Page 49 - 《中国药房》2021年5期
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软件分析，以目的蛋白条带与内参 GAPDH 条带的灰度 表2 黄连解毒汤中活性成分基本信息
值比值表示 AMPK 蛋白的表达水平。上述试验重复 Tab 2 Basic information of active compounds in
6次。 Huanglian jiedu decoction
2.6.5 细胞中极化相关因子的mRNA表达水平检测 采 药材 编号 成分（英文名称） OB，％ DL
黄连 MOL008647 Moupinamide 86.71 0.26
用实时荧光定量 PCR 法进行检测。取“2.6.3”项下各组
黄芩 MOL001689 刺槐黄素（Acacetin） 34.97 0.24
给药、建模后的细胞适量，根据相应试剂盒说明书方法 MOL000173 汉黄芩素（Wogonin） 30.68 0.23
操作，提取 RNA，然后反转录成 cDNA；再以 cDNA 为模 MOL000228 （2R）-7-hydroxy-5-methoxy-2-phenylchroman-4-one 55.23 0.20
MOL002879 邻苯二甲酸二异辛酯 43.59 0.39
板，进行实时荧光定量 PCR 反应（引物序列及产物长度 MOL002908 5，8，2′-trihydroxy-7-methoxyflavone 37.01 0.27
见表1）。PCR反应体系（20 μL）包括：无核酸酶水7.2 μL， MOL002909 5，7，2，5-tetrahydroxy-8，6-dimethoxyflavone 33.82 0.45
MOL002910 红花素（Carthamidin） 41.15 0.24
上下游引物各 0.4 μL，染料 10 μL，cDNA 模板 2 μL。
MOL010405 11，13-eicosadienoic acid，methyl ester 39.28 0.23
PCR反应条件为：95 ℃预变性30 s；95 ℃变性5 s，55 ℃ MOL002913 Dihydrobaicalin 40.04 0.21
[15]
退火10 s，40个循环。以GAPDH为内参，按2 －ΔΔCt 法 计 MOL002914 枇杷内酯（Eriodyctiol） 41.35 0.24
MOL002915 鼠尾草素（Salvigenin） 49.07 0.33
算目的基因mRNA的表达水平。上述试验重复6次。 MOL002917 5，2′，6′-trihydroxy-7，8-dimethoxyflavone 45.05 0.33
表1 PCR引物序列及产物长度 MOL002925 5，7，2′，6′-tetrahydroxyflavone 37.01 0.24
MOL012245 5，7，4′-trihydroxy-6-methoxyflavanone 36.63 0.27
Tab 1 PCR primer sequences and product length
MOL000359 谷甾醇（Sitosterol） 36.91 0.75
基因 引物序列（5′→3′） 产物长度，bp MOL012266 5，7，4′-trihydroxy-8-methoxyflavanone 74.24 0.26
IL-1β 上游：CAGCTTTCGACAGTGAGGAGA 185 MOL002932 羟基甲氧基黄酮（Panicolin） 76.26 0.29
下游：TTGTCGAGATGCTGCTGTGA MOL002933 5，7，4′-trihydroxy-8-methoxyflavone 36.56 0.27
iNOS 上游：CAAGCACCTTGGAAGAGGAG 134 MOL000552 5，2′-dihydroxy-6，7，8-trimethoxyflavone 31.71 0.35
下游：AAGGCCAAACACAGCATACC MOL002937 二氢木蝴蝶素（Dihydrooroxylin） 66.06 0.23
Fizz1 上游：GCTACTGGGTGTGCTTGTG 181 MOL000552 去甲汉黄芩新素（Norwogonin） 39.40 0.21
下游：CTGGGTTCTCCACCTCTTC MOL000073 表儿茶素（ent-epicatechin） 48.96 0.24
IL-10 上游：ACTTTAAGGGTTACCTGGGTTGC 412 MOL002928 木蝴蝶素A（Oroxylin A） 41.37 0.23
