Page 56 - 《中国药房》2021年第4期

液，以离子交换纤维素 DEAE Cellulose 52 柱进行纯化： 2.20
2.00
依次用水和 0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mol/L 氯化钠溶液进行 1.80
1.60
梯度洗脱（流速均为2 mL/min，按5 mL/管分管收集），每 ％ 1.40
1.20
[8]
隔5管采用苯酚-硫酸法显色 ，并以洗脱管数-紫外光谱 丰度， 1.00
0.80
吸光度值绘制洗脱曲线，合并出峰位置相同的组分，用 0.60
0.40
截留分子量为 3 500 Da 的透析袋透析；然后，将透析袋 0.20 0
内液减压浓缩，冷冻干燥，分别得到3个多糖组分，分别 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19
时间，min
命名为CCL-M2（水洗脱部位）、CCL-M3（0.4 mol/L 氯化 A. CCL-M2
钠溶液洗脱部位）、CCL-M6（0.4 mol/L 氯化钠溶液洗脱 5.50
5.00
部位），得率分别为 0.40％、0.44％、4.50％，密封干燥保 4.50
4.00
存。黄瓜子多糖组分 CCL-M2、CCL-M3、CCL-M6 在 ％ 3.50
3.00
DEAE-52纤维素柱中的洗脱曲线见图1。 丰度， 2.50
2.00
1.50
4.5 1.00
4.0 0.50
3.5 0
3.0 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
吸光度 2.5 时间，min
2.0
1.5 6.00 B. CCL-M3
1.0 5.50
5.00
0.5
4.50
0 4.00
0 20 40 60 80 100 120 140 160 ％ 3.50
洗脱管数 丰度， 3.00
2.50
A. CCL-M2 2.00
1.50
2.5 1.00
0.50
2.0 0
CCL-M6
1.5 CCL-M3 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
时间，min
吸光度 1.0 C. CCL-M6
0.5 图2 黄瓜子多糖组分CCL-M2、CCL-M3、CCL-M6的
HPLC-ELSD色谱图
0
0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 Fig 2 HPLC-ELSD spectrogram of C. satiuus polysac-
－0.5
洗脱管数
B. CCL-M3和CCL-M6 charides CCL-M2，CCL-M3，CCL-M6
图1 黄瓜子多糖组分CCL-M2、CCL-M3、CCL-M6在 溶液，按上述色谱条件进样分析并记录色谱图。以各标
DEAE-52纤维素柱中的洗脱曲线 准品分子量的lg值（x）为横坐标、保留时间（y）为横坐标
Fig 1 Elution curves of C. satiuus polysaccharides 绘制标准曲线 ，得到回归方程为y＝－0.734 1x+9.625 7
[11]
CCL-M2，CCL-M3 and CCL-M6 on DEAE- （R ＝0.999 0）。分别取黄瓜子 3 种均一多糖样品适量，
2
52 cellulose column 用水溶解制成质量浓度均为2 mg/mL的样品溶液，按上
2.3 黄瓜子3种多糖的纯度检测 述色谱条件进样测定，记录色谱图。将各样品的保留时
将CCL-M2、CCL-M3、CCL-M6分别以水溶解，均制 间 分 别 代 入 上 述 回 归 方 程 中 ，计 算 得 CCL-M2、
6
成 2 mg/mL 的供试溶液，采用 HPLC-ELSD 法分别检测 CCL-M3、CCL-M6 的分子量分别为 9.614×10 、2.024×
7
7
其多糖纯度 [9－10] 。色谱柱为 Shodex sugar KS-805 糖柱+ 10 、3.343×10 Da。
KS-G 高效凝胶过滤色谱柱，流动相为超纯水，柱温为 2.5 黄瓜子3种均一多糖的结构分析
40 ℃，流速为0.7 mL/min，载气流速1 mL/min，气体压力 2.5.1 紫外吸收特性分析 称取 CCL-M2、CCL-M3、
40 psi，进样量为 10 μL。结果发现，CCL-M2、CCL-M3、 CCL-M6各4 mg，用水制成质量浓度均为2 mg/mL的溶
CCL-M6 谱图中均显示为单一对称峰，表明以上 3 个黄 液，使用紫外-可见分光光度计在200～400 nm波长范围
瓜子多糖均为均一多糖。黄瓜子多糖组分 CCL-M2、 内进行扫描，检测其在260、280 nm波长处是否含有核酸
CCL-M3、CCL-M6的HPLC-ELSD色谱图见图2。 和 蛋 白 质 缀 合 物 吸 收 峰 [12] 。 结 果 显 示 ，CCL-M2、
2.4 黄瓜子3种均一多糖的分子量测定 CCL-M3、CCL-M6 在 260、280 nm 波长处均无明显吸收
采用 HPLC-ELSD 法进行测定，条件同“2.3”项。取 峰，表明经过分离、纯化得到的是3种精制的均一多糖，
分子量分别为 40 000、2 000、500、70、40、10 kDa 的葡聚 均不含有核酸和蛋白质。黄瓜子均一多糖 CCL-M2、
糖标准品适量，分别用水制成质量浓度均为2 mg/mL的 CCL-M3、CCL-M6的紫外吸收光谱图见图3。

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