Page 26 - 《中国药房》2021年第1期
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量，使用血细胞计数仪检测其白细胞（WBC）、红细胞 毛顺，饮水量、进食量正常，且各给药组的小鼠瘤体质
（RBC）、血小板（PLT）计数；另取血样适量，分离血清后， 量，CTX 组的 TI、SI 以及各联用组的 TI 均显著降低；但
使用全自动生化分析仪检测小鼠血清中ALT、AST、Scr、 LEL组、LEH组的瘤体质量，各LE单用组及各联用组的
BUN的含量，严格按相应试剂盒说明书方法操作。 TI、SI 均显著高于 CTX 组，各联用组的瘤体质量均显著
2.4.3 肿瘤组织中 MDA 含量和 SOD、GSH 活性 对联 低于 CTX 组（P＜0.05 或 P＜0.01）。各给药组的抑瘤率
合用药与单用 CTX 的治疗作用进行比较。取模型组、 为 29.58％ ～72.08％ ，CTX + LEL 组 、CTX + LEM 组 、
CTX 组和 CTX+LEL、CTX+LEM、CTX+LEH 组小鼠的 CTX+LEH 组的 q 值分别为 1.03、0.97、0.86，提示两药联
肿瘤组织适量，置于冰盘上，用4 ℃生理盐水清洗，用滤 用时抑瘤作用相加，详见表1。
纸吸干后，用生理盐水于冰浴上制成 10％的组织匀浆， 表1 LE或CTX单用及两者联用对H22荷瘤小鼠的抑
于4 ℃下以3 500～4 000 r/min离心10 min。取上清液， 瘤作用（x±±s，n＝10）
采用考马斯亮蓝法测定蛋白含量，采用比色法以全自动 Tab 1 Antitumor effects of LE or CTX alone and
生化分析仪测定 MDA 含量和 SOD、GSH 活性，严格按 combination on H22 tumor-bearing mice（x±±
相应试剂盒说明书方法操作。 s，n＝10）
2.4.4 肿瘤组织中 VEGF、TNF-α、IL-6 水平 对联合用 组别 剂量，g/kg 体质量，g 瘤体质量，g TI，mg/10 g SI，mg/10 g 抑瘤率，％ q
药与单用 CTX 的治疗作用进行比较。取模型组、CTX 正常组 36.85±4.36 31.71±4.05 40.75±6.30
模型组 41.45±2.81 2.40±0.34 29.34±4.40 41.91±5.58
组和 CTX+LEL、CTX+LEM、CTX+LEH 组小鼠的肿瘤 CTX组 0.02 36.15±5.61 1.21±0.18 ## 10.11±2.26 ## 30.07±6.39 ## 49.58
ΔΔ
组织适量，按“2.4.3”项下方法制备肿瘤组织匀浆，以 LEL组 0.6 37.51±4.17 1.69±0.36 #Δ 26.70±5.32 48.39±10.33 ΔΔ 29.58
ΔΔ
LEM组 1.2 38.86±2.70 1.26±0.33 ## 28.41±3.39 43.66±7.47 ΔΔ 49.15
3 000 r/min 离心 10 min。取上清液，采用 ELISA 法以酶
LEH组 2.4 38.56±5.40 1.59±0.25 #Δ 27.80±4.81 48.83±5.94 ΔΔ 33.75
ΔΔ
标仪检测 VEGF、TNF-α、IL-6 水平，严格按照相应试剂 CTX+LEL组 0.02+0.6 37.39±5.08 0.80±0.11 ##ΔΔ 20.70±2.12 35.41±8.42 Δ 66.67 1.03
##ΔΔ
#ΔΔ
盒说明书方法操作。 CTX+LEM组 0.02+1.2 36.72±3.89 0.67±0.13 ##ΔΔ 23.57±2.50 40.49±4.48 Δ 72.08 0.97
CTX+LEH组 0.02+2.4 37.38±4.26 1.02±0.34 ##Δ 21.28±1.85 39.31±5.32 Δ 57.50 0.86
##ΔΔ
2.4.5 肿瘤组织中癌基因蛋白的表达 采用免疫组化
Δ
注：与模型组比较，P＜0.05，P＜0.01；与CTX组比较，P＜0.05，
#
##
法对抑瘤率最高的联合用药组与单用 CTX 的治疗作用
ΔΔ
P＜0.01
进行比较。取模型组、CTX组和CTX+LEM组小鼠肿瘤 Note：vs. model group，P＜0.05，P＜0.01；vs. CTX group，，P＜
#
##
Δ
组织适量，行常规切片（厚度约3 μm），脱蜡，经乙醇梯度 0.05，P＜0.01
ΔΔ
水化，用 3％过氧化氢溶液孵育以阻断内源性过氧化物 3.2 LE与CTX联用对H22荷瘤小鼠肝、肾功能和骨髓
酶；行抗原修复后，加入 p53、Bcl-2、Bax 一抗（稀释度均 抑制的影响
为1 ∶ 50），4 ℃孵育过夜；PBS清洗3次，加入二步法检测 与正常组比较，模型组小鼠的WBC计数、AST含量
试剂 50 μL，室温孵育 15 min；PBS 清洗 3 次，以 DAB 试 均显著升高，ALT、BUN含量均显著降低（P＜0.05或P＜
剂显色；经水洗、苏木精复染、脱水、封片后，使用倒置显 0.01）；与模型组比较，CTX组小鼠的WBC计数和AST、
微镜观察。p53、Bcl-2、Bax 均定位于细胞核，故以细胞 BUN含量均显著降低（P＜0.05或P＜0.01），而各联用药
核中出现明显的棕黄色颗粒者为阳性表达，不着色或着 组小鼠上述各指标均无显著变化（P＞0.05）；与 CTX 组
色浅而不显著者为阴性。采用Image J 1.48软件分析上 比较，各联用药组小鼠的 WBC 计数和 AST 含量以及
述蛋白阳性表达的平均积分光密度（IOD）值，用以表示 CTX+LEM 组小鼠的 ALT 含量均显著升高（P＜0.05 或
蛋白表达水平。 P＜0.01），详见表2。
2.5 统计学方法 3.3 LE与CTX联用对H22荷瘤小鼠肿瘤组织中MDA
采用SPSS 22.0软件对数据进行统计分析。计量资 含量和SOD、GSH活性的影响
料均采用 x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析 与模型组比较，各联用组小鼠肿瘤组织中的 MDA
（ANOVA），组间两两比较采用 t 检验。P＜0.05 为差异 含量均显著降低，各给药组的 SOD、GSH 活性均显著升
有统计学意义。 高（P＜0.05 或 P＜0.01）；与 CTX 组比较，CTX+LEH 组
3 结果 的 MDA 含量显著降低，CTX+LEH 组的 SOD 活性和
3.1 LE 或 CTX 单用及两者联用对 H22 荷瘤小鼠的抑 CTX+LEM 组的 GSH 活性均显著升高（P＜0.05），详见
瘤作用 表3。
模型组小鼠精神不佳，且伴有多饮、多食的症状，但 3.4 LE 与 CTX 联 用 对 H22 荷 瘤 小 鼠 肿 瘤 组 织 中
体质量、TI、SI 与正常组比较差异均无统计学意义（P＞ VEGF、TNF-α、IL-6水平的影响
0.05）。与模型组比较，各给药组小鼠精神状态良好，皮 与模型组比较，各给药组小鼠肿瘤组织中的VEGF、
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