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表3 各组小鼠肝组织中NLRP3/NF-κB及TGF-β/smad信号通路蛋白表达及磷酸化水平测定结果(x±±s,n=10)
Tab 3 Protein expression of NLRP3/NF-κB and TGF-β/Smad singaling pathway in liver tissue of mice in each
group(x±±s,n=10)
组别 NLRP3 ASC Caspase-1 IL-1β p-NF-κB p65/NF-κB p65 p-IκBα/IκBα TGF-β1 p-Smad3/Smad3
空白对照组 0.24±0.05 0.21±0.07 0.27±0.07 0.26±0.06 0.29±0.08 0.28±0.11 0.19±0.04 0.32±0.08
模型组 0.84±0.09 ** 0.76±0.09 ** 0.87±0.09 ** 0.85±0.07 ** 0.73±0.09 ** 0.89±0.09 ** 0.86±0.08 ** 0.84±0.11 **
水飞蓟素组 0.56±0.08 ## 0.39±0.09 ## 0.52±0.07 ## 0.47±0.06 ## 0.44±0.07 ## 0.58±0.08 ## 0.57±0.07 ## 0.53±0.09 ##
SA低剂量组 0.54±0.11 ## 0.37±0.07 ## 0.47±0.09 ## 0.44±0.08 ## 0.42±0.09 ## 0.48±0.07 ## 0.55±0.08 ## 0.48±0.07 ##
SA高剂量组 0.48±0.06 ## 0.36±0.08 ## 0.42±0.05 ## 0.43±0.06 ## 0.45±0.07 ## 0.45±0.08 ## 0.54±0.09 ## 0.45±0.08 ##
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注:与空白对照组比较, P<0.01;与模型组比较,P<0.01
Note:vs. blank control group, P<0.01;vs. model group, P<0.01
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4 讨论 述炎症因子含量均显著降低,提示 SA 能明显减轻模型
肝纤维化的主要病理学机制是由于肝组织内 ECM 小鼠的肝纤维化程度。
的超速合成与缓慢降解,最终导致肝内 ECM 的过度沉 本研究通过 HE 染色法观察小鼠肝组织病理学变
积 [3,17] 。肝星状细胞(HSC)是弥散性 ECM 的主要来源, 化,结果显示,对照组小鼠细胞结构清晰、细胞索规则排
且活化的HSC还可进一步转化为肌成纤维细胞,是肝纤 列,无炎症浸润现象;模型组小鼠出现细胞水肿体积变
维化发生的关键环节 。当前治疗肝纤维化的药物可 大,细胞核聚集、皱缩以及炎性细胞浸润等现象,细胞索
[18]
在一定程度上限制疾病的快速发展,然而抗纤维化治疗 排列不规则,表明肝纤维化模型成功建立;而给予水飞
药物的研究仍然以针对病因为主,真正直接干预纤维化 蓟素和低、高剂量SA干预后,小鼠肝细胞炎性病变及坏
的特异性药物的研发较少,临床治疗效果并不明显 。 死程度均较模型组明显减轻,提示 SA 能明显缓解模型
[19]
临床常规手段主要是依靠对症治疗,如使用保肝降酶药 小鼠的肝纤维化病理进展程度。
物等,但这些手段并不能从根本上解决问题,反而有引 NLRP3/NF-κB 信号通路的激活可导致炎症水平升
起药源性疾病的风险。SA是从中药五味子中提取出的 高,进而促进纤维化进程中的作用已被证实,并被认为
主要有效成分,具有保肝护肝、逆转肝损伤的作用,是当 是经典的肝纤维化信号通路 。机体静息状态下,NF-κB
[22]
前临床治疗肝纤维化的有效补充手段,能够明显改善患 可与IκBα结合形成三聚体,并在细胞质中以无活性的形
者肝功能,阻断疾病发生发展的关键靶点通路,从而发 式存在;而在被NLRP3等炎性小体刺激后,则可诱导炎
挥高效低毒的治疗作用 [4,6] 。因此,本研究以经典的天然 症反应的发生,且以 p65/p50 异二聚体的活化形式存
[23]
[16]
保肝药物水飞蓟素 为阳性对照,通过小鼠肝纤维化模 在 。NLRP3 炎性小体是宿主免疫防疫系统的重要成
型对SA改善肝损伤和肝纤维化的作用及其相关信号通 员,该炎症小体主要由 NLRP3、Caspase-1 和 ASC 等 3 种
路机制进行了探索。 蛋白组成;同时,Caspase-1 可以将无活性 IL-1β前体
AST和ALT是反映肝功能的两个重要生化指标,当 (pro-IL-1β)剪切为 IL-1β并释放到胞外,从而引发下游
发生肝功能异常时,AST和ALT将会从肝细胞中被外排 炎症反应,而 IL-1β是 NLRP3 下游炎症通路中的重要因
到达血液循环,从而表现为血液中这两项指标水平的急 子 [24-25] 。上述4种蛋白的表达水平升高,则提示机体炎性
剧升高 。本研究结果显示,与空白对照组比较,模型 水平升高、炎症通路被激活。本研究结果显示,与空白对
[20]
组小鼠血清中 AST、ALT 水平均显著升高,表明 CCl4诱 照组比较,模型组小鼠肝组织中NLRP3、ASC、Caspase-1、
导的模型小鼠的肝功能明显受损;而给予水飞蓟素和不 IL-1β蛋白表达水平以及p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-IκBα/
同剂量 SA 干预后,小鼠血清中上述肝损伤指标水平均 IκBα比值均显著升高,表明模型组小鼠出现明显的肝纤
显著降低,提示SA对小鼠肝功能有明显的保护作用。 维化;而给予水飞蓟素和不同剂量SA干预后,小鼠肝组
炎症途径在肝纤维化中起着至关重要的作用,研究 织中上述5个蛋白的表达水平均显著降低,表明SA可能
证实,肝 Kuffer 细胞在损伤期间会募集中性粒细胞和 T 是通过干预NLRP3/NF-κB信号通路从而起到有效减轻
淋巴细胞等,并释放促炎介质如 TNF-α、IL-1β、IL-6 等, 小鼠肝纤维化的作用。
[21]
同时刺激 HSC 的纤维化活性 。因此,TNF-α、IL-1β、 TGF-β 1是目前公认的最强促纤维化因子之一,其主
IL-6参与和促进了肝纤维化的进程,并可用于表征肝细 要通过促进纤维细胞增殖、转化和转分化,以及在转录
胞的纤维化程度,是研究肝纤维化的重要生物学指标。 和转录后水平调节胶原等ECM的表达并有效抑制其降
[26]
本研究结果显示,与空白对照组比较,模型组小鼠血清 解来高效促进组织纤维化 。Smad蛋白是TGF-β 1信号
中TNF-α、IL-1β、IL-6含量均显著升高,表明CCl4诱导的 转导至核内关键的下游信号物质,TGF-β 1可通过增加
[27]
模型小鼠出现了明显的肝纤维化,实验模型建立成功; Smad3 磷酸化水平来发挥其促肝纤维化的作用 。
而给予水飞蓟素和不同剂量 SA 干预后,小鼠血清中上 Smad7 是该信号通路的负调节因子,可以通过与 Smad3
中国药房 2020年第31卷第22期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 22 ·2729 ·