Page 59 - 《中国药房》2021年第4期
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（Ai－Aj ）/A0 ）]×100％；式中，Ai为样品溶液与 DPPH 溶液             子量为9.614×10 Da；CCL-M3由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、
                                                                         6
        混合后的A值，Aj为样品溶液的A值，A0为DPPH 溶液的                      半乳糖、阿拉伯糖组成，其摩尔比为1.7∶3.8∶6.4∶3.3∶1.3，
        A值。通过软件Graphphad Prism 7.0计算各样品的半数                 分子量为 2.024×10 Da；CCL-M6 亦由甘露糖、鼠李糖、
                                                                            7
        清除浓度（IC50 ）。结果显示，在所测质量浓度范围内，各                      葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖组成，其摩尔比为1.3∶3.0∶3.2∶
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        样品对DPPH·均有一定的清除活性，其强弱顺序依次为                         4.4 ∶ 8.9，分子量为 3.343×10 Da。该结果表明，CCL-M3
        VC＞CCL-M2＞CCL-M3＞CCL-M6，IC50 依次为 0.309、            和 CCL-M6 具 有 相 同 的 单 糖 组 成 ，但 摩 尔 比 不 同 ；
        1.240、1.489、1.713 mg/mL。                           CCL-M2 与另外 2 种多糖的单糖组成不同，这可能是因
        2.7.2  清除羟基自由基（·OH）能力的测定                 分别按       为 CCL-M2 是从水洗脱部位中分离出来的多糖，而
       “2.7.1”项下方法制备CCL-M2、CCL-M3、CCL-M6和VC                CCL-C3和CCL-C6是从盐洗脱部位中分离出来的多糖，
       （阳性对照）不同质量浓度的系列样品溶液。分别吸取                            故组成存在差异。
                                                                             2－
        各质量浓度的样品溶液 5 mL，加入 9 mmol/L 硫酸亚铁                       DPPH·、·OH、O ·是生物体内主要的活性氧自由
        溶液、9 mmol/L水杨酸-乙醇溶液、6 mmol/L过氧化氢溶                  基，其引起的脂质过氧化是导致衰老、心血管疾病和肿
                                                                                [22]
        液各 0.5 mL，于 37 ℃反应 45 min 后，采用酶标仪于 510             瘤发生的重要原因之一 。本研究通过体外抗氧化试
                                                                                              2－
        nm 波长处测定其 A 值。每个样品测定 3 次，取平均值。                     验发现，3 种均一多糖对 DPPH·、·OH、O ·均有一定的
        按公式计算·OH 清除率：·OH 清除率（％）＝（1－（Ai－                    清除作用，且在相同的质量浓度下，CCL-M2的抗氧化活
                    [20]
        Aj ）/A0 ）×100％ 。式中，Ai为加入样品溶液和硫酸亚铁、                 性要强于其余2个均一多糖，笔者推测这可能是由于该
        水杨酸-乙醇、过氧化氢溶液的 A 值，Aj为不加过氧化氢                       多糖的单糖组成不同于其他两个多糖所造成的。此外，
        溶液的 A 值，A0为不加样品溶液的 A 值。按照“2.7.1”项                  笔者推测这种差异还可能与多糖的糖苷键类型、三螺旋
        下方法计算各样品对·OH 的 IC50。结果显示，各样品                       结构等因素有关，故其抗氧化活性的具体机制尚待进一
        对·OH 均有一定的清除活性，其强弱顺序依次为 VC＞                        步研究。
        CCL-M2＞CCL-M6＞CCL-M3，IC50依次为0.968、1.032、               综上所述，本研究从黄瓜子中分离得到 3 种吡喃糖
        1.233、1.356 mg/mL。                                 形式的均一多糖均具有一定的体外抗氧化活性，其中以
        2.7.3  清除超氧阴离子自由基（O ·）能力的测定                  分     CCL-M2的活性最强。
                                     2－
        别“2.7.1”项下方法制备 CCL-M2、CCL-M3、CCL-M6 和              参考文献
        VC（阳性对照）不同质量浓度的系列样品溶液。分别吸                          [ 1 ]  祝洪宇，隋莹，宋宁，等.黄瓜子不同炮制品中化学成分的
        取各质量浓度的样品溶液 5 mL，置于 10 mL 具塞试管                          对比[J].中国医药导报，2014，11（20）：106-109.
