Page 47 - 《中国药房》2021年5期

added to the other groups for 24 h to induce inflammation. Western blot assay was used to detect the expression of AMPK. mRNA
expression of M1 type polarization factor （IL-1 β ，iNOS） and M2 type polarization factor （IL-10，Fizz1） were detected by
RT-PCR. RESULTS：A total of 50 active components of HJD（such as acacetin，wogonin，quercetin，β-sitosterol）were screened，
which could regulate macrophage polarization through 12 GO items （such as anoikis，astrocyte activation），and 20 KEGG
pathways（such as estrogen signaling pathway，bladder cancer pathway，AMPK signaling pathway）. The results of cell test showed
that compared with blank control group，the expression of AMPK protein，Fizz1 and IL-10 mRNA in model group were
significantly decreased （P＜0.01），while the expression of IL-1 β and iNOS mRNA were significantly increased （P＜0.01）；
compared with model group，the expression of AMPK protein，Fizz1 and IL-10 mRNA in serum containing HJD group and
simvastatin group were significantly increased （P＜0.05 or P＜0.01），while the expression of IL-1 β and iNOS mRNA were
significantly decreased （P＜0.01）. CONCLUSIONS：HJD can regulate macrophage polarization through multiple targets and
pathways； it can up regulate the expression of M2-type polarization factors and down-regulate the expression of M1-type
polarization factors through AMPK signaling pathway，regulate macrophage polarization and play an anti-inflammatory role.
KEYWORDS Huanglian jiedu decoction； Macrophage polarization； AMPK signaling pathway； Network pharmacology；
Anti-inflammatory effect

作为单核吞噬细胞系统晚期分化细胞，巨噬细胞在 栀子药材（广东省康美药业有限公司），辛伐他汀片（荷
不同微环境中的功能特性不同，故能在体内外各种因素 兰Merck Sharp & Dohme B.V.公司，批号B14221902065，
诱导下出现不同表型、形态及功能分化，即巨噬细胞的 规格 20 mg），DMEM 高糖培养基、RIPA 蛋白裂解液（美
[1]
极化 。根据其表型和分泌的细胞因子，巨噬细胞可分 国Hyclone公司，批号分别为428025132、417014156），胎
为经典活化型巨噬细胞（M1型）及替代活化型巨噬细胞 牛血清（浙江天杭生物科技有限公司，批号 17060403），
（M2型）两大类，其中M1型巨噬细胞在疾病的发展中分 磷酸盐缓冲液（PBS）、脂多糖（LPS）、RPMI 1640 培养
泌白细胞介素 1β（IL-1β）、一氧化氮合酶（iNOS）等多种 基、TRIzol试剂、ECL化学发光试剂盒、十二烷基磺酸钠-
促炎介质，而 M2 型巨噬细胞则主要分泌 IL-10、缺氧诱 聚 丙 烯 酰 胺 电 泳（SDS-PAGE）试 剂 盒 、二 喹 啉 甲 酸
导分化因子1（Fizz1）等抗炎细胞因子，两者极化功能几 （BCA）蛋白定量试剂盒（美国PeproTech公司，批号分别
乎相互拮抗 [2－4] 。研究表明，巨噬细胞极化在感染、代 为 011779、031837、022848、021937、011645、224899、
谢、免疫及肿瘤的发生发展等过程中均发挥着重要作 235768），山羊抗小鼠AMPK单克隆抗体、HPR山羊抗小
用 。 鼠免疫球蛋白 G（IgG）二抗、鼠源甘油醛-3-磷酸脱氢酶
[5]
黄连解毒汤来源于《外台秘要》，由黄连、黄芩、黄 （GAPDH）抗体（美国Thermo Fisher Scientific公司，批号
柏、栀子组成，具有清热、解毒、泻火的功效，且具有明显 分别为 26053441、23148673、23264128），实时荧光定量
[6]
的抗炎作用 。现有研究表明，黄连解毒汤能抑制巨噬 PCR试剂盒（美国AB-clonal公司，批号A12043），PCR引
细胞源性泡沫细胞的炎症因子 IL-1β的表达，并上调 物（广州晶欣生物科技有限公司）；其余试剂均为分析纯
IL-10的表达，促进巨噬细胞向M2表型转化 [7－9] ，但具体 或实验室常用规格，水为纯净水。
作用机制尚未明确。基于此，本研究拟通过网络药理学 1.3 动物
方法及相关细胞试验，探讨黄连解毒汤对巨噬细胞M1、 本研究所用动物为SPF级6周龄雄性SD大鼠，体质
M2型极化的影响及可能机制，以挖掘其抗炎机制，为指 量 250～300 g，购自海南省药物安全性评价研究中心，
导巨噬细胞极化相关疾病的临床治疗提供参考。 动物生产许可证号为SCXK（琼）2020-0007，动物使用许
1 材料 可证号为 SYXK（琼）2017-0013。饲养环境温度为 22～
1.1 主要仪器 24 ℃，12 h昼夜光照循环。本研究的动物实验获得海南
本研究所用主要仪器有：PIDRed 96 型聚合酶链式 省中医院伦理委员会批准。
反应（PCR）仪（德国 Biometra 公司）、AX-Ⅱ型凝胶成像 1.4 细胞
仪（上海恒勤仪器设备有限公司）、JS-Power300 型电泳 本研究所用细胞为小鼠巨噬细胞 RAW264.7 细胞
仪（上海迪奥生物科技有限公司）、DHP-9032B型电热恒 株，由中国科学院上海生命科学院细胞资源中心提供。
温培养箱（上海一恒科学仪器有限公司）。 2 方法
1.2 主要药品和试剂 2.1 黄连解毒汤中活性成分的筛选
本研究所用主要药品与试剂有：黄连、黄芩、黄柏、 采用中药系统药理学分析平台（TCMSP，http：//lsp.

中国药房 2021年第32卷第5期 China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 5 ·553 ·