Page 25 - 《中国药房》2021年第1期
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EG1150 型病理组织包埋机（上海莱卡仪器有限公司）；                       （mL/g）水，混合，匀浆。匀浆后，以 2 000 r/min 离心 10
        FD-1A-50 型冷冻干燥机（北京博医康试验仪器有限公                       min，收集上清液。残渣按上述步骤重复提取1次，合并
        司）；H1850R 型台式高速冷冻离心机（湖南湘仪实验室                       上清液。经鲎试剂检测内毒素后，加入 Triton X-114 试
        仪器开发有限公司）；ZNY-686型多功能提取浓缩机（青                       剂适量以去除内毒素，以 3 000 r/min 离心 10 min，吸取
        州市精诚医药装备制造有限公司）；MS1 型涡旋混匀器                         上清液并将其置于－20 ℃冷冻过夜，再于－45 ℃冷冻
       （广州仪科技术有限公司）；HH-4型数字恒温水浴箱（常                         干燥，得冻干粉。将上述冻干粉研磨，过 20 目筛，即得
        州国华电器有限公司）；ML304T 型万分之一电子天                         LE（每克虫体可得LE冻干粉0.138 25 g），于室温下密封
        平[梅特勒-托利多国际贸易（上海）有限公司]。                            保存，备用。
        1.2 药品与试剂                                          2.2 造模
            蛞蝓购自广西壮族自治区百色市灵山县农贸市场，                             将小鼠肝癌 H22 瘤株复苏，按文献方法 接种于小
                                                                                                  [9]
        经由广西医科大学第一附属医院药理学教研室黄仁彬                            鼠腹腔，体内传代至第 4 代。抽取上述第 4 代接种肝癌
        教授鉴定为腹足纲柄眼目蛞蝓科动物蛞蝓A. agrestis L.                   H22瘤株小鼠第7天时的腹水，用生理盐水稀释，制成密
        的冰鲜虫体，于－20 ℃冻存，备用。                                 度为2×10 个/mL的肿瘤细胞悬液。于小鼠左腋皮下迅
                                                                    7
            注射用环磷酰胺（江苏恒瑞医药有限公司，批号：                         速单次接种该细胞悬液0.2 mL，并以接种后小鼠左腋下
        17011325，规格：0.2 g）；丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸                出现肉眼可见的瘤组织（大约于注射后 6 d 时）为造模
        转氨酶（AST）、血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）检测试剂                     成功。
        盒，总蛋白定量试剂盒以及还原型谷胱甘肽（GSH）、丙                         2.3 分组与给药
        二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）检测测试盒（南京                           将小鼠随机分为9个组，即正常组，模型组，CTX组
        建成生物工程研究所，批号：C009-2、C010-2、C011-2、                 （0.02 g/kg，以生理盐水制成相应药液，剂量设置参考文
        C013-2、20171130、20171125、20171129、20180113）；鲎      献方法 ），LE低、中、高剂量联用组（即LEL、LEM、LEH
                                                                 [10]
        试剂（湛江安度斯生物有限公司，批号：1711041）；Triton                  组，0.6、1.2、2.4 g/kg，以提取物质量计；以生理盐水制成
        X-114试剂（北京索莱宝科技有限公司，批号：T8210）；血                    相应药液，剂量设置参考文献方法 ），CTX+LE低、中、
                                                                                         [10]
        管内皮生长因子（VEGF）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白                     高剂量联用组（即 CTX+LEL、CTX+LEM、CTX+LEH
        细胞介素 6（IL-6）酶联免疫吸附测定（ELISA）检测试剂                    组，剂量及其设置依据同各单药组），每组10只。除正常
        盒（ 上 海 源 叶 生 物 科 技 有 限 公 司 ，批 号 均 为                组小鼠接种等体积生理盐水外，其余组小鼠均按“2.2”项
        E20171201A）；兔抗人 p53、Bcl-2、Bax 单克隆抗体（福州             下方法接种肿瘤细胞悬液以复制荷瘤模型。接种 24 h
        迈 新 生 物 技 术 开 发 有 限 公 司 ，批 号 ：170705142C、          后，正常组和模型组小鼠均灌胃生理盐水（0.2 mL/10
        170705100C、170705023D）；PV6001 兔二步法检测试剂             g），各给药组小鼠分别腹腔注射 CTX 或/和灌胃 LE（腹
        盒、DAB 显色试剂盒（北京中山生物技术有限公司）；磷                        腔注射和灌胃体积均为0.2 mL/10 g，各联用组总给药体
        酸盐缓冲液（PBS，pH 7.4）、Mayor’s苏木精染液（武汉博                 积为0.4 mL/10 g），每日1次，连续10 d。
        士德生物工程有限公司）；氯化钠注射液（中国大冢制药                          2.4  指标检测
        有限公司，批号：OB79B3，规格：10 mL∶0.09 g；作生理盐                2.4.1  抑瘤作用指标        末次给药后第 2 天，观察小鼠一
        水用）；甲醛、二甲苯、乙醇等试剂均为分析纯或实验室                          般情况，称取其体质量并于眼球取血适量后，将其处死，
        常用规格，水为超纯水。                                        剥脱瘤块，称取瘤体质量并计算抑瘤率：抑瘤率（％）＝
        1.3 细胞                                             （C－T）/C×100％（式中，C 为模型组小鼠的平均瘤体质
            小鼠肝癌 H22 瘤株由广西医科大学药理学教研室                       量，T为各给药小鼠的平均瘤体质量）。采用金氏公式                      [11]
        提供。                                                来评估联合用药的效果（q）：q＝EAB/[EA+（1－EA ）EB]（式
        1.4 动物                                             中，EA是 A 药的抑瘤率，EB是 B 药的抑瘤率，EAB是 A、B
            SPF级昆明种小鼠，雄性，体质量（20±2）g，由广西                    两药联合使用时的抑瘤率）。当q为0.85～1.15时，表示
        医科大学实验动物中心提供，动物使用许可证号：SYXK                         两药作用相加；当q＞1.15时，表示两药作用协同；当q＜
        桂2014-0003。本研究经广西医科大学实验动物伦理委                       0.85时，表示两药作用拮抗 。剖取小鼠胸腺和脾脏，称
                                                                                  [11]
        员会批准，研究方案符合我国动物实验伦理相关指导原                           其质量，计算胸腺指数（TI）、脾指数（SI）：TI或SI（mg/10
        则 的要求。                                             g）＝胸腺或脾脏质量/体质量。
          [8]
        2 方法                                               2.4.2  肝、肾功能和骨髓抑制指标             对联合用药与单用
        2.1  LE的制备                                         CTX 的治疗作用进行比较。取正常组、模型组、CTX 组
            将冻存的蛞蝓于室温下解冻 1.5 h 后，加入 2 倍量                   和 CTX+LEL、CTX+LEM、CTX+LEH 组小鼠的血样适


        中国药房    2021年第32卷第1期                                                China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 1  ·19 ·
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