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2.5.2 混合对照品溶液的制备 取绿原酸、金丝桃苷、 200
180
160
异槲皮苷、槲皮苷、根皮苷、槲皮素各对照品适量，精密 140
120
称定，分别置于不同 25 mL 量瓶中，用 75％甲醇溶解并 mAU 100
80
定容，制备各单一对照品母液。分别取一定量的各对照 60
40
20
品母液，置于同一 10 mL 量瓶中，用 75％甲醇稀释制成 －20 0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55
绿原酸、金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮苷、根皮苷、槲皮素质 t，min
量浓度分别为 0.5、0.2、0.2、0.5、3.0、0.08 mg/mL 的混合 A. 混合对照品溶液
对照品溶液。 100
75
2.5.3 供试品溶液的制备 取奥色折布药材细粉约2.0 50
g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入 75％甲醇 25 mAU 25
mL，密塞，称定质量，超声（功率：500 W，频率：40 kHz） 0
－20
处理45 min，放冷，再次称定质量，然后用75％甲醇补足 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55
t，min
减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 B. 供试品溶液（变叶海棠基原，批号：E10）
2.5.4 系统适用性试验 取混合对照品溶液、供试品溶 180
160
液（批号：E10、E18）、阴性对照溶液（即75％甲醇溶液）， 140
120
100
分别按“2.5.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。结 mAU 80
60
果显示，各待测成分与各自相邻峰间的分离度均大于 40
20
1.5，理论板数按根皮苷峰计不低于4 000，色谱峰对称因 －20 0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55
子在 0.93～1.08 之间，且阴性对照无干扰。色谱图见 t，min
图4。 C. 供试品溶液（花叶海棠基原，批号：E18）
30
2.5.5 线 性 关 系 考 察 精 密 吸 取 混 合 对 照 品 溶 液 25
1 000、500、250、125、62.5 μL，置于不同10 mL量瓶中，用 20
15
75％甲醇分别定容至刻度制备成系列标准溶液，然后按 mAU 10
5
“2.5.1”项下色谱条件进行测定，记录色谱图。以色谱峰 0
峰面积为纵坐标（y）、各对照品质量浓度为横坐标（x， －5 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55
μg/mL）绘制标准曲线并进行线性回归分析。结果表明， t，min
D. 阴性对照溶液
各待测成分在各自质量浓度范围内与其峰面积均呈良 注：1.绿原酸；2.金丝桃苷；3.异槲皮苷；4.槲皮苷；5.根皮苷；6.槲
好的线性关系（r均不低于0.999 7）。回归方程与线性范 皮素
围见表3。 Note：1. chlorogenic acid；2. hyperin；3. isoquercitrin；4. quercetin；
2.5.6 定量限与检测限考察 精密量取“2.5.2”项下混 5. phlorizin；6. quercitin
合对照品溶液适量，以 75％甲醇倍比稀释后，按“2.5.1” 图4 高效液相色谱图
Fig 4 HPLC chromatograms
项下色谱条件进样测定，以信噪比10 ∶ 1、3 ∶ 1分别计算6
种待测成分的定量限、检测限。结果显示，绿原酸、金丝 表3 6种黄酮类成分的回归方程与线性范围
桃苷、异槲皮苷、槲皮苷、根皮苷、槲皮素的定量限分 Tab 3 Regression euqation and linear range of 6
别为 0.040 7、0.017 6、0.018 1、0.041 4、0.023 9、0.011 9 kinds of flavonoids
μg/mL，检测限分别为 0.011 6、0.005 9、0.006 0、0.011 8、 待测成分 质量浓度，μg/mL 回归方程 r
0.008 0、0.004 5 μg/mL。 绿原酸 3.12～50 y＝721.48x－0.119 4 0.999 9
金丝桃苷 1.25～20 y＝1 011.4x－0.122 5 0.999 9
2.5.7 精密度试验 取供试品溶液（批号：E10）适量，按
异槲皮苷 1.25～20 y＝887.82x－0.114 6 0.999 9
“2.5.1”项下色谱条件进样测定，连续测定6次，记录色谱 槲皮苷 3.12～50 y＝940.8x－0.287 6 0.999 9
图。结果显示，绿原酸、金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮苷、根 根皮苷 18.7～300 y＝54.451x－0.062 2 1.000 0
槲皮素 0.5～8 y＝1 390x－0.100 9 0.999 7
皮苷、槲皮素峰面积的 RSD 分别为 0.11％、0.19％、
0.18％、1.06％、1.82％、0.82％（n＝6），表明仪器精密度 据标准曲线计算各待测成分含量。结果显示，绿原酸、
良好。 金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮苷、根皮苷、槲皮素含量的
2.5.8 重复性试验 称取奥色折布药材细粉（批号： RSD 分 别 为 1.69％ 、1.26％ 、1.09％ 、2.56％ 、2.32％ 、
E10）2 g，平行6份，按“2.5.3”项下方法制备供试品溶液， 2.47％（n＝6），表明本方法重复性良好。
再按“2.5.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图，并根 2.5.9 稳定性试验 取同一供试品溶液（批号：E10）适

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