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orientin-2″-O-β-L-galacto- pyranosl（peak 4），orientin-2″-O-β-D-Pyrine xylosides（peak 5），quercetin-3-O-glucopyranoside（peak
        8），vitexin-2″-O-β-L-galactoside （peak 9），hyperoside （peak 12），vitexin-2″-O-β-D-pyrine xylosides （peak 10），2″-O-（2 ″′ -
        methylbutyry-loxy）-orientin（peak 15）may be the main components of anti-hypoxia/reoxygenation injury of cardiomyocytes.
        KEYWORDS Trollius chinensis；Myocardial cells H9c2；Hypoxia/reoxygenation injury；Spectrum-effect relationship；GRA；PLS


            金 莲 花 为 毛 茛 科 植 物 金 莲 花（Trollius chinensis      氢酶（LDH）酶联免疫吸附测定（ELISA）检测试剂盒（南
        Bunge.）的干燥花，别名有旱荷、寒金莲等，性寒、无毒 ，                      京建成生物工程研究所，批号分别为 A003-2、A015-6、
                                                      [1]
        主要分布于我国内蒙古、黑龙江、河北、吉林等地。金莲                           A020-3）；其余试剂均为分析纯，水为纯化水。
        花主要含黄酮类成分，含量最高的为荭草素-2″-O- β-L-                      1.3 细胞
        半乳糖苷、荭草苷、牡荆苷 。该药具有抗菌、抗炎、抗病                              大鼠心肌细胞H9c2由吉林大学基础医学院提供。
                               [2]
        毒等活性，主要用于治疗咽炎、呼吸道炎、扁桃体炎等疾                           2 方法与结果
          [3]
        病 。现代药理研究表明，金莲花除上述药理活性外，还                           2.1 金莲花提取物指纹图谱的建立
                             [4]
        具有抗心肌缺血的作用 ，但有关抗心肌缺血药效物质                            2.1.1  色谱条件     色谱柱：ACE C18 （250 mm×4.6 mm，5
        基础尚鲜有报道。目前，谱效学已被广泛应用于中药有                            μm）；流动相：乙腈（A）-0.1％甲酸水溶液（B），梯度洗脱
        效成分与药效关系的研究            [5-6] ，但是对于金莲花抗心肌缺          （0～20 min，3％A→12％A；20～50 min，12％A；50～65
        血方面的研究尚未见报道。本研究采用高效液相色谱-                            min，12％A→15％A；65～75 min，15％A→20％A；75～
        串联质谱法（HPLC-MS/MS），建立金莲花 11 种不同溶                     85 min，20％A→30％A；85～95 min，30％A→40％A；
        剂提取物的指纹图谱，确认共有峰，通过与对照品、文献                           95～105 min，40％A→50％A；105～110 min，50％A→
        信息比对，指认共有峰对应的化合物，再结合各提取物                            3％A；110～115 min，3％A）；检测波长：360 nm；流速：
        对大鼠心肌细胞 H9c2 缺氧/复氧损伤的保护作用，通过                        0.8 mL/min；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。
        灰色关联度分析法（GRA）和偏最小二乘法（PLS）联合                         2.1.2  质谱条件     电离源：电喷雾离子源（ESI）；检测方
        分析共有峰与抗心肌细胞缺氧/复氧损伤（药效）的谱-效                          式：负离子检测；扫描范围：m/z 50～1 500；干燥气温度：
        关系，旨在为金莲花抗心肌缺血再灌注损伤的药效物质                            350 ℃；干燥气流量：9.0 L/min；雾化气压强：0.24 MPa；
        基础研究提供参考。                                           毛细管电压：4 kV。
        1 材料                                                2.1.3  供试品溶液的制备         称取金莲花药材适量，分别
        1.1  仪器                                             用10倍量（mL/g，下同）90％乙醇、80％乙醇、70％乙醇、
            Agilent 1100 Series LC-MSD 型液相色谱质谱联用            60％乙醇、50％乙醇和水回流提取 2 次，每次 2 h，滤过，
        仪，包括多级离子阱质谱仪、低压四元梯度泵、二极管阵                           合并相同溶剂的滤液，浓缩，干燥至粉末，即得金莲花 6
        列检测器（DAD）、Chemistation C.01.02 化学工作站等               种提取物，记为 S1～S6。另称取金莲花药材适量，依次
        （美国 Agilent 公司）；GL-21M 型高速低温离心机（湖南                  用 10 倍量 95％乙醇、70％乙醇各回流提取 1 次，每次 2
        迈达仪器有限公司）；CPA225D 型十万分之一电子天平                        h，滤过，合并滤液，浓缩至无醇味，加水稀释至每 1 mL
        （德国Sartorius公司）；Multiskan FC型全自动酶标仪（美               含1 mg药材的溶液，再依次用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙
        国 Thermo Fisher Scientific 公 司）；Thermo HERAcell     酯、正丁醇萃取，将上述4种溶剂的萃取液和水相分别减
        150 i型CO2细胞培养箱（山东博科仪器有限公司）。                         压回收，干燥至粉末，即得金莲花5种提取物，记为S7～
        1.2  药品与试剂                                          S11。精密称取上述11种提取物粉末各100 mg，分别溶
            金莲花药材（批号：180501）购自吉林省宏检大药                       于甲醇25 mL中，溶解后经0.45 μm微孔滤膜滤过，取续
        房，经吉林省中医药科学院赵全成教授鉴定为毛茛科植                            滤液，即得相应的供试品溶液。
        物金莲花（T. chinensis Bunge.）的干燥花；荭草素-2″-O-             2.1.4  混合对照品溶液的制备           精密称取荭草素-2″-O-
        β-L-半乳糖苷对照品（吉林省中医药科学院植物化学研                          β-L-半乳糖苷、荭草苷、牡荆苷、槲皮素对照品适量，加甲
        究所自制，批号：20180001，纯度：≥98％）；荭草苷、牡荆                    醇溶解制备质量浓度分别为0.05、0.25、0.05、0.01 mg/mL
        苷、槲皮素对照品（中国食品药品检定研究院，批号分别                           的混合对照品溶液。
        为 110732-200907、110713-201613、112026-201601，纯       2.1.5  精密度试验       取“2.1.3”项下供试品溶液（编号：
        度：≥98％）；胎牛血清（上海玉博生物科技有限公司）；                         S3）适量，按“2.1.1”“2.1.2”项下色谱与质谱条件进样测
        DMEM 培养基（美国 Thermo Fisher Scientific 公司）；胰          定，连续 6 次，以荭草苷峰（峰 6）为参照，记录各共有峰
        蛋 白 酶（湖 北 远 成 药 业 有 限 公 司）；二 甲 基 亚 砜                的相对保留时间和相对峰面积。结果，22个共有峰相对
        （DMSO）、MTT 试剂盒（货号：M8182）均购自北京索莱                     保留时间的 RSD 均小于 0.19％（n＝6），相对峰面积的
        宝科技有限公司；丙二醛（MDA）、活性氧（ROS）、乳酸脱                       RSD均小于1.22％（n＝6），表明本方法精密度良好。


        ·2220  ·  China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 18                                中国药房    2020年第31卷第18期
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