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表3 各组小鼠肝组织中NLRP3/NF-κB及TGF-β/smad信号通路蛋白表达及磷酸化水平测定结果(x±±s,n=10)
        Tab 3 Protein expression of NLRP3/NF-κB and TGF-β/Smad singaling pathway in liver tissue of mice in each
               group(x±±s,n=10)
        组别        NLRP3       ASC        Caspase-1   IL-1β   p-NF-κB p65/NF-κB p65  p-IκBα/IκBα  TGF-β1  p-Smad3/Smad3
        空白对照组    0.24±0.05   0.21±0.07  0.27±0.07   0.26±0.06  0.29±0.08   0.28±0.11  0.19±0.04   0.32±0.08
        模型组      0.84±0.09 **  0.76±0.09 **  0.87±0.09 **  0.85±0.07 **  0.73±0.09 **  0.89±0.09 **  0.86±0.08 **  0.84±0.11 **
        水飞蓟素组    0.56±0.08 ##  0.39±0.09 ##  0.52±0.07 ##  0.47±0.06 ##  0.44±0.07 ##  0.58±0.08 ##  0.57±0.07 ##  0.53±0.09 ##
        SA低剂量组   0.54±0.11 ##  0.37±0.07 ##  0.47±0.09 ##  0.44±0.08 ##  0.42±0.09 ##  0.48±0.07 ##  0.55±0.08 ##  0.48±0.07 ##
        SA高剂量组   0.48±0.06 ##  0.36±0.08 ##  0.42±0.05 ##  0.43±0.06 ##  0.45±0.07 ##  0.45±0.08 ##  0.54±0.09 ##  0.45±0.08 ##
                           **
                                             ##
           注:与空白对照组比较, P<0.01;与模型组比较,P<0.01
           Note:vs. blank control group, P<0.01;vs. model group, P<0.01
                               **
                                                  ##
        4 讨论                                               述炎症因子含量均显著降低,提示 SA 能明显减轻模型
            肝纤维化的主要病理学机制是由于肝组织内 ECM                        小鼠的肝纤维化程度。
        的超速合成与缓慢降解,最终导致肝内 ECM 的过度沉                             本研究通过 HE 染色法观察小鼠肝组织病理学变
        积 [3,17] 。肝星状细胞(HSC)是弥散性 ECM 的主要来源,                化,结果显示,对照组小鼠细胞结构清晰、细胞索规则排
        且活化的HSC还可进一步转化为肌成纤维细胞,是肝纤                          列,无炎症浸润现象;模型组小鼠出现细胞水肿体积变
        维化发生的关键环节 。当前治疗肝纤维化的药物可                            大,细胞核聚集、皱缩以及炎性细胞浸润等现象,细胞索
                           [18]
        在一定程度上限制疾病的快速发展,然而抗纤维化治疗                           排列不规则,表明肝纤维化模型成功建立;而给予水飞
        药物的研究仍然以针对病因为主,真正直接干预纤维化                           蓟素和低、高剂量SA干预后,小鼠肝细胞炎性病变及坏
        的特异性药物的研发较少,临床治疗效果并不明显 。                           死程度均较模型组明显减轻,提示 SA 能明显缓解模型
                                                     [19]
        临床常规手段主要是依靠对症治疗,如使用保肝降酶药                           小鼠的肝纤维化病理进展程度。
        物等,但这些手段并不能从根本上解决问题,反而有引                               NLRP3/NF-κB 信号通路的激活可导致炎症水平升
        起药源性疾病的风险。SA是从中药五味子中提取出的                           高,进而促进纤维化进程中的作用已被证实,并被认为
        主要有效成分,具有保肝护肝、逆转肝损伤的作用,是当                          是经典的肝纤维化信号通路 。机体静息状态下,NF-κB
                                                                                   [22]
        前临床治疗肝纤维化的有效补充手段,能够明显改善患                           可与IκBα结合形成三聚体,并在细胞质中以无活性的形
        者肝功能,阻断疾病发生发展的关键靶点通路,从而发                           式存在;而在被NLRP3等炎性小体刺激后,则可诱导炎
        挥高效低毒的治疗作用          [4,6] 。因此,本研究以经典的天然            症反应的发生,且以 p65/p50 异二聚体的活化形式存
                                                             [23]
                        [16]
        保肝药物水飞蓟素 为阳性对照,通过小鼠肝纤维化模                           在 。NLRP3 炎性小体是宿主免疫防疫系统的重要成
        型对SA改善肝损伤和肝纤维化的作用及其相关信号通                           员,该炎症小体主要由 NLRP3、Caspase-1 和 ASC 等 3 种
        路机制进行了探索。                                          蛋白组成;同时,Caspase-1 可以将无活性 IL-1β前体
            AST和ALT是反映肝功能的两个重要生化指标,当                       (pro-IL-1β)剪切为 IL-1β并释放到胞外,从而引发下游
        发生肝功能异常时,AST和ALT将会从肝细胞中被外排                         炎症反应,而 IL-1β是 NLRP3 下游炎症通路中的重要因
        到达血液循环,从而表现为血液中这两项指标水平的急                           子 [24-25] 。上述4种蛋白的表达水平升高,则提示机体炎性
        剧升高 。本研究结果显示,与空白对照组比较,模型                           水平升高、炎症通路被激活。本研究结果显示,与空白对
              [20]
        组小鼠血清中 AST、ALT 水平均显著升高,表明 CCl4诱                    照组比较,模型组小鼠肝组织中NLRP3、ASC、Caspase-1、
        导的模型小鼠的肝功能明显受损;而给予水飞蓟素和不                           IL-1β蛋白表达水平以及p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-IκBα/
        同剂量 SA 干预后,小鼠血清中上述肝损伤指标水平均                         IκBα比值均显著升高,表明模型组小鼠出现明显的肝纤
        显著降低,提示SA对小鼠肝功能有明显的保护作用。                           维化;而给予水飞蓟素和不同剂量SA干预后,小鼠肝组
            炎症途径在肝纤维化中起着至关重要的作用,研究                         织中上述5个蛋白的表达水平均显著降低,表明SA可能
        证实,肝 Kuffer 细胞在损伤期间会募集中性粒细胞和 T                     是通过干预NLRP3/NF-κB信号通路从而起到有效减轻
        淋巴细胞等,并释放促炎介质如 TNF-α、IL-1β、IL-6 等,                 小鼠肝纤维化的作用。
                                  [21]
        同时刺激 HSC 的纤维化活性 。因此,TNF-α、IL-1β、                       TGF-β 1是目前公认的最强促纤维化因子之一,其主
        IL-6参与和促进了肝纤维化的进程,并可用于表征肝细                         要通过促进纤维细胞增殖、转化和转分化,以及在转录
        胞的纤维化程度,是研究肝纤维化的重要生物学指标。                           和转录后水平调节胶原等ECM的表达并有效抑制其降
                                                                                  [26]
        本研究结果显示,与空白对照组比较,模型组小鼠血清                           解来高效促进组织纤维化 。Smad蛋白是TGF-β 1信号
        中TNF-α、IL-1β、IL-6含量均显著升高,表明CCl4诱导的                 转导至核内关键的下游信号物质,TGF-β 1可通过增加
                                                                                                        [27]
        模型小鼠出现了明显的肝纤维化,实验模型建立成功;                           Smad3 磷酸化水平来发挥其促肝纤维化的作用 。
        而给予水飞蓟素和不同剂量 SA 干预后,小鼠血清中上                         Smad7 是该信号通路的负调节因子,可以通过与 Smad3


        中国药房    2020年第31卷第22期                                            China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 22  ·2729 ·
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