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0.413 0、0.010 80～0.215 9 mg/mL 质量浓度范围内与峰 表1 水沉温度对女贞子总三萜转移率的影响
面积呈良好的线性关系。 Tab 1 Effects of water precipitation temperature on
3.2.2 精密度试验 精密量取“2.1”项下齐墩果酸、熊果 transfer rate of total triterpenoids from L. lu-
酸对照品贮备液，分别加甲醇稀释至 0.247 8、0.129 5 cidum
mg/mL，再分别按“3.1”项下色谱条件连续进样测定 6 水沉温度，℃ 齐墩果酸转移率，％ 熊果酸转移率，％
0 100.61 100.70
次，记录峰面积。结果，齐墩果酸、熊果酸峰面积的RSD
20 94.99 82.15
分别为0.26％、0.77％（n＝6），表明仪器精密度良好。 40 93.71 65.26
3.2.3 稳定性试验 取“2.3”项下供试品溶液，在室温下 60 86.07 75.43
80 83.62 64.39
放置0、2、4、6、8、12 h后，分别按“3.1”项下色谱条件进样
4.2 水沉时间
测定，记录峰面积。结果，齐墩果酸、熊果酸峰面积的
精密量取“2.2”项下女贞子药材提取浓缩液6份，每
RSD分别为1.35％、2.20％（n＝6），表明供试品溶液在室
份 50 mL，加 4 倍量水，加热至沸腾后，分别在 0 ℃条件
温下放置12 h内稳定性良好。
下静置 0、1、2、4、8、12 h，离心，取下层沉淀，冷冻干燥。
3.2.4 重复性试验 精密移取“2.3”项下供试品溶液 6
精密称取所得干燥沉淀物10.00 mg，按“2.3”项下方法制
份，按“3.1”项下色谱条件测定，记录峰面积，并按标准曲
备供试品溶液，再按“3”项下方法测定齐墩果酸和熊果
线法计算齐墩果酸、熊果酸含量。结果，两者含量的
酸的含量，并计算其转移率，结果见表 2。由表 2 可知，
RSD 分别为 1.17％、0.63％（n＝6），表明该方法重复性
当水沉时间超过2 h后，随着水沉时间的延长，所得干燥
良好。
沉淀物中齐墩果酸、熊果酸的转移率未见明显增加，甚
3.2.5 加样回收试验 精密量取齐墩果酸、熊果酸质量
至有所降低，故考虑到时间成本和转移效率，选择水沉
浓度分别为 3.102、1.623 mg/mL 的供试品溶液适量，共
时间2 h进行后续工艺优化。
12 份，每 6 份为一组，各组溶液中分别精密加入质量浓
表2 水沉时间对女贞子总三萜转移率的影响
度分别为3.100 mg/mL、1.621 mg/mL的齐墩果酸或熊果 Tab 2 Effects of water precipitation time on transfer
酸对照品溶液适量，按照“3.1”项下色谱条件进样测定并 rate of total triterpenoids from L. lucidum
计算加样回收率。结果，齐墩果酸、熊果酸的平均回收 水沉时间，h 齐墩果酸转移率，％ 熊果酸转移率，％
率分别为 100.24％、101.51％，RSD 均为 0.06％（n＝6）， 0 52.47 46.18
表明该方法准确度良好。 1 76.84 74.20
2 97.36 90.51
4 单因素试验考察女贞子中三萜类成分纯化工艺 4 93.28 90.85
的影响因素 8 92.06 82.02
12 89.97 76.90
本课题组通过前期工艺探索后发现，水沉可除去环
4.3 复溶乙醇用量
烯醚萜苷等极性较大的成分，将沉淀用乙醇复溶后再加
精密量取“2.2”项下女贞子药材提取浓缩液6份，每
活性炭可除去色素等杂质，最后通过调整乙醇体积分
份 50 mL，加 4 倍量水，加热至沸腾后，分别在 0 ℃条件
数，可使齐墩果酸、熊果酸等三萜类成分析出。基于此，
下静置 2 h，离心，取下层沉淀，冷冻干燥。取干燥沉淀
本研究以齐墩果酸和熊果酸转移率为指标，对工艺中的
物，分别加入 0.25、0.5、0.75、1.0、1.25、1.5 倍量乙醇复溶
水沉温度、水沉时间及复溶乙醇用量进行单因素考察；
（沉淀物均折算为原药材量后再计算相应复溶乙醇倍
以上述2种成分的转移率和纯度为指标，对工艺中的活
量，下同），加热回流0.5 h后，离心，取上清液，用乙醇定
性炭用量、析晶乙醇体积分数进行单因素考察。
容至 50 mL。精密量取该乙醇稀释溶液 1.0 mL，加甲醇
4.1 水沉温度
稀释至10 mL，再按“3”项下方法测定齐墩果酸和熊果酸
精密量取“2.2”项下女贞子药材提取浓缩液5份，每 的含量，并计算其转移率，结果见表 3。由表 3 可知，当
份50 mL，加4倍量水，加热至沸腾后，分别在80、60、40、 复溶乙醇用量为 0.5 倍量时，齐墩果酸和熊果酸的转移
20、0 ℃条件下静置 2 h，以 4 500 r/min 离心 5 min（以下 率明显高于乙醇用量为 0.25 倍量时的转移率；当以 1.0
同），取下层沉淀，冷冻干燥。精密称取所得干燥沉淀物 倍量乙醇复溶后，齐墩果酸、熊果酸的转移率已达到较
10.00 mg，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“3”项 高水平，再继续增加乙醇用量，两种成分转移率未见明
下方法测定齐墩果酸和熊果酸的含量，并计算其转移率 显提高，反而造成溶剂浪费，故选择复溶乙醇用量1.0倍
（转移率＝待测成分测得量/待测成分加入量×100％）， 量进行后续工艺优化。
结果见表1。由表1可知，水沉温度越低，所得干燥沉淀 4.4 活性炭用量
物中齐墩果酸、熊果酸的转移率越高。水沉的目的是除 精密量取“2.2”项下女贞子药材提取浓缩液5份，每
去环烯醚萜苷等极性大的成分，需尽可能保证有效成分 份 50 mL，加 4 倍量水，加热至沸腾后，在 0 ℃条件下静
的转移率，故选择水沉温度0 ℃进行后续工艺优化。 置2 h，离心，取下层沉淀，冷冻干燥。取干燥沉淀物，加

·2198 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 18 中国药房 2020年第31卷第18期