Page 24 - 《中国药房》2021年3期
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司替戊醇（Stiripentol，STP）用于治疗 2 周岁及以上               量（220±20）g，购自南通大学实验动物中心，动物生产
                                                      [3]
        的Dravet综合征患者的癫痫发作            [1－2] 。该药水溶性差 ，        许可证号为SCXK（苏）20190001。所有动物均饲养于可
        在胃肠道中溶出缓慢且不完全，在酸性环境下稳定性                             控的环境条件下，环境温度 24～25 ℃，湿度 50％～
        差，由于上述经口吸收的局限性，使得该药的日口服剂                            60％，光照/黑暗周期12 h/12 h。
        量较高 。自纳米乳化药物递送系统（Self-nanoemulsi-                   2 方法与结果
               [4]
        fying drug delivery system，SNEDDS）由油相、表面活性          2.1 色谱条件
        剂、助表面活性剂和药物构成，在胃肠道中可自发形成                                以Diamonsil C18 （150 mm×4.6 mm，5 μm）为色谱柱；
        纳米尺寸的水包油型乳液，从而增加机体对难溶性药物                            以乙腈-25 mmol/L KH2PO4水溶液[44∶56，（V/V），pH 2.6]
                [5]
        的 吸 收 。 本 课 题 组 前 期 研 制 了 STP 自 纳 米 乳               为流动相；流速为1.5 mL/min；激发波长为210 nm，发射
        （STP-SNEDDS），拟通过增加 STP 的组织浓度和跨血脑                    波长为400 nm；柱温为30 ℃；进样量为10 μL。
        屏障的浓度梯度差来提高其脑部生物利用度 ，因而需                            2.2 溶液的制备
                                                [6]
        开发一种特异性好、灵敏度高的体内分析方法，以便监                            2.2.1 STP标准溶液       精密称取STP对照品5 mg，置于
        测 STP 在血液和脑组织中的药物浓度。已有文献报道                          10 mL 量瓶中，用甲醇溶解并定容，得质量浓度为 500
        的STP生物样品测定方法包括高效液相色谱-紫外检测                           μg/mL 的 STP 对照品贮备液，置于 4 ℃冰箱保存、待用。
                     [2]
                                          [7]
        法（HPLC-UV） 、液质联用法（LC-MS） 和高效液相色                     使用前将上述贮备液用甲醇逐级稀释成质量浓度分别
        谱-荧光检测法（HPLC-FLR） 。其中，HPLC-UV 法的检                   为 0.20、1.00、5.00、10.0、20.0、40.0、80.0 μg/mL 的 STP 系
                                [8]
        测限约为1～2 μg/g，灵敏度较低；LC-MS法灵敏度虽较                      列标准溶液。
        高，但对设备要求较高，且单次分析时间长（约15 min）；                       2.2.2  内标溶液      精密称取占吨酮对照品 5 mg，置于
                             [9]
        HPLC-FLR 法灵敏度高 ，可用于定量分析生物样品中                        10 mL 量瓶中，用甲醇溶解并定容，得质量浓度为 500
        的STP。此外，笔者通过查阅文献发现，STP主要通过减                         μg/mL 的内标贮备液；再经甲醇适当稀释后，得质量浓
        少患儿大脑异常兴奋活动来发挥治疗作用，但有关其在                            度为225 μg/mL的内标溶液，置于4 ℃冰箱保存、待用。
        脑组织中分布的研究却很少 ，且尚无利用 UPLC-FLR                        2.3  大鼠血浆样品处理
                                 [10]
        法测定STP脑组织药物浓度的报道。基于此，本研究拟                               取室温解冻后的大鼠血浆样品100 μL，置于离心管
        建立生物样品的 HPLC-FLR 分析方法，并对分别给予                        中，加入内标溶液（225 μg/mL）100 μL，涡旋1 min后，以
        STP 及其自微乳后的大鼠血浆和脑组织药物浓度进行                           10 000 r/min 离 心 10 min，取 上 清 液 进 行 HPLC-FLR
        定量分析，以期为STP-SNEDDS的组织分布研究和进一                        分析。
        步开发利用提供参考。                                          2.4  大鼠脑组织样品处理
        1 材料                                                    取室温解冻后的大鼠脑组织样品0.1 g，置于离心管
        1.1  主要仪器                                           中，加入生理盐水0.3 g和乙腈0.6 g，使用生物样品均质
            实验用主要仪器包括Waters HPLC-FLR系统（包含                   仪进行均质（22 ℃，7 m/s，每次 6 s，共 20 个循环），然后
        1525型二元泵、2475型荧光检测器和717 Plus型自动进                    以10 000 r/min离心10 min；取上清液100 μL，置于另一
        样器，美国 Waters 公司）、TGL-16B 型离心机（上海安亭                  离心管中，加入内标溶液（225 μg/mL）100 μL，涡旋1 min
        科学仪器厂）、Bioprep-24 型生物样品均质仪（杭州奥盛                     后，以 10 000 r/min 离心 10 min，取上清液进行 HPLC-
        仪器有限公司）、BSM-220.4型分析天平（上海卓精电子                       FLR分析。
        科技有限公司）、XH-T 型涡旋混合器（金坛白塔新宝仪                         2.5 专属性考察
        器厂）等。                                                   取大鼠空白血浆和空白脑组织适量，分别按“2.3”
        1.2 主要药品与试剂                                        “2.4”项下方法处理后再按“2.1”项下色谱条件进样分
            实验用主要药品与试剂有：STP 对照品（武汉丰泰                        析；取“2.2”项下 STP 标准溶液（40 μg/mL）和内标溶液
        威远科技有限公司，批号20191121001，纯度99.5％）、占                  （225 μg/mL）分别按相同条件进样分析；取空白血浆+内
        吨酮对照品[内标，萨恩化学技术（上海）有限公司，批号                          标（225 μg/mL）+STP 对照品（8 μg/mL）的混合样品以及
        GA120106，纯度 98％]和 STP-SNEDDS[本课题组自制，                SD 大鼠灌胃 STP-SNEDDS 1 h 后的血浆样品按“2.3”项
        规格50 mg/mL（以STP计）]等；乙腈为色谱纯，其余试剂                     下方法处理后再按相同条件进样分析；取空白脑组织+
        均为分析纯，水为纯净水。                                        内标（225 μg/mL）+STP 对照品（8 μg/mL）的混合样品以
        1.3  动物                                             及 SD 大鼠灌胃 STP-SNEDDS 0.5 h 后的脑组织样品按
            实验用动物为SPF级健康SD大鼠，雌雄各半，体质                       “2.4”项下方法处理后再按相同条件进样分析，记录色谱


        ·274 ·  China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 3                                    中国药房    2021年第32卷第3期
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