Page 25 - 《中国药房》2021年3期

图，详见图 1。由图 1 可见，STP 和内标的峰形良好且分 为 0.04、0.20、1.00、2.00、4.00、8.00、16.0 μg/mL 的系列脑
离完全，保留时间分别约为11、9 min；内源性杂质对STP 组织匀浆样品，按“2.4”项下方法处理后，再按“2.1”项下
检测无干扰，提示本方法专属性良好。 色谱条件进样分析，记录峰面积。以STP质量浓度（X 脑，
18 1.2 μg/mL）作为横坐标、STP峰面积与内标峰面积之比（Y 脑 ）
16 1.0
14 0.8
12 0.6 作为纵坐标进行回归，得到脑组织中STP的线性回归方
EU 10 8 EU 0.4
6 0.2 程为 Y 脑＝1.010 1X 脑+0.007 5（r＝0.999 4），表明其质量
4 0
2 －0.2
0 浓度的线性范围为 0.02～8.00 μg/mL；以标准曲线的最
0 2 4 6 8 10 12 14 0 2 4 6 8 10 12 14
t，min t，min 低点为脑组织中STP的定量下限，即0.02 μg/mL。
A.空白血浆 B.空白脑组织 2.7 精密度试验
2
20 100 2.7.1 血浆样品 取大鼠空白血浆，按“2.6.1”项下方法
16 80
12 60 配制STP定量下限和低、中、高质量浓度的血浆样品，按
EU 8 EU 40
4 1 20 “2.3”项下方法处理（最终理论质量浓度分别为 0.02、
0 0 0.05、2.00、6.00 μg/mL，下同），再按“2.1”项下色谱条件
0 2 4 6 8 10 12 14 0 2 4 6 8 10 12 14
t，min t，min 在同一天内连续检测5次，考察日内精密度；连续测定3
C.内标溶液（225 μg/mL） D. STP标准溶液（40 μg/mL）
d，考察日间精密度，结果见表1。
2 20 2
20 16 表1 含STP血浆样品的精密度和回收率试验结果
16
12
12 EU Tab 1 Results of recovery and precision tests of plas-
EU 8 8
4 1 4 1 ma samples containing STP
0 0
0 2 4 6 8 10 12 14 0 2 4 6 8 10 12 14 理论质量浓 日内RSD 日间RSD 提取回收率（n＝5），％ 方法回收率（n＝5），％
t，min t，min 度，μg/mL （n＝5），％ （n＝15），％ x±s RSD x±s RSD
E.空白血浆+内标（225 μg/mL）+ F.空白脑组织+内标（225 μg/mL）+
STP对照品（8 μg/mL） STP对照品（8 μg/mL） 0.02 2.55 3.45 93.89±4.64 4.94 96.64±3.53 3.65
0.05 2.43 2.98 95.64±4.28 4.48 96.42±4.42 4.58
1
16 3.5
14 3.0 2.00 1.01 1.65 97.46±3.64 3.73 98.35±3.54 3.60
12 2.5
10 2.0 6.00 1.02 1.43 97.75±2.04 2.09 99.63±2.69 2.70
EU 8 EU 1.5
6 2 1.0 2.7.2 脑组织样品 取大鼠空白脑组织，按“2.6.2”项下
4 1 0.5 2
2
0 0 方法配制 STP 定量下限和低、中、高质量浓度的脑组织
0 2 4 6 8 10 12 14 0 2 4 6 8 10 12 14
t，min t，min 样品，按“2.4”项下方法处理（最终理论质量浓度分别为
G.大鼠灌胃STP-SNEDDS 1 h后 H.大鼠灌胃STP-SNEDDS 0.5 h
的血浆样品 后的脑组织样品 0.02、0.05、2.00、6.00 μg/mL，下同），再按“2.1”项下色谱
注：1.内标；2.STP 条件在同一天内连续检测5次，考察日内精密度；连续测
Note：1. internal standard；2. STP 定3 d，考察日间精密度，结果见表2。
图1 不同生物样品的HPLC-FLR图 表2 含STP脑组织样品的精密度和回收率试验结果
Fig 1 HPLC-FLR chromatograms of different biolo-
Tab 2 Results of recovery and precision tests of brain
gic samples
tissue samples containing STP
2.6 标准曲线的制备及定量下限的考察 理论质量浓 日内RSD 日间RSD 提取回收率（n＝5），％ 方法回收率（n＝5），％
2.6.1 血浆样品 取大鼠空白血浆 80 μL，分别加入 度，μg/mL （n＝5），％ （n＝15），％ x±s RSD x±s RSD
0.02 3.76 4.87 94.87±3.84 4.05 96.34±3.53 3.66
“2.2.1”项下 STP 系列标准溶液 20 μL，配制成 STP 质量
0.05 3.48 3.65 95.03±3.53 3.71 96.42±3.21 3.33
浓度分别为 0.04、0.20、1.00、2.00、4.00、8.00、16.0 μg/mL 2.00 1.36 2.04 97.84±3.22 3.29 98.04±2.43 2.48
的系列血浆样品，按“2.3”项下方法处理后，再按“2.1”项 6.00 0.79 1.07 98.98±2.99 3.02 98.54±2.46 2.50
下色谱条件进样分析，记录峰面积。以STP质量浓度作 2.8 回收率试验
（X 血，μg/mL）为横坐标、STP 峰面积与内标峰面积之比 2.8.1 血浆样品 取大鼠空白血浆，按“2.6.1”项下方法
（Y 血 ）作为纵坐标进行线性回归，得到血浆中STP的线性 配制STP定量下限和低、中、高质量浓度的血浆样品，按
回归方程为 Y 血＝0.758 4X 血+0.050 9（r＝0.999 6），表明 “2.3”项下方法处理后，再按“2.1”项下色谱条件进样测
其质量浓度的线性范围为 0.02～8.00 μg/mL；以标准曲 定，记录峰面积。采用标准曲线法计算 STP 的质量浓
线的最低点为血浆中STP的定量下限，即0.02 μg/mL。 度，将其与相同质量浓度的STP标准溶液直接进样后的
2.6.2 脑组织样品 取大鼠空白脑组织适量，按“2.4”项 测定结果进行比较，计算提取回收率；将其与 STP 理论
下方法匀质、离心；取上清液 80 μL，分别加入“2.2.1”项 质量浓度进行比较，计算方法回收率，结果见表1。
下 STP 系列标准溶液 20 μL，配制成 STP 质量浓度分别 2.8.2 脑组织样品 取空白脑组织，按“2.6.2”项下方法

中国药房 2021年第32卷第3期 China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 3 ·275 ·