Page 58 - 《中国药房》2021年2期

子式为 C18H16O5。进一步进行碎片扫描，发现主要碎片 160 S8
140 S7
离子m/z 270.315 0为准分子离子失去甲基后又失去CO
120 S6
[25]
中性分子所得。根据以上信息并参考相关文献 ，同时 100 S5
80
结合化合物极性，推测该化合物可能为 3′，4′-二甲氧 mV 60 S4
S3
基-3-羟基-6-甲基黄酮。 U， 40 S2
20 S1
化合物 6：保留时间为 67.494 min，在正离子模式下 0
+
出现准分子离子峰m/z 425.196 8[M+H] ，推测可能的分 －20
－40
子式为 C25H28O6。进一步进行碎片扫描，发现准分子离
子失去 1 分子 H2O 产生碎片离子 m/z 407.184 4，同时存 0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 56 60 64 68 72
t，min
在碎片离子 m/z 369.167 6 和 m/z 313.106 5，判断可能有 图7 DPPH自由基在线叠加图谱
[23]
两个异戊烯基。根据以上信息并参考相关文献 ，推测 Fig 7 DPPH free radical scavenging online superim-
该化合物为甘草宁E。
posed chromatograms
化合物 7：保留时间为 68.755 min，在正离子模式下
表4 DPPH清除率与在线叠加图谱倒峰峰面积
+
出现准分子离子峰m/z 421.163 9[M+H] ，推测可能的分
Tab 4 DPPH free radical scavenging rate and peak
子式为 C25H24O6。进一步进行碎片扫描，发现在 m/z
area of inverted peak by online superimposed
365.101 0处出现碎片离子，提示可能含有异戊烯基或准
chromatogram
[22]
分子离子失去两分子CO所致，结合文献 可知[M+H－
编号 DPPH清除率，％ 倒峰峰面积 编号 DPPH清除率，％ 倒峰峰面积
－
2CO] 为异黄酮的特征离子峰。根据以上信息并参考相 S1 56.47 1 080.680 7 S5 58.83 1 194.762 9
关文献 [21－22] ，推测该化合物为甘草宁H。 S2 57.40 1 086.539 5 S6 58.32 1 209.884 6
2.4 抗氧化活性成分检测方法的验证 S3 59.88 2 669.642 6 S7 55.71 943.357 7
S4 58.13 1 167.146 4 S8 60.17 2 732.242 4
取 8 批甘草饮片，按“2.2.1”项下方法制备供试品溶
液，再按“2.2.3”项下条件进样分析，采用《中药色谱指纹 有抗氧化活性，且多种药理活性与抗氧化活性密切相
图谱相似度评价系统（2012 版）》生成 8 批甘草饮片的 关 [16，30] 。目前，关于甘草抗氧化活性的研究较少，也尚无
HPLC叠加特征图谱。结果，8批甘草饮片均可检测出7 甘草抗氧化活性成分的相关研究。中药的质量控制需
以药效成分的辨识和确认为基础，只有科学合理的药效
种抗氧化活性成分。同时，结合表2中不同产地甘草饮
[31]
片的DPPH清除率结果，发现在线反应产生的倒峰峰面 成分研究才是保证中药安全有效的前提 。因此，本研
积与饮片的DPPH清除率呈正相关，提示可用倒峰峰面 究以提升饮片质量标准为目标，借助“中药活性成分色
积初步评价抗氧化活性成分的大小，详见图 6、图 7、 谱辨识”技术，建立了甘草饮片的HPLC-UV-DPPH 在线
表4。 检测方法，以用于甘草抗氧化活性成分的快速筛选。结
果，甘草饮片中共筛选出 7 种抗氧化活性成分，经
11
750
700 HPLC-TOF/MS 法鉴定分别为阿佛洛莫生、8-异戊烯基
650
600 柚皮素、黄羽扇豆魏特酮、半甘草异黄酮 B、3′，4′-二甲
550
500 氧基-3-羟基-6-甲基黄酮、甘草宁 E 和甘草宁 H。其中，
450 1 10 14
mV 400 2 3 9 12 13 17 阿佛洛莫生、8-异戊烯基柚皮素和半甘草异黄酮 B 已
U， 350 4 5 6 7 8 15 16 18
300 R [32－34]
250 S8 有抗氧化活性的相关报道 ，而黄羽扇豆魏特酮、3′，
S7
200 S6
150 S5 4′-二甲氧基-3-羟基-6-甲基黄酮、甘草宁 E 和甘草宁 H
100 S4
S3
50 S2 未见报道。DPPH 是一种稳定的以氮为中心的自由基，
0 S1
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 56 60 64 68 72 在517 nm波长处具有特征吸收，以DPPH甲醇溶液为流
t，min 动相，在517 nm波长下可得到平整的基线；当样品中存
图6 8批甘草饮片的HPLC叠加特征图谱
在可与自由基反应的成分时，其可与 DPPH 反应，通过
Fig 6 HPLC superimposed characteristic chromato-
DPPH 中的单电子配对而使其吸收逐渐消失，在色谱图
grams of 8 batches of G. uralensis docoction
上表现为负峰，利用该原理可进行抗氧化活性成分的在
pieces
线筛选。本研究中的8批甘草饮片的7种抗氧化活性成
3 讨论 分在其出现的对应时间处均表现为倒峰，且倒峰的峰面
在中药现代化研究领域中，抗氧化中药的研究占重 积与甘草饮片的DPPH清除率呈正相关，提示可通过比
要地位，已有针对清热类、补益类中药等抗氧化活性的 较倒峰峰面积来评价甘草饮片的抗氧化活性。
系列研究报道 [26－28] ，以及对中药中所含抗氧化活性成分 综上所述，所建方法简单、准确，可用于快速筛选并
[29]
的研究 。甘草作为临床应用较广泛的中药之一，具 鉴定甘草饮片的抗氧化活性成分，倒峰峰面积可用于评

·180 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 2 中国药房 2021年第32卷第2期