Page 55 - 202018
P. 55

chinensis. The components of S. sphenanthera and S. chinensis were different,schisanolrin A is differential marker.
        KEYWORDS     Schisandra sphenanthera; Schisandra chinensis; HPLC; Fingerprint; HCA; PCA; OPLS-DA; Differential
        markers


            五味子为木兰科植物五味子[Schisandra chinesis               分析(HCA)、无监督模式主成分分析(PCA)、有监督模
       (Turcz.)Baill.]的干燥成熟果实,习称“北五味子”;南五                  式正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)筛选影响
        味子为木兰科植物华中五味子(S. sphenanthera Rehd. et             南、北五味子药材质量的差异标志物,以期为其质量控
        Wils.)的干燥成熟果实。两者在 2015 年版《中国药典》                    制及药效研究提供参考。
       (一部)中均有记载,其质量标准虽有不同,但性味、归                           1 材料
                                   [1]
        经、功能主治的表述却完全相同 。历代本草典籍中,有                          1.1 仪器
        关两种五味子的产地、名称、功效等记载不一,如《本草                              LC 20AD 型 HPLC 仪(包括二元泵、可制冷自动进
        图经》中记载,“五味子,生齐山山谷及代郡,今河东、陕                         样器、二极管阵列检测器、柱温箱、Labsulotions Version
                                 [2]
        西州郡尤多,而杭越间亦有”。根据其产地查阅《中药                           5.87 色谱工作站)、AUW-120D 型十万分之一电子天平
        材产销》 可推断,此处“齐山山谷及代郡”为北五味子产                         均购自日本 Shimadzu 公司;1260 型 HPLC 仪(包括四元
               [3]
        区,“河东、陕西州郡、杭越”为南五味子产区,由此可见                         泵、紫外检测器、柱温箱、自动进样器、Open LABA.01.05
        两种五味子在产区分布上存在差异。《本草蒙筌》中记                           色谱工作站)购自美国 Agilent 公司;DHG-9070 型电热
        载,“南北各有所长,藏留切勿相混,风寒咳嗽南五味为                          鼓风干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司);SB25-12D
                              [4]
        奇,虚损劳伤北五味最妙”;《本草纲目》中记载,“五味,                        型超声波清洗机(宁波新芝生物科技股份有限公司);
        今有南北之分,南产者,色红;北产者,色黑,入滋补药必                         5810R 型高速离心机(德国 Eppendorf 公司);Milli-Q 超
        用北产者乃良”。由此可知,南、北五味子在功效、名                           纯水机(美国Millipore公司);FW-80型微型高速万能试
                      [5]
        称、性状等方面的记载也不尽相同,其中北五味子质量                           样粉碎机(天津市静海县工兴电器厂)。
        较优。                                                1.2  药品与试剂
            随着现代研究的深入,南、北五味子药材间的鉴别                             五味子醇甲对照品(批号:MUST-19031905,纯度:
        技术不断优化,除常见的性状、显微、薄层色谱鉴别等                           99.46%)、五味子醇乙对照品(批号:MUST-19042307,纯
        外 [6-8] ,还有 DNA 条形码技术等鉴定手段 。由于南、北                  度 :99.88%)、五 味 子 酯 甲 对 照 品(批 号 :MUST-
                                           [9]
        五味子药材产地较多,在现代临床应用中普遍存在混用                           19062302,纯度:99.38%)、五味子甲素对照品(批号:
              [10]
        的现象 ;加之学者对两者的认知存在一些偏差,故常                           MUST-19092908,纯度:99.35%)均购自成都曼斯特生物
        将南五味子视为五味子的伪品 。因此,如何正确区分                           科技有限公司;五味子乙素对照品(中国食品药品检定
                                  [11]
        南、北五味子,并对其进行准确鉴别并发掘不同功效的                           研究院,批号:110765-201512,纯度:99.00%);乙腈为色
        物质基础对确保临床疗效具有重要的意义。                                谱纯,甲醇为分析纯,水为超纯水。
            南、北五味子的化学成分有所不同,李昕等 采用                             南、北五味子药材各 10 批(编号分别为 N1~N10、
                                                  [12]
        气质联用法(GC-MS)对南、北五味子挥发油化学成分进                        S1~ S10),分别购自全国部分连锁药店、医药公司及药
        行鉴定,结果发现北五味子中的依兰烯含量高于南五味                           材市场,经郑州大学药学院贾陆教授鉴定为木兰科植物
                   [13]
        子;李晓亮等 建立了南、北五味子醇提物的高效液相                           五味子[S. chinensis(Turcz.)Baill.]的干燥成熟果实、木
        色谱(HPLC)指纹图谱,并发现南五味子中五味子酯甲、                        兰科植物华中五味子(S. sphenanthera Rehd. et Wils.)的
        五味子甲素的含量相对较高,而北五味子中五味子醇甲                           干燥成熟果实。药材样品信息来源见表1。
        的含量相对较高,但未深入挖掘两种五味子指纹图谱中                           2 方法与结果
        涵盖的化学信息,也未筛选出导致南、北五味子差异的                           2.1 南、北五味子HPLC指纹图谱的建立
        标志性成分。                                             2.1.1  色谱条件       色谱柱:Aglient Zobax SB C18 (250
            中药化学成分的复杂性和多样性是其发挥疗效的                          mm×4.6 mm,5 µm);流动相:乙腈(A)-水(B),梯度洗脱
        基础,亦是评价药材质量的难点和重点 。指纹图谱可                           (0~5 min,51%A;5~20 min,51%A→60%A;20~35
                                          [14]
        完整、系统地表征药材样品中主要化学成分的相似性特                           min,60%A;35~40 min,60%A→85%A;40~45 min,
          [15]
        征 ;化学模式识别可鉴别药材样品间的差异,以综合                           85%A;45~48 min,85%A→51%A);流速:0.8 mL/min;
        评估中药质量      [16-17] 。基于此,本研究分别建立了南、北五              检测波长:220 nm;柱温:30 ℃;进样量:5 µL。
        味子药材的 HPLC 指纹图谱,并结合相似度评价、聚类                        2.1.2  供试品溶液的制备          称取南、北五味子药材,粉


        中国药房    2020年第31卷第18期                                            China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 18  ·2225  ·
   50   51   52   53   54   55   56   57   58   59   60