Page 72 - 《中国药房》2021年第1期

将上述黄色膏状物以适量95％乙醇加热溶解，然后置于
4 ℃冰箱中，析出的白色晶体即为 Sit 粗品；再经 80％乙
[14]
醇反复重结晶后，得到纯化后的Sit（产率为2.32％） 。
2.2 Sit的鉴定和纯度检测
采用 HPLC 法进行检测。色谱条件：色谱柱为 Agi-
lent ODS C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水 图2 Sit的母核及其衍生物的结构
（98 ∶ 2，V/V）；柱温：40 ℃；流速：1.0 mL/min；检测波长： Fig 2 Mother nucleus of Sit and the structure of its
210 nm；进样量：10 μL。将 Sit 样品和 Sit 标准品分别以 derivatives
甲醇溶解，制备成质量浓度均为0.1 mg/mL的溶液，分别
动信号（υCH ），提示存在饱和烷烃基团；1 738 cm 处有羰
－1
按上述色谱条件进样测定，记录色谱图，并根据峰面积
基碳氧双键的伸缩振动信号（υ C＝O），提示存在羰基；
归一化法计算Sit的纯度。结果，制备的Sit样品与Sit标
1 629 cm 处有碳碳双键的伸缩振动信号，提示存在碳
－1
准品具有相同的保留时间，Sit样品的纯度为98.2％。色
碳双键（υ C＝C）；1 384、1 372 cm 处有甲基碳氢变形振
－1
谱图见图1。
1
动信号，提示有多个甲基存在。 H-NMR（300 MHz，
100
75 CDCl3 ）δ：5.377（d，1H，J＝4.8 Hz，6-H），4.681（m，1H，
mAU 50 2″-H），4.433（m，1H，3-H），4.025（dd，1H，J＝7.2、14.4
25
0 Hz，5″-Ha），3.940（m，1H，5″-Hb），1.010（s，3H，10-CH3 ），
0 5 10 15 20
t，min 0.922（d，3H，2′-CH3 ），0.859（t，3H，5′-CH3 ），0.813（d，6′，
A. Sit标准品
6′-CH3 ），0.668（s，3H，13-CH3 ）；2.343～0.753处的信号为
100
75 甾体母核、甾体17侧链和2-四氢糠酸中其他饱和碳上的
mAU 50 氢 信 号 。 C-NMR（75 MHz，CDCl3 ）δ ：172.67（C1′），
13
25
0
－25 139.41（C5），122.68（C6），76.79（C2″），74.33（C3），69.17
0 5 10 15 20
t，min （C5″），56.63（C14），56.01（C17），49.99（C9），45.82
B. Sit样品
（C24），42.25（C13），39.67（C12），37.95（C4），36.89
图1 高效液相色谱图 （C1），36.51（C10），36.06（C20），33.91（C22），31.81
Fig 1 HPLC chromatograms （C3″），30.12（C7，8），29.16（C25），28.13（C2），27.63
2.3 Sit衍生物的合成 （C23），26.13（C15），25.09（C4″），24.20（C16），23.04
按照文献报道的方法 ，本研究选用二氯甲烷为反 （C28），20.96（C11），19.70（C26），19.20（C27），18.98
[15]
应溶剂、DMAP 为催化剂、EDCI 为脱水剂，分别加入不 （C21），18.70（C18），11.89（C29），11.76（C19）。
同有机酸（水杨酸、2-四氢糠酸、苯丙氨酸、山梨酸），使 2.4.2 Sit-P 分子式为 C37H59NO3，分子量为 565。IR 光
之发生羧合反应生成酯类化合物。以水杨酸β-谷甾醇 谱：3 450 cm 处有氨基氮氢单键的伸缩振动信号，提示
－1
酯（Sit-S）为例的合成过程：将水杨酸 41.4 mg 和 Sit 83.0 有氨基存在；3 044 cm 处有碳氢键伸缩振动信号，提示
－1
mg 在 5 mL 二氯甲烷中混合后，加入脱水剂 EDCI 76.8 有碳氢键的存在；1 734、1 722 cm 处有羰基碳氧双键伸
－1
mg脱水10 min后，加入催化剂DMAP 7.4 mg，将该溶液 缩振动信号，提示有羰基存在；1 670 cm 处有双键碳碳
－1
加热回流6 h；减压除去溶剂，将残余物先在常温下通过 骨架伸缩振动信号，提示甾体母核中有双键的存在；
硅胶 254 色谱柱洗脱，然后再采用石油醚-二氯甲烷-乙 1 384、1 370 cm 处有甲基碳氢变形振动信号，提示有多
－1
1
酸乙酯（7 ∶ 7 ∶ 1，V/V/V）洗脱，得到浅黄色油状胶体（95.8 个甲基存在。 H-NMR（300 MHz，CDCl3 ）δ：7.311（m，
mg），即为Sit-S。同法制备2-四氢糠酸、苯丙氨酸、山梨 2H，3′，5′-H），7.276（m，2H，2′，6′-H），7.140（m，1H，
酸与 Sit 生成的酯类衍生物 Sit-T、Sit-P、Sit-Sr。通过 4′-H），5.371（d，1H，J＝4.8 Hz，6-H），5.034（d，1H，J＝
HPLC法确定4种衍生物的纯度均大于98％。Sit的母核 8.1 Hz，2′-NH），4.642（m，1H，3-H），3.080（m，1H，2′-H），
及其衍生物的结构见图2。 1.416[s，3H，1″″ -（CH3 ） 3]，1.001（s，3H，18-H），0.936（d，
2.4 Sit衍生物的结构确证 3H，J＝6.6 Hz，21-H），0.873（t，3H，J＝7.2 Hz，29-H），
采用傅里叶变换红外光谱法（IR）和核磁共振氢谱 0.828（d，6H，J＝6.6 Hz，26，27-H），0.679（s，3H，19-H）；
（H-NMR）、碳谱（ C-NMR）等技术对化合物进行结构 2.383～0.767 处的信号为甾体母核、甾体17侧链和2-丁
13
1
13
确证。 基羰基氨基苯丙酸基团中其他饱和碳上的氢信号。 C-
2.4.1 Sit-T 分子式为 C34H56O4，分子量为 528。IR 光 NMR（75 MHz，CDCl3 ）δ：171.14（C1′），154.98（C1″′ ），
－1
谱：2 964～2 888 cm 处有饱和烷烃的碳氢单键伸缩振 139.30（C5），136.06（C1″），129.36（C3″，5″），128.34（C2″，

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