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表6 31批样品主成分得分结果 2.5.1 色谱条件 同“2.1”项。
Tab 6 Results of main components score of 31 batches 2.5.2 溶液的制备 同“2.2”项。
of samples 2.5.3 系统适用性考察 取混合对照品溶液,按“2.5.1”
编号 主成分1 排名 编号 主成分1 排名 项下色谱条件进样测定,记录色谱图;分别取诃子和西
H15 0.415 86 15 X10 1.189 60 1 青果样品(编号:H17、X1),按“2.5.2”项下方法制备供试
H16 0.401 01 16 X9 1.083 45 2
H17 0.245 27 17 X4 1.068 43 3 品溶液,再按“2.5.1”项下色谱条件进样测定,记录色谱
H3 -0.509 85 18 X14 1.039 56 4 图。结果,没食子酸、安石榴苷A、安石榴苷B、诃子鞣酸
H13 -0.624 53 19 X3 1.026 01 5 色谱峰与相邻色谱峰的分离度均大于 1.5,拖尾因子在
H8 -0.713 08 20 X7 0.966 57 6
H12 -0.733 36 21 X13 0.932 40 7 1.00~1.05之内,详见图2。
H7 -0.845 91 22 X5 0.921 07 8 2.5.4 线性关系考察 分别取没食子酸、安石榴苷、诃
H9 -0.856 27 23 X2 0.911 96 9 子鞣酸对照品适量,精密称定,分别用 70%甲醇溶解并
H2 -0.916 53 24 X6 0.885 76 10 稀释,制成6个不同质量浓度的系列对照品溶液,其中没
H6 -0.927 35 25 X8 0.883 35 11
H11 -1.241 98 26 X12 0.871 24 12 食 子 酸 质 量 浓 度 分 别 为 0.35、3.51、35.09、105.27、
H1 -1.299 89 27 X1 0.857 87 13 210.54、315.81 μg/mL,安石榴苷A质量浓度分别为2.84、
H4 -1.337 62 28 X11 0.789 39 14 28.41、259.70、519.40、831.04、1 038.80 μg/mL,安石榴苷
H10 -1.436 37 29
H14 -1.465 86 30 B 质量浓度分别为 2.84、28.41、259.70、519.40、831.04、
H5 -1.580 21 31 1 038.80 μg/mL,诃子鞣酸质量浓度分别为 0.34、3.40、
诃子
34.04、1 005.97、1 609.55、2 011.94 μg/mL。以质量浓度
西青果
为横坐标(x,μg/mL)、峰面积为纵坐标(y)进行回归分
2
析,结果见表7。
1
表7 回归方程与线性范围
0 Tab 7 Regression equations and linear ranges
t[2]
-1 名称 回归方程 R 2 线性范围,μg/mL
没食子酸 y=9 452.7x-11 365 0.999 9 0.35~315.81
-2
安石榴苷A y=2 127.6x-18 829 0.999 5 2.84~1 038.80
安石榴苷B y=4 310.1x-32 512 0.999 3 2.84~1 038.80
-3
-8 -6 -4 -2 0 2 4 6 诃子鞣酸 y=4 513.2x-15 896 0.999 9 0.34~2 011.94
t[1]
图4 31批样品的PLS-DA得分图 2.5.5 检测限和定量限考察 取混合对照品溶液,以
70%甲醇等比例稀释后,按“2.5.1”项下色谱条件进样测
Fig 4 PLS-DA score chart of 31 batches of samples
定,记录峰面积,以信噪比3 ∶ 1、10 ∶ 1分别确定检测限和
定量限。结果,没食子酸、安石榴苷A、安石榴苷B、诃子
1.2
鞣酸的检测限分别为 0.04、0.02、0.02、0.11 ng,定量限分
1.0
别为0.14、0.05、0.06、0.35 ng。
0.8
VIP值 0.6 2.5.6 精密度试验 分别取同一供试品溶液(编号:
0.4 H17、X1),按“2.5.1”项下色谱条件连续进样6次,记录峰
面积。结果,两组样品没食子酸峰面积的 RSD 分别为
0.2
1.21%、1.34%(n=6),安石榴苷A峰面积的RSD分别为
0
5 4 7 3 2 6 1 8 1.60%、1.42%(n=6),安石榴苷B峰面积的RSD分别为
峰号
1.74%、1.51%(n=6),诃子鞣酸峰面积的 RSD 分别为
图5 31批样品PLS-DA模型中8个共有峰的VIP值图 0.52%、0.98%(n=6),表明方法精密度良好。
Fig 5 VIP value graph of 8 common peaks in PLS-DA 2.5.7 稳定性试验 分别取同一供试品溶液(编号:
model of 31 batches of samples H17、X1),分别在室温下放置 0、2、4、6、8、12 h 时按
2.5 多指标含量测定 “2.5.1”项下色谱条件进样测定,记录峰面积。结果,两
“2.4”项下结果显示,峰2、3、4、5、7是区分诃子和西 组样品没食子酸峰面积的 RSD 分别为 1.62%、1.36%
青果的主要差异成分,由于峰5为未知物,故以其他4个 (n=6),安石榴苷A峰面积的RSD分别为1.93%、1.67%
共有峰对应的化合物没食子酸(峰 2)、安石榴苷 A(峰 (n=6),安石榴苷B峰面积的RSD分别为1.98%、1.79%
3)、安石榴苷B(峰4)、诃子鞣酸(峰7)为含量测定指标, (n=6),诃 子 鞣 酸 酸 峰 面 积 的 RSD 分 别 为 1.08% 、
对17批诃子和14批西青果进行定量分析。 0.87%(n=6),表明供试品溶液在室温下放置 12 h 内稳
·2516 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 20 中国药房 2020年第31卷第20期