Page 55 - 《中国药房》2021年第4期
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scavenging activity to·OH was VC＞CCL-M2＞CCL-M6＞CCL-M3（IC50 was 0.968，1.032，1.233，1.356 mg/mL）；the order of
        scavenging activity to O · was VC＞CCL-M2＞CCL-M3＞CCL-M6 （IC50 was 0.335， 0.379， 0.812， 1.662 mg/mL）.
                            2 －
        CONCLUSIONS：3 kinds of monosaccharides in the form of pyranose are isolated from C. satiuus，and all of them have
        antioxidant activity in vitro，and CCL-M2 is the best.
        KEYWORDS    Cucumis satiuus；Homogeneous polysaccharides；Separation；Purification；Antioxidant activity

            黄瓜子为葫芦科药食同源植物黄瓜 Cucumis sati-                  树 脂 Amberlite FPA90Cl（粒 径 580～840 μm）、阳离子
        uus L.的干燥成熟种子。夏、秋二季取种子成熟的老黄                        交换树脂 Amberlite FPC3500H（粒径 580～840 μm）、三
                                  [1]
        瓜，剖开，取出种子，晒干，即得 。黄瓜子主要含有糖和                         氟乙酸（TFA）、1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）、1，1-
        苷类、三萜类、植物甾醇类、脂肪酸类、氨基酸类等成                           二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）均购自上海麦克林生化科
          [2]
        分 ，具有舒筋接骨、祛风消疾的功效，可用于骨折筋伤、                         技有限公司；葡萄糖（批号CHB180929）、葡萄糖醛酸（批
                           [3]
        风湿痹痛、劳伤咳嗽等 。多糖是继蛋白质、核酸和脂类                          号 CHB180902）、半乳糖醛酸（批号 CHB180227）、阿拉
        之后的维持人类生命的第四大重要物质，与机体免疫功                           伯糖（批号 CHB180206）、半乳糖（批号 CHB180227）、鼠
        能的调节、细胞与细胞之间的识别、细胞间物质的运输、                          李糖（批号 CHB190217）、木糖（批号 CHB180301）、甘露
        癌症的诊断与治疗等密切相关             [4－6] 。随着多糖研究的大          糖（批号 CHB180615）等单糖标准品均购自成都克洛玛
        量开展，中药多糖的抗病毒、降血糖、抗肿瘤、降血脂、抗                         生物科技有限公司，纯度均不低于 98％；维生素 C 原料
                                                     [7]
        氧化、抗神经炎和调节免疫等药理活性被逐渐证实 。                           药（VC，批号 28288902，纯度＞99.7％）购自天津市天新
        但目前针对黄瓜子的研究多集中在小分子物质上，而对                           精细化工开发中心；过氧化氢购自广东恒健制药有限公
        于黄瓜子多糖的研究鲜有报道。有研究指出，黄瓜子具                           司；浓硫酸、苯酚、乙醇、硫酸亚铁、水杨酸、邻苯三酚、铁
        有抑制自由基产生并加速自由基清除的作用，具有较强                           氰化钾等试剂均为分析纯，水为超纯水。
        的抗氧化能力 ，但该作用是否与黄瓜子多糖有关尚未                           2 方法与结果
                    [3]
        可知。因此，本研究以黄瓜子多糖为研究对象，对其进                           2.1  黄瓜子粗多糖（CCL）的提取
        行进一步分离、纯化后收集均一多糖，并通过光谱技术                               将干燥黄瓜子药材打成粗粉。称取粗粉5 kg，以10
        对其组成和结构进行鉴定，然后通过体外自由基清除试                           倍量（mL/g，下同）的 80％乙醇加热回流提取 3 次、每次
        验考察黄瓜子多糖的体外抗氧化活性，为其进一步开发                           3 h，提取液经8层纱布滤过后，合并3次滤液。药渣自然
        利用提供试验参考。                                          晾干，然后以 10 倍量水加热回流提取 3 次、每次 2 h，水
        1 材料                                               提液经8层纱布滤过后，合并3次滤液。将2次合并液混
        1.1  主要仪器                                          合并减压浓缩至一定体积（约 1 L），然后加入 85％乙醇
            ME104 型电子分析天平购自梅特勒-托利多仪器                       进行醇沉（边加醇边进行搅拌），使药液中乙醇体积分数
       （中国）有限公司；JY92-IIN型高速离心机购自湖南湘仪                       约为 70％后，静置 24 h，抽滤，得到沉淀物，反复按上述
        集团有限公司；BS100N型自动部分收集器、HL-2N型恒                      方法醇沉3次。将醇沉后的沉淀物用无水乙醇和丙酮交
        流泵均购自上海青浦沪西仪器厂；Milli-Q Advantage                   替洗涤3次，真空干燥除去残留的洗涤溶剂，即得CCL，
        A10型超纯水机购自德国Merck Millipore公司；iMark型               得率为5.06％。
        酶标仪购自美国Bio-Rad公司；FDU-2110型冷冻干燥机                    2.2  CCL的分离、纯化
        购自日本 EYELA 公司；UV-1800 型紫外-可见分光光度                       用水将 CCL 制成 0.03 g/mL 的多糖溶液，以 4 750
        计购自日本Shimadzu公司；TENSOR37型傅里叶红外光                    r/min离心15 min，取上清液，以Amberlite FPA90Cl阴离
        谱仪购自德国 Bruker 公司；Alliance 2695 型高效液相色              子和 Amberlite FPC3500H 阳离子串联交换树脂柱进行
        谱（HPLC）仪、X500R型超高效液相色谱-四极杆飞行时                      分离：先用水洗脱（流速为10 mL/min，按5 mL/管分管收
                                                                              [8]
        间质谱（UPLC-QTOF/MS）仪、2998 型蒸发光散射检测                   集），经苯酚-硫酸法 检测至无糖组分流出时，改用 1
        器（ELSD）均购自美国Waters公司。                              mol/L氯化钠溶液洗脱（流速为10 mL/min，按5 mL/管分
        1.2 主要药品与试剂                                        管收集），直至洗脱到无糖组分流出为止。将以上得到
            黄瓜子药材（批号 20191215）于 2020 年购自河北                 的两个组分洗脱液浓缩后分别装至截留分子量为3 500
        安国中药材市场，经广东药科大学中药学院刘基柱教                            Da的透析袋中，先用流动水透析48 h，再用水浸泡24 h，
        授鉴定为葫芦科植物黄瓜 C.satiuus L.的干燥成熟种                     每隔6 h换水1次（下同）；然后，将袋内溶液分别减压浓
        子；离子交换纤维素 DEAE Cellulose 52（粒径 50 μm）购             缩，冷冻干燥，即得到水、1 mol/L氯化钠溶液洗脱组分，
        自美国 Whatman 公司；分子量分别为 40 000、2 000、                分别命名为CCL-S、CCL-M，得率分别为8.00％、13.33％，
        500、70、40、10 kDa 的 葡 聚 糖 标 准 品（批 号 分 别 为           密封干燥保存。
        D91501054、 D91502032、 D91502032、 D91502032、            将 CCL-M 溶解于水中制成质量浓度为 0.03 g/mL
        D91502032、D91502032，纯度为 99.7％）和阴 离 子 交 换           的多糖样品溶液，以 4 750 r/min 离心 15 min，收集上清


        中国药房    2021年第32卷第4期                                               China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 4  ·433 ·
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