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何首乌为蓼科植物何首乌 Polygonum multiflorum               子；二苯乙烯苷对照品（批号：110844-201915，纯度：≥
        Thunb.的干燥块根，其生品具有解毒、消痈、截疟、润肠                        98％）、大黄素对照品（批号：110756-201913，纯度：≥
        通便的功效，炮制品则具有补肝肾、益精血、乌须发、强                           98％）、D-无水葡萄糖对照品（批号：110833- 201908，纯
                             [1]
        筋骨、化浊、降脂等作用 ，临床应用广泛。近年来，有关                          度：≥98％）均购自中国食品药品检定研究院；大黄素甲
        何首乌肝毒性的不良反应报道日益增多                  [2-4] ，使其用药安     醚对照品（批号：110758-201817，纯度：≥98％）购自成
        全受到质疑，因此何首乌的炮制方法受到学者普遍关                             都曼思特生物科技有限公司；乙腈、甲醇、乙醇均为色谱
                                           [5]
        注。九蒸九晒是何首乌的传统炮制方法 ，该炮制方法                            纯，其余试剂均为分析纯，水为超纯水。
        较2015年版《中国药典》（一部）收载的制何首乌蒸法（清                        2 方法与结果
                                            [1]
        蒸或黑豆汁拌匀后蒸至内外均为棕褐色） 更加细致、复                           2.1 何首乌九蒸九晒样品的制备
                                                                                 [6]
        杂。本课题组前期研究以及相关文献均初步证实，经九                                参考前期试验方法 ，取何首乌药材 10 kg，加入黑
        蒸九晒后，何首乌的肝毒性较生品降低                 [6-7] ，但这一炮制      豆汁 2.5 kg（取黑豆 1 kg，加水 5 kg，置于节能蒸柜中煎
        工艺尚无统一标准，炮制流程有待规范。何首乌成分较                            煮所得）搅拌均匀，待黑豆汁全部吸收，平均分成20份，
        复杂，主要含有蒽醌类、黄酮类、甾体类、二苯乙烯苷等                           分别按后续星点设计-响应面法设计相应试验条件重复
        成分 。现代研究表明，二苯乙烯苷、游离蒽醌类及多糖                           蒸制9次，即得样品20批（编号：S1～S20）。
            [8]
                                            [8]
        类成分均具有抗衰老、抗氧化等药理作用 ，且多糖类成                           2.2 二苯乙烯苷的含量测定
                                                            2.2.1  色谱条件       色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse
        分还具有调剂免疫的作用 ，故其炮制工艺研究多以二
                               [9]
        苯乙烯苷、游离蒽醌或多糖为评价指标                 [10-11] ，但鲜有将3    XDB-C 1 8 （250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-水
                                                           （25 ∶ 75，V/V）；流速：1 mL/min；检测波长：320 nm；柱
        者同时作为炮制工艺考察指标的报道。
                                                            温：30 ℃；进样量：10 μL。
            星点设计-效应面法因具有精密度好、可信度高、试
                                                            2.2.2  对照品溶液的制备          取二苯乙烯苷对照品 2.7
        验次数少、应用方便等特点而被广泛应用于中药炮制工
                                                            mg，精密称定，置于10 mL量瓶中，加入50％乙醇溶解并
        艺的筛选研究       [12-14] 。基于此，本研究采用高效液相色谱
                                                            定容，制成质量浓度为0.27 mg/mL的对照品溶液。
        法（HPLC）测定二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚的含
                                                            2.2.3  供试品溶液的制备          取“2.1”项下何首乌九蒸九
        量，采用紫外分光光度法（UV）测定总多糖的含量；以蒸
                                                            晒样品，粉碎后取粉末0.2 g，精密称定，置于具塞锥形瓶
        制时间、烘制时间、烘制温度为自变量，二苯乙烯苷、大
                                                            中，加入 50％乙醇 25 mL，密塞，称定质量，加热回流提
        黄素、大黄素甲醚和总多糖含量为指标，同时结合加权
                                                            取30 min，放冷，再次称定质量，用50％乙醇补足减失的
        综合评分法和星点设计-效应面法对何首乌九蒸九晒的
                                                            质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
        炮制工艺进行优化，旨在为该炮制工艺的科学化与规范
                                                            2.2.4 空白对照溶液        以50％乙醇为空白对照溶液。
        化提供参考。
                                                            2.2.5  系统适用性试验        取上述空白对照溶液、对照品
        1 材料
                                                            溶液、供试品溶液各适量，按“2.2.1”项下色谱条件进样
        1.1  仪器
                                                            测定，记录色谱图，详见图 1。由图 1 可知，二苯乙烯苷
            1260 Infinity Ⅱ型 HPLC 仪，包括二极管阵列检测
                                                            对应色谱峰的分离度为 4.71，理论板数为 8 366，与其余
        器、LC1260 色谱工作站（美国 Agilent 公司）；UV-9000S              成分均基线分离，且空白对照对测定无干扰。
        型UV计（上海元析仪器有限公司）；XMTB-8000型干燥                       2.2.6  线性关系考察        取“2.2.2”项下对照品溶液 1、2、
        箱（余姚市金宏仪器厂）；AR2140 型万分之一电子分析                        4、8、10 mL，分别置于10 mL量瓶中，加入50％乙醇稀释
        天平（上海海鸿仪器有限公司）；SK5200H型超声波清洗                        并定容，制得不同质量浓度的标准溶液，按“2.2.1”项下
        器（上海科导超声仪器有限公司，功率：200 W，频率：53                       色谱条件进样，记录色谱图。以二苯乙烯苷进样量（X，
        kHz）；TG16-WS型台式高速离心机（湖南湘仪实验仪器                       µg）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归。结
        开发有限公司）；DMD-J-24 型经济型节能蒸柜（广州市                       果，二苯乙烯苷的回归方程 Y＝256.45X+1 364.9（r＝
        多美多厨房设备有限公司）。                                       0.997 1），表明二苯乙烯苷检测进样量的线性范围为
        1.2 药品与试剂                                           0.27～2.7 µg。
            何首乌药材（湖南南国药都中药饮片有限公司，批                          2.2.7  精密度试验       精密吸取“2.2.2”项下对照品溶液
        号：20180285）、黑豆饮片（湖南三湘中药饮片有限公司，                      适量，按“2.2.1”项下色谱条件连续进样测定6次，记录峰
        批号：20180613）经湖南中医药大学第一附属医院药学                        面积。结果，二苯乙烯苷峰面积的 RSD 为 0.98％（n＝
        部张志国教授鉴定分别为何首乌 P. multiflorum Thunb.                6），表明仪器精密度良好。
        的干燥块根、黑豆 Glycine max（L.）Merr.的干燥成熟种                 2.2.8  重复性试验      精密称取“2.1”项下何首乌九蒸九


        ·2714 ·  China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 22                                 中国药房    2020年第31卷第22期
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