Page 61 - 《中国药房》2021年第4期

ABSTRACT OBJECTIVE：To study the effects of paeonol combined with cisplatin on the proliferation and apoptosis of human
osteosarcoma cell MG-63 and its possible mechanism. METHODS：MG-63 cells in logarithmic growth phase were divided into
blank control group，cisplatin group（4 µmol/L），paeonol group（50 mg/L），and low，medium，high concentration combined groups
（50，100，200 mg/L paeonol+4 µmol/L cisplatin）. CCK-8 method was used to detect the cell proliferation rate at 24，48，and 72
hours of treatment. Annexin Ⅴ-FITC/PI double staining method was used to detect the cell apoptosis rate at 24 hours of treatment.
The relative expression of PI3KCA，Akt，mTOR，P-gp and PTEN mRNA in cells were detected by qRT-PCR. RESULTS：Compared
with blank control group，the cell proliferation rate at each time point，and the relative expression of PI3KCA，Akt and mTOR
mRNA in cells were significantly reduced and the apoptosis rate and the relative expression of P-gp and PTEN mRNA in the cells
were increased significantly（P＜0.05 or P＜0.01）. Compared with cisplatin group and paeonol group，cell proliferation rate at
each time point and the relative expression of PI3KCA，Akt and mTOR mRNA in cells were decreased significantly in the high
concentration combination group，while the relative expression of P-gp and PTEN mRNA in the cells were significantly increased
（P＜0.01）；there were statistical significance in some of the above indicators in the medium and low concentration combination
groups（P＜0.05 or P＜0.01）. CONCLUSIONS：The combination of paeonol and cisplatin could inhibit the proliferation of MG-63
cells and promote their apoptosis，which may be related to the down-regulation of PI3KCA，Akt and mTOR mRNA expression，and
the up-regulation of P-gp and PTEN mRNA expression.
KEYWORDS Paeonol；Cisplatin；Osteosarcoma；PI3K/Akt/mTOR signaling pathway；Proliferation；Apoptosis

骨肉瘤是起源于间叶组织，以能产生骨样组织的梭 1 材料
[1]
形基质细胞为特征的骨骼系统原发性恶性肿瘤 ，好发 1.1 主要仪器
于骨生长活跃的青少年 。骨肉瘤恶性程度高、破坏性 本研究所用主要仪器包括5702R型低速离心机（德
[2]
强，早期便可发生侵袭与转移 。随着保肢手术、放疗和 国 Eppendorf 公司）、MCO-15AC 型 CO2恒温培养箱（日
[3]
新辅助化疗的发展，骨肉瘤患者的5年生存率已提高到 本 Sanyo 公司）、Flexstation 3 型全自动酶标仪（美国
®
[5]
70％左右 ，但复发患者的生存率仍不足 30％ 。目前， Molecular Devices 公 司）、IX51 型 倒 置 显 微 镜（日 本
[4]
临床治疗骨肉瘤的化疗药物以阿霉素、顺铂和大剂量甲 Olympus 公司）、CytoFLEX 型流式细胞仪（美国 Beck-
氨蝶呤为主，然而高剂量化疗药物所致的毒副作用和肿
man Coulter 公司）、QuantStudio 6 型实时荧光定量聚合
瘤细胞原发或继发的多药耐药严重影响了其临床疗效
酶链式反应（PCR）仪（美国ABI公司）、Nano-100型微量
[6]
和患者的长期生存率 。顺铂作为骨肉瘤化疗的常用药
分光光度计（杭州奥盛仪器有限公司）、JY300 型水平电
物，不仅可以通过细胞毒作用直接杀伤肿瘤细胞，还可
泳仪（北京君意东方电泳设备有限公司）。
以通过诱导细胞凋亡发挥治疗作用 [7－8] ，但是其肾毒性
1.2 主要药品与试剂
和致严重呕吐的副作用限制了该药的临床使用 。因
[9]
丹皮酚对照品和顺铂对照品（批号分别为 H35803、
此，探索低毒、高效的抗骨肉瘤药物成为目前研究的
P4394，纯 度 均 大 于 99％）均 购 自 美 国 Sigma 公 司 ，
热点。
SYBR Green Master Mix和HiScript逆转录酶（批号分别
丹皮酚是从萝摩科植物徐长卿干燥根或全草和毛
为Q111-02、R101-01/02）均购自南京诺唯赞生物科技股
茛科植物牡丹、芍药的根皮中提取的小分子酚类化合
份有限公司，脱氧核糖核苷三磷酸（批号 P4325）购自北
物，具有广泛的药理活性 [10－11] 。既往研究发现，丹皮酚
京天根生化科技有限公司，RNA酶抑制剂（批号J11202）
对人乳腺癌细胞 EMT6、人食管癌细胞 Eca-109、人肝癌
购自北京全式金生物技术有限公司，MEM培养基（批号
细 胞 Bel-7404、人 结 肠 癌 细 胞 LoVo、人 卵 巢 癌 细 胞
SKOV3 等多种肿瘤细胞均具有明显的抑制作用，其抗 PM150410）购自武汉普诺赛生命科技有限公司，胎牛血
肿瘤的分子机制之一可能是抑制肿瘤细胞增殖、诱导细 清、青霉素-链霉素双抗溶液和 0.25％胰蛋白酶（批号分
[13]
[12]
胞凋亡 ，可见该成分是一种潜在的多靶点抗癌剂 。 别为 10091-148、15070- 063、15050065）均购自美国 Gib-
最新研究认为，丹皮酚与化疗药物或放疗药物联用可起 co 公司，CCK-8 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒（批号
到协同抗肿瘤作用 。然而，目前关于丹皮酚与化疗药 HY-K0301）购自美国 MCE 公司，膜联蛋白Ⅴ（Annexin
[14]
物联用对骨肉瘤细胞的影响尚未见报道。PI3K/Akt/ Ⅴ）-异硫氰酸荧光素（FITC）/碘化丙啶（PI）细胞凋亡检
mTOR 通路是近年来发现的细胞内重要的信号转导通 测试剂盒（批号KGA108）购自南京凯基生物科技发展有
路之一，该通路的表达失调与肿瘤的发生密切相关 。 限公司，总 RNA 提取试剂盒（Trizol 法，批号 15596-026）
[15]
基于此，本文研究了丹皮酚与顺铂联用对人骨肉瘤细胞 购自美国 Ambion 公司，GAPDH、PI3KCA、Akt、mTOR、
MG-63 增殖、凋亡的影响，并基于 PI3K/Akt/mTOR 通路 P-gp、PTEN 等基因的 PCR 引物均由武汉天一辉远生物
探讨其可能机制，旨在为抗骨肉瘤新药的开发提供 科技有限公司设计、合成（引物序列及产物长度见表1）；
参考。 其余试剂均为分析纯，水为超纯水。

中国药房 2021年第32卷第4期 China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 4 ·439 ·