下游：TCACATGCGCCTTGATGTCTG MOL001490 bis[（2S）-2-ethylhexyl] benzene-1，2-dicarboxylate 43.59 0.35
GAPDH 上游：AGGCCGGTGCTGAGTATGTC 102 MOL001041 11，13-eicosadienoic acid，methyl ester 39.28 0.23
下游：TGCCTGCTTCACCACCTTCT 黄柏 MOL002660 Niloticin 41.41 0.82
2.6.6 统计学方法 采用SPSS 22.0软件对数据进行分 MOL002663 茵芋碱（Skimmianin） 40.14 0.20
MOL002651 去氢丹参酮ⅡA（Dehydrotanshinone ⅡA） 43.76 0.40
析。符合正态分布的计量资料以x±s表示，采用单因素 MOL002644 珊瑚菜素（Phellopterin） 40.19 0.28
方差分析进行多组间比较，采用 LSD-t 检验进行组间两 MOL002643 delta 7-stigmastenol 37.42 0.75
MOL000785 盐酸巴马汀（Palmatine） 64.60 0.65
两比较；若数据不符合正态分布，则采用非参数检验进
MOL000790 Isocorypalmine 35.77 0.59
行组间比较。P＜0.05表示差异有统计学意义。 MOL000622 广玉兰内酯（Magnograndiolide） 63.71 0.19
3 结果 MOL006401 苦楝子酮（Melianone） 40.53 0.78
MOL001771 Poriferast-5-en-3beta-ol 36.91 0.75
3.1 黄连解毒汤中活性成分的筛选结果 栀子 MOL001406 西红花酸（Crocetin） 35.30 0.26
本研究共筛选得到黄连解毒汤活性成分共50个，其 MOL001663 （4aS，6aR，6aS，6bR，8aR，10R，12aR，14bS）-10-hydroxy-2，2， 32.03 0.76
6a，6b，9，12a-heptamethyl-1，3，4，5，6，6a，7，8，8a，10，11，12，
活性成分的基本信息见表2。 13，14b-tetradecahydropicene-4a-carboxylic acid
3.2 黄连解毒汤活性成分-巨噬细胞极化靶点网络筛选 MOL003095 5-hydroxy-7-methoxy-2-（3，4，5-trimethoxyphenyl）chromone 51.96 0.41
结果 MOL007245 3-methylkempferol 60.16 0.26
MOL001941 白芷乙素（Ammidin） 34.55 0.22
在 SwissTargetPrediction 数据库中共筛选得具有 MOL009038 京尼平龙胆双糖苷 45.58 0.83
“Smile”号的活性成分共50个；依据活性成分的2D结构 MOL001494 十八碳二烯（Mandenol） 42.00 0.19
MOL000422 山柰酚（Kaempferol） 41.88 0.24
进行靶点预测，共筛选出700个预测靶点；经映射后，共
MOL001942 异欧前胡素（Isoimperatorin） 45.46 0.23
筛选出黄连解毒汤可能调控巨噬细胞极化的相关靶点 MOL002883 Ethyl oleate 32.40 0.19
黄芩、栀子 MOL001506 角鲨烯（Supraene） 33.55 0.42
532 个。在 Cytoscape 3.6.0 软件中导入黄连解毒汤的活
黄连、栀 MOL000098 槲皮素（Quercetin） 46.43 0.28
性成分与巨噬细胞极化相关的靶点，构建出黄连解毒汤 子、黄柏 MOL000358 β-谷甾醇（β-sitosterol） 36.91 0.75
活性成分-巨噬细胞极化靶点网络图，详见图1。 MOL000449 豆固醇（Stigmasterol） 43.83 0.76
3.3 PPI网络构建和核心靶点筛选结果 选后，共得核心靶点12个，根据Degree值从小到大排序
将黄连解毒汤可能调控巨噬细胞极化的532个相关 为 AMPK、EGFR、PTGS2、APP、AR、MMP9、PIK3R、
靶点导入 String 数据库，形成 PPI 网络，详见图 2。经筛 MCL1、ACHE、MPO、MAPT、NTRK2。
中国药房 2021年第32卷第5期 China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 5 ·555 ·
