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2.1.6 稳定性试验 取“2.1.3”项下供试品溶液（编号： 培养，每2 d更换1次培养基，待细胞生长至80％～90％
S3）适量，分别于室温下放置 0、2、4、8、12、24 h 时按 时进行传代，并取对数生长期的细胞进行后续试验。
“2.1.1”“2.1.2”项下色谱与质谱条件进样测定，以荭草苷 表1 金莲花提取物中化学成分的指认结果
峰（峰 6）为参照，记录各共有峰的相对保留时间和相对 Tab 1 Designation results of chemical constituents of
峰面积。结果，22 个共有峰相对保留时间的 RSD 均小 T. chinensis extracts
于0.22％（n＝6），相对峰面积的RSD均小于1.33％（n＝ 保留时间， 准分子离子
峰号 － 分子式 二级碎片离子 化合物
6），表明供试品溶液于室温下放置24 h内稳定性良好。 min 峰[M－H]
1 22.943 137.156 2 C7H6O3 121 羟基苯甲酸
2.1.7 重复性试验 取金莲花药材粉末 100 mg，共 6 2 24.162 181.362 4 C9H10O4 165，139，124 藜芦酸
份，精密称定，按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液（编 3 26.681 179.168 1 C9H8O4 135 咖啡酸
号：S3），再按“2.1.1”“2.1.2”项下色谱与质谱条件进样测 4 31.709 609.146 9 C27H30O16 449，431，413 荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷
5 33.508 579.170 5 C26H28O15 449，431，413 荭草素-2″-O-β-D-吡喃木糖苷
定，以荭草苷峰（峰6）为参照，记录各共有峰的相对保留 6 36.133 447.162 0 C21H20O11 431，413 荭草苷
时间和相对峰面积。结果，22个共有峰相对保留时间的 7 37.847 167.112 6 C8H8O4 151，125，110 香草酸
8 39.819 463.174 8 C21H20O12 303 槲皮素-3-O-吡喃葡萄糖苷
RSD 均小于 0.38％（n＝6），相对峰面积的 RSD 均小于
9 40.770 593.169 8 C27H30O15 433，415，397 牡荆素-2″-O-β-L-半乳糖苷
2.02％（n＝6），表明本方法重复性良好。 10 45.171 563.151 4 C26H28O14 433，415 牡荆素-2″-O-β-D-吡喃木糖苷
2.1.8 指纹图谱生成及特征峰确认 按“2.1.3”项下方 11 46.646 431.161 5 C21H20O10 415，397，367 牡荆苷
12 50.036 463.161 2 C21H20O12 303 金丝桃苷
法制备金莲花 11 种提取物的供试品溶液，再按“2.1.1”
13 57.927 193.123 6 C10H10O4 180，151，136 阿魏酸
“2.1.2”项下色谱与质谱条件进样测定，记录色谱图。将 14 58.615 235.171 3 C13H16O4 219 金莲酸
15 68.639 531.178 2 C26H28O12 515，431，413 2″-O-（2″′ -甲基丁酰基）-荭草苷
图谱导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012
16 71.026 285.162 4 C15H10O6 217，151 木犀草素
版）》，设置时间窗宽度为0.1 min，图谱间距为20 mV，通 17 72.703 595.133 3 C30H28O13 579，477，415 2″-O-（3″，4″′ -二甲苯）-丁酰基牡荆苷
过多点校正及自动匹配生成金莲花 11 种提取物的叠加 18 74.173 515.168 2 C26H28O11 433，415，397 2″-O-（2″′ -甲基丁酰基）牡荆苷
19 78.108 545.131 4 C27H30O12 445，385 7-甲氧基-2″-O-（2″′ -甲基丁酰基）荭草苷
指纹图谱，结果见图 1。由于 S3 图谱吸收信号较强、峰
20 82.031 301.100 8 C15H10O7 179，151 槲皮素
形明显、稳定性较好，故选择S3样品的图谱作为参照图 21 84.232 269.162 5 C15H10O5 181，149 芹菜素
谱。依据各色谱峰的准分子离子峰及二级质谱碎片信 22 90.046 455.136 2 C30H48O3 439 齐墩果酸
息，通过与对照品、文献信息 [3，7-13] 比对，指认金莲花中共 2.2.2 分组与处理 将对数生长期的H9c2细胞分为13
有峰对应的化学成分。结果，金莲花11种提取物指纹图 组，分别为正常对照组、缺氧/复氧组、缺氧/复氧+各提取
谱中有共有峰22个，化学成分的指认结果见表1。 物（S1～S11）组。正常对照组细胞用含10％胎牛血清的
DMEM培养基于37 ℃、5％CO2条件下培养3 h；缺氧/复
880 6
840 氧组细胞用无糖、无血清的 DMEM 培养基于 37 ℃、5％
800
760 CO2、95％N2条件下培养 3 h 后，再按正常对照组条件培
720
680 养 3 h；缺氧/复氧+各提取物组细胞先分别用 0.1 µg/L
640 22
600
560 （按预试验结果设置，以提取物质量计）的S1～S11预处
520
mV 480 21 理30 min后，再按照缺氧/复氧组条件培养。
电压， 440 15 2.2.3 H9c2 细胞存活率检测 采用 MTT 法检测。将
400
360
3
320 H9c2 细胞按 5×10 个/孔接种于 96 孔板中，于 37 ℃、5％
280
240 11 19 20 CO2条件下培养 24 h，按“2.2.2”项下方法分组、处理后，
200 4 12 16 18
160 1 2 3 5 789 10 13 14 17 S11 分别加入 MTT 试剂 100 μL，于 37 ℃条件下继续培养 4
S10
120 S9
S8
80 S7 h，弃上清液，加入DMSO 100 μL，振荡反应10 min，用酶
S6
S5
40 S4
S3（参照）
0 S2
S1
标仪于 490 nm 波长处检测各孔光密度（OD）值，以不含
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110
时间，min 细胞的空白培养基作为空白组，计算细胞存活率：细胞
图1 金莲花11种提取物的叠加指纹图谱 存活率＝（试验组OD值/空白组OD值）×100％。每组设
Fig 1 Superimposed fingerprint of 11 kinds of ex- 6个复孔，试验重复3次。
tracts of T. chinensis 2.2.4 H9c2 细胞中 MDA 含量、ROS 水平和上清液中
2.2 金莲花提取物对 H9c2 细胞缺氧/复氧损伤的保护 LDH 含量检测 采用 ELISA 法检测。将 H9c2 细胞按
作用 5×10 个/孔接种于96孔板中，于37 ℃、5％CO2条件下培
3
2.2.1 细胞培养 将 H9c2 细胞放置在培养箱中，用含 养24 h，按“2.2.2”项下方法分组、处理后，按试剂盒说明
10％胎牛血清的DMEM培养基于37 ℃、5％CO2条件下 书进行操作，采用酶标仪于450 nm波长处检测各孔OD
中国药房 2020年第31卷第18期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 18 ·2221 ·