        中，均加入 50 mmol/L 的 Tris-HCl 缓冲液（pH 8.2）4.7          [ 2 ]  裴启洋，佟鑫，贾天柱.黄瓜子不同提取部位对体外培养
        mL，在 25 ℃下恒温振荡反应 20 min 后，立即加入事先                        大鼠成骨细胞的影响[J].中成药，2014，36（4）：680-684.
                                                           [ 3 ]  吴晓毅.黄瓜子化学成分和瓜蒌含水量、酸值测定研究[D].
        预热好的邻苯三酚溶液 0.3 mL，混匀。采用酶标仪于
                                                                北京：中国中医科学院，2012.
        320 nm波长处测定其A值，每隔30 s测定1次，共测定5
                                                           [ 4 ]  孙英，杨艳平，刘娜，等.米糠多糖的提取方法和生物活性
        min，算出每分钟A值的增量，然后通过计算每分钟A值
                                                                功能的研究进展[J].饲料研究，2020，43（12）：147-150.
                                         [21]
        的增量与时间的比值得到自氧化速率 。每个样品测                            [ 5 ]  段丽萍，苗丽坤，孙炜炜，等.油茶多糖的提取及生物活性
        定 3 次，取平均值。按公式计算 O ·清除率：O ·清除                           研究进展[J].粮食与油脂，2020，33（11）：26-28.
                                     2－
                                                 2－
                                  [21]
        率（％）＝（1－ΔAi/ΔA0 ）×100％ 。式中，ΔAi为加入样品                [ 6 ]  周博宇，杨岳峰，张晶莹，等.香菇多糖生物活性及应用研
        溶液后邻苯三酚的自氧化速率；ΔA0为邻苯三酚的自氧                               究进展[J].中国卫生工程学，2020，19（5）：792-795.
        化速率。按照“2.7.1”项下方法计算各样品对 O ·的                       [ 7 ]  肖玉焕，韩丽，李浩然，等.灵芝多糖防治中枢神经系统疾
                                                   2 －
        IC50。结果显示，各样品对O ·均有一定的清除活性，其                            病的研究进展[J].中草药，2020，51（24）：6391-6395.
                                2－
        强弱顺序依次为 VC＞CCL-M2＞CCL-M3＞CCL-M6，                   [ 8 ]  温文娟，刘珊，黄远丽.苯酚硫酸法与蒽酮硫酸法测定香
        IC50依次为0.335、0.379、0.812、1.662 mg/mL。                   菇多糖含量比较[J].现代食品，2020，7（21）：177-179.
        3 讨论                                               [ 9 ]  林晓婷，王秋红，匡海学.柱前衍生化 HPLC 法测定麻黄
                                                                粗多糖中4种单糖的含量[J].化学工程师，2020，34（11）：
            在本研究中，笔者首次对 CCL 进行提取，并进一步
                                                                22-25.
        进行分离、纯化后得到 CCL-M2、CCL-M3、CCL-M6 等 3
                                                           [10]  黄超，万鸣，陈树和，等. HPLC-ELSD法同时测定茯苓水
        种均一多糖。结合紫外、红外等多种光谱技术对其结构
                                                                溶性多糖中多种单糖[J].中国药师，2020，23（1）：148-
        进行鉴定后，发现3种均一多糖具有相似的化学键和官                                150.
        能团，并呈现出糖类物质的典型吸收峰，且均是吡喃                            [11]  邓昂，冯凯，滕希峰，等.鬼针草提取物中多糖含量及分子
        糖。其中，CCL-M2由鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳                            量的测定[J].海峡药学，2019，31（12）：60-62.
        糖、阿拉伯糖组成，其摩尔比为5.1 ∶ 2.6 ∶ 1.7 ∶ 1.4 ∶ 31.6，分       [12]  周伟娥，周学锋，王宇阳，等.中药多糖成分前处理及检测


        中国药房    2021年第32卷第4期                                               China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 4  ·437 ·
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