Page 65 - 《中国药房》2020年第24期
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2.4.2  对照品溶液的制备          精密称取β-蜕皮甾酮对照              0.08％、0.08％、0.08％、0.08％、0.09％、0.08％、0.07％。
        品2.74 mg，置于2 mL量瓶中，用甲醇定容，混匀，制得质                    2.5 指纹图谱的建立
        量浓度为1.37 mg/mL 的对照品溶液。                             2.5.1 供试品溶液的制备          同“2.4.1”项。
        2.4.3  色谱条件     色谱柱：Inertsil C18 （250 mm×4.6 mm，   2.5.2 色谱条件      同“2.4.3”项。
        5 μm）；流动相：乙腈（A）-水（B），梯度洗脱（0～13 min，                2.5.3  精密度试验       取“2.5.1”项下供试品溶液（编号：
        5％A→23％A；13～20 min，23％A→25％A；20～26 min，            S4），按“2.5.2”项下色谱条件连续进样测定6次，记录峰
        25％A→26％A；26～37 min，26％A→50％A；37～52                面积。以β-蜕皮甾酮（10号峰）为参照，计算各共有峰的
        min，50％A→73％A；52～54 min，73％A→87％A；54～              相对保留时间和相对峰面积。结果，24个共有峰相对保
        60 min，87％A→95％A；60～65 min，95％A）；检测波长：             留时间和相对峰面积的 RSD 均小于 3％（n＝6），表明方
        225 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。            法精密度良好。
        2.4.4  系统适用性试验        取供试品溶液、对照品溶液和                2.5.4  重复性试验       精密称取样品（编号：S4）粉末，约
        空白溶液（甲醇）各适量，按“2.4.3”项下色谱条件进样                       1 g，共 6 份，按“2.5.1”项下方法制备供试品溶液，再按
        测定，记录色谱图。结果，β-蜕皮甾酮的理论板数大于                         “2.5.2”项下色谱条件进样测定，以β-蜕皮甾酮为参照，
        6 000，与邻峰基线分离，分离度大于 1.5，且空白溶液对                     计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积。结果，24
        测定无干扰（图略）。                                         个共有峰相对保留时间和相对峰面积的 RSD 均小于
        2.4.5  线性关系考察        精密量取“2.4.2”项下对照品溶             3％（n＝6），表明方法重复性良好。
        液 0.05、0.1、0.15、0.2、0.25、0.3、0.35 mL，置于 1 mL 量瓶    2.5.5  稳定性试验       取“2.5.1”项下供试品溶液（编号：
        中，加甲醇定容，混匀，按“2.4.3”项下色谱条件进样测                       S4），分别于室温下放置0、2、4、8、12、24 h时按“2.5.2”项
        定，记录色谱图。以β-蜕皮甾酮质量浓度（X，µg/mL）为                      下色谱条件进样测定，记录峰面积。以β-蜕皮甾酮为参
        横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归。结果，β-蜕                        照，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积。结
                                             2
        皮甾酮的回归方程为 Y＝17.12X－310.9（R ＝0.999 0），              果，24 个共有峰相对保留时间和相对峰面积的 RSD 均
        表明β-蜕皮甾酮检测质量浓度的线性范围为 68.5～                         小于 3％（n＝6），表明供试品溶液于室温下放置 24 h 内
        479.5 µg/mL。                                       稳定性良好。
        2.4.6  精密度试验      取“2.4.1”项下供试品溶液（编号：              2.5.6  指纹图谱的生成        取10批样品粉末，按“2.5.1”项
        S10）适量，按“2.4.3”项下色谱条件连续进样测定 6 次，                   下方法制备供试品溶液，再按“2.5.2”项下色谱条件进样
                                                           测定，将所得图谱数据导入《中药色谱指纹图谱相似度
        记录峰面积。结果，β-蜕皮甾酮峰面积的RSD为1.00％
                                                           评价系统（2012 版）》，以 S1 为参照图谱（S1 样品中各色
       （n＝6），表明方法精密度良好。
                                                           峰分离度良好且对应峰面积稳定），采用中位数法，设定
        2.4.7  重复性试验      取样品（编号：S10）粉末，约1 g，共
                                                           时间窗宽度为 0.1，进行多点校正和标记峰（Mark 峰）匹
        6份，按“2.4.1”项下方法制备供试品溶液，再按“2.4.3”项
                                                           配 ，得到 HPLC 叠加指纹图谱、对照指纹图谱、对照品
                                                             [13]
        下色谱条件进样测定，记录峰面积并按标准曲线法计算
                                                           溶液的 HPLC 图，详见图 2～图 4。结果，10 批样品共有
        样品含量。结果，β-蜕皮甾酮含量的RSD为0.87％（n＝
        6），表明方法重复性良好。                                      共有峰24个。
                                                             3 000
        2.4.8  稳定性试验      取“2.4.1”项下供试品溶液（编号：
                                                             2 500
        S10）适量，分别于室温下放置 0、2、4、6、8、12、24 h 时按
                                                             2 000
       “2.4.3”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，β-
                                                            mV  1 500
        蜕皮甾酮峰面积的RSD为0.83％（n＝7），表明供试品溶                       U，
                                                             1 000
        液于室温下放置24 h内稳定性良好。
                                                              500
        2.4.9  加样回收率试验         取已知含量的样品（编号：
        S10）粉末，约 1 g，共 9 份，精密称定，按已知量的 50％、                     0
                                                                      8    16   24   32   40   48   56   64
        100％ 、150％ 加 入“2.4.2”项 下 对 照 品 溶 液 适 量 ，按                                   t，min
       “2.4.1”项下方法制备供试品溶液，再按“2.4.3”项下色谱                      图2 10批怀牛膝饮片样品的HPLC叠加指纹图谱
        条件进样测定，记录峰面积并计算加样回收率。结果，                           Fig 2 HPLC superposition fingerprint of 10 batches
        β- 蜕 皮 甾 酮 的 平 均 加 样 回 收 率 为 100.34％（RSD＝                 of A. bidentata decoction pieces
        2.12％，n＝9）。                                        2.5.7  相似度评价       采用《中药色谱指纹图谱相似度评
        2.4.10 β-蜕皮甾酮的含量测定            取 10 批样品粉末适          价系统（2012 年版）》对 10 批样品进行相似度评价。结
        量，约 1 g，按“2.4.1”项下方法制备供试品溶液，再按                     果，10批样品的相似度分别为0.995、0.991、0.987、0.979、
       “2.4.3”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并按标准曲                        0.969、0.997、0.983、0.975、0.998、0.990，表明 10 批样品
        线法计算样品含量，平行测定3次。结果，10批样品中β-                        与对照指纹图谱的相似度较高，总体化学成分差异
        蜕皮甾酮的平均含量分别为 0.07％、0.07％、0.08％、                    较小。


        中国药房    2020年第31卷第24期                                            China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 24  ·3003 ·
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