804   苓酸C 0.49 mg、3-O-乙酰基-16α-羟基松苓新酸1.30 mg、
        S2                  安徽省岳西市                 201911   去氢茯苓酸1.92 mg、茯苓酸2.18 mg、松苓新酸0.48 mg、
        S3                  云南省楚雄市                 201807   脱氢齿孔酸 0.88 mg 分别置于 10 mL 量瓶中，加甲醇稀
        S4                  云南省大理市                 201804
        S5                  河南省商城县                 201907   释并定容至刻度，摇匀，即得单一对照品溶液。精密吸
        S6                  湖南省怀化市                 201804   取各对照品溶液2 mL于同一25 mL量瓶中，加甲醇定容
        S7                  湖北省英山县                 201807   至刻度，摇匀，以0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得
        S8                  湖北省罗田县                 201807   混合对照品溶液。
        S9                  湖北省麻城市                 201709
        S10                 福建省南平市                 201906   2.1.5  精密度试验      取“2.1.3”项下供试品溶液（S7号样
        1.3 动物                                              品水提物）适量，按“2.1.2”项下色谱条件连续进样测定6
            本研究所用动物为SPF 级雄性C57BL/6小鼠，体质                     次，记录色谱图，以20号峰（因其出峰时间适中、峰形良
        量为 18～22 g，由辽宁省实验动物资源中心提供，实验                        好，下同）为参照，计算各色谱峰的相对保留时间和相对
        动物生产许可证号为 SCXK（辽）2015-0001。小鼠饲养                     峰面积。结果，各共有峰相对保留时间的 RSD 均小于
        于湖北中医药大学实验动物中心，环境温度为 20～                            0.6％（n＝6），相对峰面积的 RSD 均小于 2.2％（n＝6），
        25 ℃，相对湿度为40％～60％，每日光照与黑暗时间各                        表明仪器精密度良好。
        12 h。本文涉及的动物实验经湖北中医药大学伦理委员                          2.1.6  重复性试验      取“2.1.1”项下 S7 号样品水提物粉


        ·566 ·  China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 5                                    中国药房    2021年第32卷第5期
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