Page 44 - 《中国药房》2021年2期
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4.6 mm，5 μm）为色谱柱；以0.1％三乙胺水溶液（用磷酸 浓度的线性范围均为 0.05～12 mg/L（r＞0.99），定量下
调 pH 至 3.0）-乙腈（73 ∶ 27，V/V）为流动相；流速为 0.6 限均为0.5 mg/L，详见表1。
mL/min；柱温为 30 ℃；检测波长为 384 nm；进样量为 2.2.8 精密度与准确度试验 精密吸取空白血浆和空
10 μL。 白心、肝、脾、肺、肾、脑组织匀浆各 200 μL，按“2.2.7”项
2.2.2 系列标准溶液的配制 精密称取羟基喜树碱对 下方法制成定量下限（0.025 mg/L）以及低、中、高质量浓
照品适量，用甲醇溶解制成质量浓度为1 000 mg/L的贮 度（0.1、1、8 mg/L，浓度按预试验结果设置，下同）的血浆
备液，再用甲醇进一步稀释制成质量浓度分别为36、24、 样品和定量下限（0.05 mg/L）以及低、中、高质量浓度
18、12、6、3、1.5、0.3、0.15、0.075 mg/L 的系列标准溶液， （0.5、2、8 mg/L，浓度按预试验结果设置，下同）的组织样
于4 ℃下密封保存，备用。 品，按“2.2.5”项下方法处理后，再按“2.2.1”项下色谱条
2.2.3 内标溶液的配制 精密称取喜树碱对照品 1.0 件进样测定，记录峰面积。其中，同日内连续测定5次考
mg，置于10 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，制成 察日内精密度；每日测定1次、连续测定5 d考察日间精
质量浓度为 100 mg/L 的内标溶液，于 4 ℃下密封保存， 密度；以实测质量浓度与理论质量浓度的百分比考察准
备用。 确度，结果见表2。结果，血浆样品和各组织样品中羟基
2.2.4 血浆和组织匀浆的制备 于大鼠眼眶取血，采集 喜树碱的日内、日间 RSD 均小于 10％，准确度均大于
[7]
的血样置于含有肝素钠的离心管中，以6 000 r/min离心 75％，符合方法学要求 。
10 min，分离血浆，于－20 ℃下保存，备用。摘取大鼠 2.2.9 提取回收率 精密吸取空白血浆和空白心、肝、
心、肝、脾、肺、肾、脑，用生理盐水洗净，滤纸吸干水分， 脾、肺、肾、脑组织匀浆各 200 μL，按“2.2.8”项下方法制
称定质量后加生理盐水研磨，制成组织匀浆，于 4 ℃下 成低、中、高质量浓度的血浆样品和组织样品各5份，按
保存，备用。 “2.2.5”项下方法处理后，再按“2.2.1”项下色谱条件进样
2.2.5 样品预处理 精密吸取大鼠血浆或组织匀浆样 测定，记录羟基喜树碱与内标的峰面积之比（A1 ）；另取
品200 μL，置于2 mL离心管中，加入内标溶液20 μL，涡 空白血浆和空白心、肝、脾、肺、肾、脑组织匀浆各200 μL，
旋混匀3 min，再加入乙腈1.2 mL，静置5 min后，以6 000 按“2.2.5”项下方法处理后，加入羟基喜树碱标准溶液使
r/min离心10 min，吸取上清液1.0 mL，以氮气流吹干，残 其质量浓度与上述相同，进样测定，记录峰面积之比
渣用甲醇100 μL涡旋3 min复溶，经0.22 μm微孔滤膜滤 （A2 ），以 A1/A2×100％计算提取回收率，结果见表 3。结
过，取续滤液，待测。 果，血浆样品和各组织样品的提取回收率均大于 80％
2.2.6 专属性考察 取大鼠空白血浆和空白心、肝、脾、 （RSD＜10％，n＝5）。
肺、肾、脑组织匀浆样品，空白血浆和各组织匀浆+羟基 2.2.10 稳定性试验 按“2.2.8”项下方法制备低、中、高
喜树碱（6 mg/L）样品，大鼠尾静脉注射给药30 min后的 质量浓度的血浆样品和组织样品，分别于室温放置 24
含药血浆和含药组织匀浆样品，按“2.2.5”项下方法处理 h、－20 ℃放置24 h、反复冻融（－20℃～室温）3次后，按
（各空白生物样品不加内标）后，再按“2.2.1”项下色谱条 “2.2.5”项下方法处理，再按“2.2.1”项下色谱条件进样测
件进样测定，记录色谱图。结果，羟基喜树碱与内标色 定，记录峰面积。每样品重复测定5次，结果见表4。结
谱峰的峰形对称且分离度好，保留时间分别为 12.6、 果，血浆样品和各组织样品在上述条件下放置，稳定性
[7]
31.4 min，且无内源性杂质干扰，表明方法专属性好，详 良好（RSD＜10％，n＝5），符合方法学要求 。
见图1。 2.3 药动学实验
2.2.7 线性关系考察 精密吸取大鼠空白血浆和空白 取大鼠12只，适应性饲养1周后，禁食不禁水12 h，
心、肝、脾、肺、肾、脑组织匀浆各 200 μL，加入“2.2.2”项 随机分为受试组（给予自制羟基喜树碱纳米粒）和参照
下羟基喜树碱系列标准溶液适量，分别制成质量浓度分 组（给予市售羟喜树碱注射液），每组6只。各组大鼠均
别均为0.025、0.05、0.1、0.5、1、2、4、6、8、12、16 mg/L的系 单次尾静脉注射相应药物4 mg/kg（以羟基喜树碱计，剂
列血浆样品和0.05、0.1、0.5、1、2、4、6、8、12 mg/L的系列 量设置参考文献[8]），分别在给药后 5、30、60、120、240、
组织样品，按“2.2.5”项下方法处理后，再按“2.2.1”项下 360、480、600、720 min 时于眼底静脉丛取血 500 μL，分
色谱条件进样测定，记录峰面积。以待测成分质量浓度 离血浆，按“2.2.5”项下方法处理后，再按“2.2.1”项下色
（x，mg/L）为横坐标、待测成分与内标峰面积比值（y）为 谱条件进样测定，记录峰面积并代入回归方程计算各个
纵坐标进行线性回归。结果，血浆样品中羟基喜树碱检 时间点大鼠体内羟基喜树碱的血药浓度。使用DAS 3.0
测质量浓度的线性范围为 0.025～16 mg/L（r＞0.999）， 软件和Graphpad Prism 7软件计算羟基喜树碱的药动学
定量下限为 0.025 mg/L；各组织样品中该成分检测质量 参数并作图，采用 SPSS 19.0 软件进行统计分析。数据
·166 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 2 中国药房 2021年第32卷第2期
