Page 31 - 《中国药房》2021年第1期
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非 酒 精 性 脂 肪 肝 病（Non-alcoholic fatty liver di-  teintech 公司，批号：HRP-60004）；鼠源核因子κB p65
        sease，NAFLD）是指排除过量饮酒等明确肝损伤因素，                      （NF-κB p65）单克隆抗体、辣根过氧化物酶标记的山羊
                                                     [1]
        以肝细胞内脂肪过度沉积为特征的临床病理综合征 ，                           抗兔IgG二抗（美国CST公司，批号分别为6959、7074）；
        其疾病谱包括非酒精性单纯性脂肪肝（NAFL）、非酒精                         兔源肿瘤坏死因子α（TNF-α）多克隆抗体、兔源白细胞介
        性脂肪性肝炎（NASH）和脂肪性肝硬化。其中，NASH                        素6（IL-6）多克隆抗体、通用型组织固定液（武汉塞维尔
                                                [2]
        是NAFL发展为脂肪性肝硬化的重要过渡阶段 。据统                          生物科技有限公司，批号分别为 GB13188-1、GB11117、
        计，约 30％～40％的 NASH 患者合并有肝脏纤维化，                      G1101）；总胆固醇（TC）、TG、天冬氨酸转氨酶（AST）、丙
        10％～15％的 NASH 患者可发展为肝硬化，而约 9％～                     氨酸转氨酶（ALT）检测试剂盒（南京建成生物工程研究
        26％的NASH合并肝硬化的患者在随访的4～10年内死                        所，批号分别为 A111-1-1、A110-1-1、C010-2、C009-2）；
        亡；此外，NASH发病机制复杂，严重情况下可发展为肝                         BCA 蛋白定量试剂盒、ECL 超敏化学发光液、M-PER                  TM
        癌  [3-4] 。目前，NASH 的防治重点为控制饮食和加强运                   哺乳动物蛋白抽提试剂（美国Thermo Fisher Scientific公
          [5]
        动 ，临床尚无疗效确切的防治药物，现有药物大多只能                          司，批号分别为23227、34580、78501）；蛋白酶抑制剂（北
        发挥辅助作用，且临床应用有所局限 。因此，如何有效                          京康为世纪生物科技有限公司，批号：40417）；十二烷基
                                       [1]
        防治NASH已成为广受关注的肝病医学难题                  [6-7] 。      硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）试剂盒（美国
            雷公藤红素（Celastrol）是来源于卫矛科植物雷公藤                   EpiZyme Scientific 公司，批号：18D250）；四甲基乙二胺
        Tripterygium wilfordii Hook. f.的一种醌甲基三萜类化合         （TEMED，美国 Amresco 公司，批号：110-18-9）；苏木精-
        物，具有抗炎、抑制免疫、抗肿瘤等药理作用 。近年来，                         伊红（HE）染色试剂盒、油红O染色液（北京索莱宝科技
                                             [8]
        冯泽民等 研究发现，雷公藤红素能通过调节脂质合成                           有限公司，批号分别为G1121、G1260）；其余试剂为分析
                [9]
        及氧化反应来降低 HepG2 细胞中三酰甘油（TG）的水                       纯或实验室常用规格，水为去离子水。
        平；在进一步的动物实验中，有学者发现，雷公藤红素能                          1.3  动物
        通过调控肝脏脂质代谢来改善高脂饮食诱导小鼠的                                 SPF 级野生型 C57BL/6J 小鼠，雄性，6 周龄，体质量
        NAFLD 。因此，综合其抗炎和调节脂质代谢的作用，                         20～25 g，购自湖北省实验动物研究中心，动物使用许可
              [10]
        笔者推测该化合物对 NASH（即 NAFLD 较为严重的阶                      证号：SCXK（鄂）2015-0018。蛋氨酸-胆碱充足（MCS）
        段）具有一定的防治作用；同时，在常用的蛋氨酸-胆碱                          和MCD饮食均由江苏南通特洛菲饲料科技有限公司提
        缺乏（MCD）饮食诱导的NASH动物模型中，有关雷公藤                        供。所有小鼠均饲养于 SPF 屏障环境中。本研究操作
        红素的治疗作用及其机制也未见相关报道。基于此，本                           均符合湖北中医药大学动物实验的相关规定。
        研究通过 MCD 诱导构建 NASH 小鼠模型，考察预防性                      2 方法
        使用雷公藤红素对小鼠相关指标的影响及可能机制，以                           2.1  分组、造模与给药
        期为该化合物防治NASH提供理论依据，促进其资源的                              将 28 只小鼠随机分为 4 组，即正常对照组、模型组
        进一步开发和利用。                                          和雷公藤红素低、高剂量组，每组7只。对照组小鼠给予
        1 材料                                               MCS 饮食，其余各组小鼠给予 MCD 饮食以复制 NASH
        1.1  仪器                                            模型；与此同时，雷公藤红素低、高剂量组小鼠按 0.5、1
            VCX750 型 超 声 波 破 碎 仪（美 国 Sonics 公 司）；          mg/（kg·d）（以聚氧乙烯蓖麻油为溶剂，剂量设置参考本
        CKX31 型倒置显微镜（日本 Olympus 公司）；Trans-Blot             课题组前期预实验结果）灌胃相应药物，正常对照组和
        Turbo 型全能型蛋白转膜仪、Power Pac Basic 型电泳                模型组小鼠均灌胃聚氧乙烯蓖麻油。灌胃体积均为0.1
             TM
        仪、xMark型全波长酶标仪（美国Bio-Rad公司）；Allegra                mL/g，每日1次，连续4周。
        64R 型高速冷冻离心机（美国 Beckman Coulter 公司）；               2.2 样本采集
        XB220A 型分析天平（瑞士 Precisa 公司）；GBOX 型成像                   末次给药后，各组小鼠均禁食、不禁水12 h，摘取一
        分析系统（美国 Syngene 公司）；Vortex-Genie2 型漩涡混             侧眼球取血。血样于冰浴中静置 0.5 h 后以 2 000 r/min
        合器（美国Scientific Industries公司）。                     离心 5 min，分离血清，备用。取血后颈部脱臼处死小
        1.2 药品与试剂                                          鼠，剥离完整的肝脏，用生理盐水洗净后，观察并记录肝
            雷公藤红素原料药（成都普思生物科技股份有限公                         脏的外观形态。随机选取肝组织适量，置于组织固定液
        司，批号：PS161108-01，纯度：＞98％）；聚氧乙烯蓖麻油                  中固定，剩余肝组织置于－80 ℃冰箱保存，备用。
       （上海阿拉丁生化科技有限公司，批号：C107105）；0.9％                     2.3 肝组织病理学观察
        氯 化 钠 注 射 液（河 南 科 伦 药 业 有 限 公 司 ，批 号 ：                 取固定于组织固定液中的肝组织适量，经常规石蜡
        C16091602-1，规格：500 mL∶ 4.5 g；作生理盐水用）；鼠源            包埋后切片（厚度约 4 μm），分别用 HE、油红 O 染色后，
        甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）单克隆抗体（美国 Pro-                    置于显微镜下观察其病理学变化。


        中国药房    2021年第32卷第1期                                                China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 1  ·25 ·
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