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表3 复溶乙醇用量对女贞子总三萜转移率的影响 果仍然较差，故乙醇体积分数过低不利于女贞子总三萜
Tab 3 Effects of redissolved ethanol consumption on 类成分的析出。由表 5 可知，以 60％乙醇进行析晶时，
transfer rate of total triterpenoids from L. lu- 虽然齐墩果酸和熊果酸的转移率稍高，但两者纯度均未
cidum 达到 50％；而以 80％乙醇进行析晶时，虽齐墩果酸纯度
乙醇用量（以原药材量计），倍 齐墩果酸转移率，％ 熊果酸转移率，％ 达到50％，但两者转移率又过低。考虑到上述试验样本
0.25 53.13 30.08 量小，操作过程中的损失比较大，后续可进行大样本试
0.5 84.45 91.91 验来验证工艺是否合理，故选择乙醇体积分数80％进行
0.75 85.89 92.47
1.0 89.76 97.92 后续工艺优化。
1.25 88.56 97.25 表5 析晶乙醇体积分数对女贞子总三萜转移率及纯度
1.5 89.60 97.59
的影响
1.0倍量乙醇复溶，加热回流0.5 h后，离心，取上清液，用 Tab 5 Effects of crystallization ethanol volume frac-
乙醇定容至 50 mL。在上述乙醇稀释溶液中分别加入 tion on the transfer rate and purity of total tri-
0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 g活性炭（相当于含活性炭1％、2％、 terpenoids from L. lucidum
3％、4％、5％），振摇 10 min，抽滤，取滤液，用乙醇定容 齐墩果酸 熊果酸
乙醇体积分数，％
至 50 mL。将该溶液蒸干，取干燥沉淀物，按“2.3”项下 转移率，％ 纯度，％ 转移率，％ 纯度，％
方法制备供试品溶液，再按“3”项下方法测定齐墩果酸 20 0. 0. 0. 0.
40 33.01 42.10 21.65 9.50
和熊果酸的含量，并计算其转移率和纯度（纯度＝待测
60 57.75 41.48 37.84 9.35
成分质量/沉淀质量×100％），结果见表4。由表4可知，所 80 44.03 55.80 28.13 12.27
得干燥沉淀物中齐墩果酸、熊果酸的转移率随活性炭用 5 Box-Behnken响应面法优化女贞子总三萜类的
量增加而降低，但纯度随活性炭用量增加而升高。结合 纯化工艺
转移率和纯度计算综合评分（综合评分＝x 转移率/∑x 转移率+
根据单因素考察结果可知，水沉温度0 ℃和水沉时
y 纯度/∑y 纯度 ），结果见表4。根据综合评分，选择活性炭用
间 2 h 在提高目标分转移率方面优势明显，故设为固定
量4％进行后续工艺优化。
值，以齐墩果酸、熊果酸的纯度和转移率为考察指标，进
表4 活性炭用量对女贞子总三萜转移率及纯度的影响 一步对复溶乙醇用量（A，倍）、活性炭用量（B，％）、析晶
Tab 4 Effects of the amount of activated carbon on
乙醇体积分数（C，％）这 3 个因素进行优化。取“2.2”项
the transfer rate and purity of total triterpe- 下 女 贞 子 药 材 提 取 浓 缩 液 17 份 ，每 份 50 mL，按
noids from L. lucidum
Box-Behnken响应面法设计试验。试验因素和水平见表
齐墩果酸 熊果酸
活性炭用量，％ 综合评分 6，试验设计和结果见表7，方差分析见表8。
转移率，％ 纯度，％ 转移率，％ 纯度，％
1 91.84 28.81 87.93 8.62 39.13 表6 Box-Behnken响应面试验因素和水平
2 92.32 30.07 86.11 8.76 39.50 Tab 6 Factors and levels of Box-Behnken response
3 89.50 32.78 79.41 9.08 39.54 surface test
4 85.06 34.46 82.65 10.46 41.40
5 82.72 36.95 73.01 10.19 40.44 水平 因素
A，倍 B，％ C，％
4.5 析晶乙醇体积分数 －1 0.5 2 70
精密量取“2.2”项下女贞子药材提取浓缩液4份，每 0 1.0 4 80
份 50 mL，加 4 倍量水，加热至沸腾后，在 0 ℃条件下静 1 1.5 6 90
置2 h，离心，取下层沉淀，冷冻干燥。取干燥沉淀物，加 利用 Design-Expert 8.0.6 软件对表 7 中的数据进行
入1.0倍量乙醇，加热回流0.5 h后，离心，取上清液，用乙 多元拟合，得到女贞子总三萜纯化工艺的综合评分（Y）
醇定容至50 mL。在上述乙醇稀释溶液中加入4％的活 对复溶乙醇用量（A，倍）、活性炭用量（B，％）、析晶乙醇
性炭，振摇 10 min，抽滤，取滤液，加乙醇定容至 50 mL。 体积分数（C，％）的二次多项模拟方程：Y＝53.23+8.43×
在上述乙醇稀释溶液中分别加水调整乙醇体积分数至 A－0.21×B－1.16×C+0.80×A×B－2.48×A×C+1.32×B×
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80％、60％、40％、20％，然后于 4 ℃冷藏静置 12 h 析 C－9.91×A －3.83×B －7.68×C 。根据表8方差分析结
晶。取析晶后溶液，离心，取下层沉淀，冷冻干燥。精密 果可以看出，模型的 F＝85.30、P＜0.000 1，表明模型对
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称取该干燥沉淀物10.00 mg，按“2.3”项下方法制备供试 提取工艺影响显著；计算结果显示，R ＝0.991 0，变异系
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品溶液，再按“3”项下方法测定齐墩果酸和熊果酸含量， 数（CV）＝3.14％，R adj＝0.979 3，表明模型拟合良好、试验
并计算其转移率和纯度，结果见表 5。在实际操作过程 误差较小。模型一次项中 A、C 对工艺有显著影响（P＜
中笔者发现，以 20％乙醇进行析晶，离心后沉淀与上清 0.05），交互项中AC对工艺有显著影响（P＜0.05），二次项
液未能较好分离，且提高离心转速或延长离心时间均无 中A 、B 、C 对工艺有显著影响（P＜0.05）。根据回归方
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改善；以 40％乙醇进行析晶效果略好，但离心后分离效 程中的各项系数及表8方差分析结果可知，在所选因素
中国药房 2020年第31卷第18期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 18 ·2199 ·