Page 29 - 《中国药房》2021年3期

horizontal stripes disappearance，cell swelling burst and necrosis，and nuclei deformation displacement；the contents of ATP and
NAD ，mRNA expression of AMPK，SIRT1 and PGC-1 α ，protein expression of SIRT1 and PGC-1 α in cardiac tissue were
+
decreased significantly（P＜0.05 or P＜0.01）；the contents of ADP and AMP，the phosphorylation level of AMPK protein were
increased significantly（P＜0.01）. Compared with model group，myocardial pathological morphology were improved significantly
in TFDM group；the contents of ATP and NAD + in cardiac tissue，mRNA expression of AMPK，SIRT1 and PGC-1 α ，the
phosphorylation level of AMPK protein，the protein expression of SIRT1 and PGC-1α were increased significantly（P＜0.05 or P＜
0.01），while the contents of ADP and AMP were decreased significantly（P＜0.01）. Compared with TFDM group，improvement
effects of Compound C + TFDM group and EX-527 + TFDM group on above indexes were reversed （P＜0.05 or P＜0.01）.
CONCLUSIONS：TFDM may play a protective role on myocardium by activating AMPK/SIRT1/PGC-1α signaling pathway and
regulating energy metabolism.
KEYWORDS Dracocephalum moldavica total flavonoids；Energy metabolism；AMPK；SIRT1；PGC-1α；Mechanism

心肌缺血再灌注损伤（Myocardial ischemia-reperfu- 司），VE-180型垂直电泳及电转仪（上海天能科技有限公
sion injury，MIRI）是心脑血管疾病患者的主要死亡原因 司），ChemiDoc XRS+型凝胶成像系统（美国 Bio Rad 公
之一，会严重影响缺血性心脏疾病患者的预后；而且， 司），Rotor-Gene Q 型实时荧光定量-聚合酶链式反应
MIRI 的发病机制复杂，包括能量代谢障碍、自由基损 （PCR）仪（德国Qiangen公司）。
[1]
伤、钙超载和细胞凋亡等 ，而能量代谢又被认为是心肌 1.2 主要药品与试剂
细胞活动的物质基础 。腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK） 本研究所用主要药品与试剂有：TFDM 提取物（批
[2]
是调节能量代谢的核心分子，参与了多种代谢过程的调 号20141008，纯度57％，其中田蓟苷的含量为82.53 mg/g）
节 。沉默信息调节因子 1（SIRT1）是一种具有组蛋白 由新疆药物研究所提供；Compound C（AMPK 抑制剂，
[3]
脱乙酰化酶活性的转录调节因子，可感受机体的能量状 批号 S7840，纯度≥99％）、EX-527（SIRT1 抑制剂，批号
态，调节其他转录因子的表达，也参与了调节细胞代谢 S1541，纯度≥99％）均购自美国Selleck公司；乌拉坦（批
稳态和氧化应激损伤的过程 。过氧化物酶体增殖物激 号 20151106，纯度 95％）购自武汉远城科技发展有限
[4]
活受体γ辅激活因子 1α（PGC-1α）是 AMPK 和 SIRT1 的 公 司 ；ATP 二 钠 盐 对 照 品（批 号 SLBT6850，纯 度 ≥
下游靶蛋白，是线粒体生物合成、氧化代谢及细胞能量 99％）、腺 苷 二 磷 酸（ADP）二 钠 盐 对 照 品（批 号
稳态的关键调节分子 [5－6] 。 SLBM5638V，纯度≥95％）、腺苷一磷酸（AMP）钠盐对
香青兰总黄酮（Dracocephalum moldavica L. total 照品（批号BCBT3249，纯度≥99％）、烟酰胺腺嘌呤二核
flavonoids，简称“TFDM”）是从新疆特色资源香青兰植 苷酸（NAD ）对照品（批号 SLBT3662，纯度≥96.5％）均
+
物中提取得到的一类天然黄酮类活性成分，具有抗氧化 购自美国 Sigma 公司；兔源 AMPK 多克隆抗体（批号
及防治心脑血管疾病等作用 [7－9] 。本课题组前期研究发 ab131512）、兔源磷酸化 AMPK（p-AMPK）多克隆抗体
[7]
现，TFDM 对 MIRI 模型大鼠有明显的保护作用 ，可提 （批 号 ab23875）、鼠 源 SIRT1 单 克 隆 抗 体（批 号
高其心肌组织中腺苷三磷酸（ATP）的含量 ，增强其线 ab110304）、兔源PGC-1α多克隆抗体（批号ab191838）均
[8]
粒体活力以及改善其能量代谢紊乱、线粒体结构和功 购自美国Abcam公司；兔源甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAP-
[9]
能 。而AMPK/SIRT1/PGC-1α作为一条能量感应网络， DH）多克隆抗体（批号 10494-1-AP）购自武汉三鹰生物
可以通过感应机体能量及氧化应激状态从而在能量代 技术有限公司；辣根酶素标记山羊抗小鼠免疫球蛋白G
谢中发挥重要作用 [10－11] 。因此，本研究通过考察 TFDM （IgG）二抗（批号 141987）、辣根酶素标记山羊抗兔 IgG
对 MIRI 模型大鼠 AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路的影 二抗（批号 140193）购自北京中杉金桥生物技术有限公
响，探讨 TFDM 治疗 MIRI 的作用机制，为 TFDM 防治 司；二喹啉甲酸（BCA）蛋白定量测试盒（批号A045-4）购
MIRI提供潜在的治疗靶点及理论依据。 自南京建成生物工程研究所；聚偏二氟乙烯（PVDF）膜
1 材料 （批号R8PA2084）、ECL发光液（批号1923101）均购自美
1.1 主要仪器 国Millopore公司；cDNA逆转录试剂盒（批号00422714）
本研究所用主要仪器有：HX-300型动物呼吸机（成 购自美国 Thermo Fisher Scientific 公司；组织总 RNA 抽
都泰盟科技有限公司），Pico-17型台式低温离心机（美国 提 试 剂 盒（批 号 DP431）、QuantiNova TM SYBR Green
®
Thermo Fisher Scientific 公司），e2695 型高效液相色谱 PCR Kit 荧光定量 PCR 试剂盒（批号 154045739）均购自
（HPLC）仪、Alliance 2695 型二极管阵列检测器（美国 德国 Qiangen 公司；PCR 试验中的引物序列均由上海生
Waters公司），XL-200型低速离心仪器（江苏海门其林贝 工生物公司设计及合成；其余试剂均为分析纯或实验室
尔仪器厂），EM-UC6 型超薄型切片仪（美国 Leica 公 常用规格，水为蒸馏水。

中国药房 2021年第32卷第3期 China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 3 ·279 ·