Page 58 - 《中国药房》2021年第4期

取 CCL-M2、CCL-M3、CCL-M6 各 1 mg，置于不同具塞 10 000 000 阿拉伯糖
试管中，加入 4 mol/L 三氟乙酸溶液 0.5 mL 溶解，密封， 8 000 000 半乳糖
120 ℃油浴2 h后，用氮吹仪吹干。沉淀物加甲醇200 μL ％ 6 000 000
进行溶解，再以氮吹仪吹干，反复以上操作2次。最后将 丰度， 4 000 000 鼠李糖
PMP 半乳糖醛酸 葡萄糖
沉淀物再次以甲醇 200 μL 复溶，即得完全酸水解液。 2 000 000
在完全酸水解溶液中加入氨水 0.5 mL，然后再加入 0
0.5 mol/mL的PMP甲醇溶液0.5 mL进行衍生化反应，封 0 5 10 15 20
口，70 ℃水浴30 min。在上述提取液中加入甲醇100 μL， 时间，min
A. CCL-M2
用氮吹仪吹干，重复操作3次。沉淀物再次以甲醇100 μL 5 000 000 阿拉伯糖
[15]
复溶，即得酸水解和衍生化处理后的样品溶液 。 4 000 000
2.6.2 单糖标准品的衍生化处理及混标溶液的制备
％ 3 000 000 鼠李糖 葡萄糖
称取8种单糖（葡萄糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、阿拉 丰度， 2 000 000 PMP 甘露糖 半乳糖
伯糖、半乳糖、鼠李糖、木糖、甘露糖）标准品各 1 mg，分
1 000 000
别置于8支具塞试管中，每管加入0.5 mol/L的PMP甲醇
溶液 0.5 mL 进行衍生化反应，封口，70 ℃水浴 30 min。 0
0 5 10 15 20
在上述提取液中加入甲醇 100 μL，用氮吹仪吹干溶剂， 时间，min
B. CCL-M3
反复以上操作3次，即得PMP衍生化单糖标准品。取上
6 000 000 阿拉伯糖
述各衍生化单糖标准品1 mg，分别用甲醇1 mL溶解，作
5 000 000 半乳糖
为各单糖标准品母液；分别吸取上述单糖标准品母液各 4 000 000
100 μL，置于同一具塞试管中，涡旋混匀，即得各单糖标 ％ 丰度， 3 000 000 鼠李糖 葡萄酸
[16]
准品的混标溶液 。 2 000 000 PMP 甘露糖
2.6.3 UPLC-QTOF/MS 分析条件 色谱条件参考文 1 000 000
献[17]设置：以CORTECS C18 PFP为色谱柱，以20 mmol/L 0
乙酸铵为流动相A（462 mg乙酸铵溶解于300 mL 0.05％ 0 5 10 15 20
时间，min
乙酸中配制而成）、乙腈为流动相 B 进行梯度洗脱（0～ C. CCL-M6
16 min，80％ A；16～20 min，80％ A→50％ A；20～25 12 000 000 甘露糖 葡萄糖 阿拉伯糖
min，50％A→5％A；25～26 min，5％A→80％A；26～28 10 000 000 鼠李糖 半乳糖 木糖
8 000 000
min，80％A），柱温为 30 ℃，流速为 0.4 mL/min，进样量 ％ 6 000 000
为 5 μL。质谱分析的离子源为电喷雾电离源（ESI），在 丰度， 半乳糖醛酸
4 000 000 葡萄糖醛酸
正离子模式下采集m/z 400～600范围内的数据；雾化气 2 000 000 PMP
（N2 ）和脱溶气体（N2 ）的流速分别为 50、500 L/h，电离源 0
温度为100 ℃，溶剂温度为300 ℃，毛细管电泳电压为3.0 0 5 10 15 20
时间，min
kV，锥孔电压为 30 V；以亮氨酸脑啡肽（m/z 556.277 1， D.混标
500 ng/mL）进行实时质量校正；Lock Spray 频率设定为 图5 黄瓜子3种均一多糖水解和衍生化处理后的总离
10 s，使用MassLynx 4.1软件进行所有数据采集和处理。 子流图
2.6.4 单糖组成分析 分别取“2.6.1”项下经酸水解和 Fig 5 Total ion flow diagrams after hydrolysis and de-
衍生化处理后的3种均一多糖样品溶液以及“2.6.2”项下 rivatization of 3 kinds of homogeneous polysac-
的混标溶液，按“2.6.3”项下条件进样分析，记录总离子 charides from C. satiuus
流图（见图5）。通过与混标样品总离子图进行对比分析 2.7 黄瓜子3种均一多糖的体外抗氧化活性研究
可知，CCL-M2由鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、 2.7.1 清除 DPPH·能力的测定 分别称取不同质量的
阿拉伯糖组成，其摩尔比为 5.1 ∶ 2.6 ∶ 1.7 ∶ 1.4 ∶ 31.6，其中 CCL-M2、CCL-M3、CCL-M6 和 VC（阳性对照）溶于水
以鼠李糖和阿拉伯糖摩尔含量最高；CCL-M3 由甘露 中，制成质量浓度均为 0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mg/mL 的系
糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖组成，其摩尔比为 列样品溶液。吸取上述不同质量浓度的样品溶液各 50
1.7 ∶ 3.8 ∶ 6.4 ∶ 3.3 ∶ 1.3，其中以葡萄糖摩尔含量最高； μL，加入 DPPH溶液50 μL，充分混匀后，在25 ℃下避光
CCL-M6由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖组 反应 30 min 后，采用酶标仪于 517 nm 波长处测定其吸
成，其摩尔比为1.3 ∶ 3.0 ∶ 3.2 ∶ 4.4 ∶ 8.9，其中以半乳糖摩尔 光度（A） ，每个样品平行测定 3 次，取平均值。按以下
[18]
[19]
含量最高。 公式计算 DPPH·清除率 ：DPPH·清除率（％）＝[（1－

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