Page 44 - 《中国药房》2021年5期

3.2 苍附导痰丸含药血清对细胞中 PI3K、Akt、mTOR 组细胞中PI3K、Akt、mTOR mRNA的相对表达量均显著
蛋白表达的影响 升高，FSH 组和苍附导痰丸中、高剂量组细胞中 Beclin
与 空 白 对 照 组 比 较 ，模 型 组 细 胞 中 PI3K、Akt、 1、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p62 mRNA 的相对表达量均显著降低
mTOR蛋白的相对表达量均显著显降低（P＜0.01）；与模 （P＜0.05或P＜0.01），详见表4。
型组比较，FSH 组和苍附导痰丸中、高剂量组细胞中上 4 讨论
述蛋白的相对表达量均显著升高（P＜0.05或P＜0.01）， 近年来，在卵泡发育障碍相关疾病中应用疗效佳、
详见图1、表3。 副作用少的中药进行治疗日益受到重视 。卵巢发育
[11]
[12]
PI3K 85 kDa 障碍相关的疾病，多属于中医“闭经”“不孕”等范畴 。
Akt 60 kDa 妇科常用方剂苍附导痰丸是由苍术、香附、枳壳、陈皮、
茯苓、甘草等组成，具有健脾化痰、活血调经、理气散结
mTOR 55 kDa
的功效，相关研究表明其可有效改善闭经、月经不调、不
GAPDH 42 kDa
[13]
空白对 模型组 苍附导 苍附导 苍附导 FSH组 孕等卵巢发育障碍所致的疾病 。已有研究表明，卵泡
照组 痰丸低 痰丸中 痰丸高
剂量组 剂量组 剂量组
发育障碍与GCs异常激活的自噬密切相关，GCs自噬会
图1 各组细胞中PI3K、Akt、mTOR蛋白表达的电泳图 导致卵泡的提前闭锁，引起卵泡发育障碍，造成卵泡分
Fig 1 Electrophoretogram of protein expression of
泌性激素的功能失调，从而引发一系列临床症状，而该
PI3K，Akt and mTOR in cells of each group
过程受到自噬相关基因、多种细胞因子以及信号通路的
表3 各组细胞中PI3K、Akt、mTOR蛋白相对表达量的 调控 [14－16] 。PI3K/Akt/mTOR 通路是目前研究较为广泛
检测结果（x±±s，n＝3） 的信号通路之一，PI3K 在细胞因子、缺氧等因素的影响
Tab 3 Relative protein expression of PI3K，Akt and 下可激活 Akt，活化后的 Akt 又可激活下游的 mTOR，从
mTOR in cells of each group（x±±s，n＝3） 而抑制GCs的自噬 [17－18] 。Beclin-1、LC3、p62是常见的自

组别 PI3K/GAPDH Akt/GAPDH mTOR/GAPDH 噬标志物：Beclin-1蛋白是自噬体形成的必备物质，其表
空白对照组 2.21±0.34 1.71±0.22 2.81±0.25 达下调会抑制自噬的发生，因此 Beclin-1 的表达可反映
模型组 0.89±0.16 ＊＊ 0.64±0.16 ＊＊ 0.93±0.05 ＊＊
FSH组 2.37±0.25 ## 1.64±0.12 ## 2.13±0.16 ## 自噬的活性；LC3 蛋白包括 LC3Ⅰ、LC3Ⅱ两种形式，可
苍附导痰丸低剂量组 0.94±0.12 # 0.86±0.20 # 1.24±0.11 # 与 Beclin-1 蛋白共同参与自噬体的形成，已被作为自噬
苍附导痰丸中剂量组 1.42±0.15 # 0.92±0.21 # 1.61±0.27 # 体的特异性标记物；p62蛋白在自噬过程中，会不断地被
苍附导痰丸高剂量组 2.35±0.23 ## 1.51±0.15 ## 2.04±0.14 ##
降解，若自噬活性降低，则 p62 会在细胞中积累，因而
##
#
＊＊
注：与空白对照组比较， P＜0.01；与模型组比较，P＜0.05，P＜
p62 是反映自噬活性的重要标志物 [19－20] 。基于此，本研
0.01
#
＊ ＊
Note：vs. blank control group， P＜0.01；vs. model group，P＜ 究通过检测GCs中PI3K、Akt、mTOR mRNA和蛋白的相
##
0.05，P＜0.01 对表达量以及 Beclin-1、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p62 mRNA 的相
3.3 苍附导痰丸含药血清对细胞中PI3K、Akt、mTOR、 对表达量，以反映GCs的自噬情况。
Beclin 1、LC3ⅠⅠ、LC3ⅡⅡ和p62 mRNA表达的影响 本研究将 TP 作用于 GCs 后，发现细胞上清液中 E2
与 空 白 对 照 组 比 较 ，模 型 组 细 胞 中 PI3K、Akt、 的含量以及细胞中PI3K、Akt、mTOR、p62 mRNA的相对
mTOR mRNA 的相对表达量均显著降低，Beclin 1、 表达量均显著降低，Beclin1、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ mRNA的相
LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p62 mRNA 的相对表达量均显著升高 对表达量均显著升高，推测 TP 可能是通过抑制 PI3K/
（P＜0.01）；与模型组比较，FSH 组和苍附导痰丸各剂量 Akt/mTOR 通路的激活来促使 GCs 发生自噬，因而可模
表4 各组细胞中PI3K、Akt、mTOR、Beclin 1、LC3ⅠⅠ、LC3ⅡⅡ和p62 mRNA相对表达量的检测结果（x±±s，n＝3）
Tab 4 mRNA expression of PI3K，Akt，mTOR，Beclin 1，LC3ⅠⅠ，LC3ⅡⅡ and p62 in cells of each group（x±±s，
n＝3）
组别 PI3K mRNA Akt mRNA mTOR mRNA Beclin 1 mRNA LC3Ⅰ mRNA LC3Ⅱ mRNA p62 mRNA
空白对照组 1.32±0.22 1.43±0.21 1.28±0.21 1.00±0.11 1.00±0.12 1.00±0.15 1.00±0.21
模型组 0.53±0.18 ＊＊ 0.46±0.14 ＊＊ 0.53±0.17 ＊＊ 3.92±0.34 ＊＊ 2.23±0.13 ＊＊ 3.12±0.13 ＊＊ 3.60±0.42 ＊＊
FSH组 1.26±0.21 ## 1.17±0.13 ## 1.12±0.07 # 2.21±0.05 ## 2.04±0.31 # 2.45±0.12 # 2.34±0.23 ##
苍附导痰丸低剂量组 0.72±0.24 # 0.63±0.21 # 0.74±0.02 # 3.85±0.32 2.07±0.14 3.03±0.30 3.54±0.30
苍附导痰丸中剂量组 1.12±0.13 # 0.78±0.23 # 0.86±0.20 # 3.74±0.26 # 1.94±0.17 # 2.96±0.21 # 3.47±0.24 #
苍附导痰丸高剂量组 1.23±0.17 ## 1.02±0.14 ## 1.06±0.14 # 2.14±0.13 ## 1.90±0.20 ## 2.38±0.14 ## 2.26±0.25 ##
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注：与空白对照组比较， P＜0.01；与模型组比较，P＜0.05，P＜0.01
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Note：vs. blank control group， P＜0.01；vs. model group，P＜0.05，P＜0.01
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·550 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 5 中国药房 2021年第32卷第5期