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取粉末约0.25 g，置于具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇 7
3 800 3 4 8
25 mL，称定质量，超声（功率：300 W，频率：40 kHz）处理 3 600 1 2 5 6
3 400 R1（对照指纹图谱）
30 min，冷却至室温，再次称定质量，用70％甲醇补足减 3 200 H17
失的质量，摇匀，滤过，取续滤液即得供试品溶液。 3 000 H16
2 800 H15
2.3 指纹图谱的建立与分析 2 600 H14
2 400 H13
2.3.1 精密度试验 分别取同一供试品溶液（编号： 2 200 H12
H17、X1），按“2.1”项下色谱条件连续进样 6 次，记录峰 mV U， 2 000 H11
H10
1 800
面积。均以没食子酸（峰2，下同）为参照，分别计算两组 1 600 H9
1 400 H8
样品各 8 个共有峰的相对保留时间和相对峰面积。结 1 200 H7
果，两组样品各8个共有峰相对保留时间和相对峰面积 1 000 H6
800 H5
的RSD均小于2％（n＝6），表明方法精密度良好。 600 H4
400 H3
2.3.2 稳定性试验 分别取同一供试品溶液（编号： 200 H2
H17、X1），分别在室温下放置0、2、4、6、8、12 h时按“2.1” 0 H1
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50
项下色谱条件进样测定，记录峰面积。均以没食子酸为 t，min
参照，分别计算两组样品各8个共有峰的相对保留时间 A. 17批诃子
4
和相对峰面积。结果，两组样品各8个共有峰相对保留 3 600 7
3
时间和相对峰面积的 RSD 均小于 2％（n＝6），表明供试 3 400
3 200 5
品溶液在12 h内稳定性良好。 3 000 1 2 6 8
2 800 R2（对照指纹图谱）
2.3.3 重复性试验 分别取样品粉末（编号：H17、X1） 2 600 X14
约 0.25 g，平行 6 份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶 2 400 X13
2 200 X12
液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。均 2 000 X11
mV X10
以没食子酸为参照，分别计算两组样品各8个共有峰的 U， 1 800 X9
1 600
相对保留时间和相对峰面积。结果，两组样品各8个共 1 400 X8
有峰相对保留时间和相对峰面积的 RSD 均小于 2％ 1 200 X7
1 000 X6
（n＝6），表明方法重复性良好。 800 X5
600 X4
2.3.4 指纹图谱的生成 取31批样品，分别按“2.2.2”项 400 X3
X2
下方法制备供试品溶液，再按照“2.1”项下色谱条件进样 200
0 X1
测定，记录色谱图。将 31 批样品的 UPLC 图谱导入《中 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50
药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版）》，分别以H1 t，min
B. 14批西青果
和 X1 号样品的图谱作为参照图谱[2015 年版《中国药
图1 UPLC叠加指纹图谱与对照指纹图谱
典》（一部）“诃子”和“西青果”项下均未有含量测定，前
Fig 1 UPLC superimposed fingerprints and control
期性状鉴别判断H1和X1号样品均符合药材性状规定， fingerprints
故以这两批样品作为参照]，设置时间窗口为 1，自动匹
3。另外，将已建立的诃子对照指纹图谱（R1）和西青果
配生成UPLC叠加指纹图谱，以平均数法生成对照指纹
对照指纹图谱（R2）进行相似度评价，结果，两者的相似
图谱（R）。结果，诃子和西青果指纹图谱中分别有共有
度为 0.909。结果表明，诃子与西青果在指纹图谱上存
峰8个，详见图1。通过与对照品保留时间（见图2A）、紫
在一定差异，所建立的指纹图谱可用于鉴别诃子和西
外吸收光谱和文献信息 [11，17] 比对，指认峰1为诃子次酸，
青果。
峰2为没食子酸，峰3为安石榴苷A，峰4为安石榴苷B，
2.4 化学模式识别分析
峰6为柯里拉京，峰7为诃子鞣酸，峰8为诃子酸。有研
究表明，没食子酸为诃子药材中涩肠止泻、肺虚喘咳主 2.4.1 PCA 以31批样品8个共有峰峰面积为变量，通
要的化学成分之一 [16，18-19] ，且其在图谱中的分离度最佳， 过 SPSS 20.0 软件进行 PCA。以特征值大于 1 为判断标
故选择第2号峰（没食子酸）作为参照。 准，仅提取了 1 个主成分，即主成分 1，其累积方差贡献
2.3.5 相似度评价 以对照指纹图谱为参照，采用《中 率达 81.131％，说明主成分 1 可作为样品的主要评价指
药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012 版）》分别对 17 标，详见表4。通过因子载荷矩阵得知，峰1、2、3、4、5、7
批诃子和 14 批西青果的 UPLC 指纹图谱进行相似度评 在主成分1上有较高载荷，对主成分1产生主要影响，详
价。结果，17 批诃子的相似度均在 0.919～0.996 范围 见表5。以主成分1为变量，计算PCA得分，其得分图见
内，14 批西青果的相似度均大于 0.990，结果见表 2、表 图 3，得分结果见表 6。由图 3 可知，31 批样品明显被分

·2514 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 20 中国药房 2020年第31卷第20期