Page 101 - 《中国药房》2021年5期
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U8618）购自天根生化科技（北京）有限公司；乙腈为色谱                       血管中，迅速加入500 mmol/L的MPB溶液（以甲醇为溶
        纯，其余试剂均为分析纯或实验室常用规格，水为超                            剂）25 μL，轻微摇匀，在15 min内于4 ℃下以5 000 r/min
        纯水。                                                离心10 min，分离血浆，置于－80 ℃保存，备测。
        2 对象与方法                                            2.4 氯吡格雷及其代谢产物血药浓度检测
        2.1 纳入与排除标准                                            取“2.3”项下血浆样本于室温下解冻后，吸取200 μL
            纳入标准：（1）18～40 岁男性；（2）体质量指数 18～                 于离心管中，加入250 ng/mL卡马西平工作液（以甲醇作
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        24 kg/m ；（3）无各系统慢性病史，无吸烟史；（4）血常规、                  为溶剂）20 μL，再加入乙腈 800 μL，涡旋 5 min 后，以
        尿常规、大便常规、常规体格检查、心电图、肝肾功能检                          12 000 r/min离心10 min；吸取上清液650 μL，吹干，残渣
        查均正常；（5）对试验所用相关药物不过敏。                              用流动相 100 μL 复溶后，采用 UPLC-MS/MS 法检测血
            排除标准：（1）近3个月内有参加献血或其他临床试                       浆中氯吡格雷及其代谢产物MP-H4的质量浓度（以卡马
        验者；（2）近2周内服用过其它药物者。                                西平为内标）。
        2.2 研究对象                                               色谱条件采用的色谱柱为 Shim-pack XR-OD Ⅱ
            按上述纳入与排除标准选择2019年10－12月于我                      （150 mm×2.0 mm，2.2 µm），流动相为含 2 mmol/L 醋酸
        院行健康体检的男性志愿者，共 150 例。本研究经我院                        铵和 0.2％甲酸的水溶液-乙腈（40 ∶ 60，V/V），柱温为
        医学伦理委员会批准，所有受试者均签署知情同意书。                           40 ℃，流速为0.5 mL/min，进样量为10 µL。质谱条件采
        收集所有受试者的相关信息，包括年龄、身高、体质量、                          用的离子源为电喷雾离子源，以多反应监测模型进行正
        体质量指数以及谷氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、血肌                           离 子 扫 描 ，离 子 化 电 压 为 5 100 kV，毛 细 管 温 度 为
        酐水平等。采用实时荧光PCR仪按CYP2C19基因检测                        610 ℃，用于定量分析的离子对分别为m/z 322→212（氯
        试剂盒说明书方法检测其基因型。PCR 反应体系（共                          吡格雷）、m/z 504→155（MP-H4）、m/z 237→194（内标）。
        25 μL）包括：CYP2C19反应液（PCR缓冲液、特异性引物                   结果，氯吡格雷、MP-H4 检测质量浓度的线性范围分别
        和探针、内标引物、探针和模板、Taq 酶、UNG 酶）23 μL                   为0.005～20.0、0.5～250.0 ng/mL。样品溶液配制、方法
                                                                                 [14]
        和DNA模板（按血液基因组DNA提取试剂盒说明书操                          学考察等内容见前期研究 。
        作提取）2 μL。反应条件为：37 ℃下以 UNG 酶处理 10                   2.5  统计学分析
        min；95 ℃预变性 5 min；95 ℃变性 15 s，62 ℃延伸 60 s，             采用 DAS 2.0 软件计算达峰浓度（cmax ）、达峰时间
        共40个循环。根据CYP2C19*2及CYP2C19*3反应液在                   （tmax ）和药-时曲线下面积（AUC0－t ）等药动学参数，并计
        FAM 和 VIC 通道所检测的 Ct 值（即每个样品荧光信号                    算 cmax和 AUC0－t的几何均值比及其双侧 90％置信区间
        达到设定阈值时所经历的循环数）是否≤36 来判断受                          （CI），采用 GraphPad Prism 7 软件绘制药-时曲线；采用
        试者基因型，并按如下标准判定 CYP2C19 基因的代谢                       SPSS 22.0 对数据进行统计分析。一般临床资料使用
        型 ：CYP2C19*1/*1 为 快 代 谢 型 ，CYP2C19*1/*2、           Shapiro-Wilk 检验进行正态性分析，若符合正态分布则
        CYP2C19*1/*3 为 中 间 代 谢 型 ，CYP2C19*2/*2、            以 x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两
                                            [13]
        CYP2C19*2/*3、CYP2C19*3/*3为慢代谢型 。                   两比较采用 LSD 检验；若不符合正态分布则以中位数
        2.3  分组、给药及样本收集                                    （四分位间距）表示，多组间比较采用 Kruskal-Wallis 检
            根据受试者基因型检测结果[所有受试者各基因型                         验，组间两两比较采用 Mann-Whitney 检验。药动学参
        分布经χ 检验均符合 Hardy-Weinberg 平衡（P＞0.05）]，             数cmax、AUC0－t均以x±s表示，以几何均值比及其90％CI
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        采用随机数字表法挑选CYP2C19快代谢型、中间代谢型                        进行组间比较；tmax以中位数（最低值，最高值）表示，采用
        和慢代谢型男性健康受试者各8例，分别作为快代谢型                           Wilcoxon符号秩和检验进行组间比较。P＜0.05为差异
        组、中间代谢型组和慢代谢型组。各组受试者根据体质                           有统计学意义。
        量分层后，再通过随机数字表法分为2个小组（每小组4                          3 结果
        人），分别在2个周期内按不同顺序口服硫酸氢氯吡格雷                          3.1 一般临床资料
        片 300 mg 或硫酸氢氯吡格雷片 300 mg+雷贝拉唑钠肠                       3 种代谢型受试者的年龄、身高、体质量、体质量指
        溶片 20 mg，清洗期为 7 天。所有受试者在服药前需禁                      数等一般临床资料比较，差异均无统计学意义（P＞
        食10 h以上，用240 mL温开水送服药物，服用雷贝拉唑                      0.05），具有可比性，详见表1。
        钠肠溶片2 h后再服用硫酸氢氯吡格雷片，4 h后进标准                        3.2 药-时曲线分析
        餐。分别在每次给药后 0、0.25、0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、                 快代谢型组、中间代谢型组和慢代谢型组受试者单
        12、24 h时取受试者静脉血2 mL于乙二酸四乙胺抗凝采                      独口服硫酸氢氯吡格雷片 300 mg 和口服硫酸氢氯吡格


        中国药房    2021年第32卷第5期                                               China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 5  ·603 ·
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