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分主要为齐墩果酸，而齐墩果酸和熊果酸互为异构体 2.2 女贞子药材提取浓缩液
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（化学结构式见图1），通过溶剂法很难将两者分离，故两 根据本课题组前期研究的提取工艺 ，称取女贞子
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者常同时作为女贞子总三萜的代表成分 ；而且，两种成 药材适量，分别加入 8、6、4 倍量（按 mL/g 计，下同）的
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分均具有广泛的生物活性，如抗糖尿病 、抗肿瘤 、保 60％乙醇，加热回流提取 3 次，每次提取 3 h；合并提取
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肝 及抗骨质疏松 等。基于此，本研究在前期女贞子 液，减压浓缩至1 g/mL（以原药材量计），即得。
提取工艺研究的基础上，以齐墩果酸和熊果酸作为女贞 2.3 总三萜纯化工艺供试品溶液
子总三萜的主要指标成分，以两者的纯度和转移率为考 精密称取纯化工艺相应步骤所得干燥沉淀物10.00
察指标，通过单因素试验和 Box-Behnken 响应面法，筛 mg，置于25 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容，摇匀，滤过，
选女贞子总三萜的最佳纯化工艺，为MPS治疗新药贞芍 取续滤液，即得。
醇苷胶囊的研制和开发奠定基础。 3 齐墩果酸和熊果酸含量测定方法的建立
3.1 色谱条件及系统适用性考察
色 谱 柱 ：Thermo BDS Hypersil C18 （250 mm × 4.6
mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.02％乙酸铵溶液（80 ∶ 20，
V/V）；检测波长：210 nm；柱温：30 ℃；流速：1.0 mL/min；
进样量：20 μL。取齐墩果酸、熊果酸对照品溶液（“2.1”
A.齐墩果酸 B.熊果酸
项下对照品贮备液以甲醇适度稀释）和供试品溶液，以
图1 齐墩果酸和熊果酸的化学结构式
甲醇为空白溶剂，进样分析，记录色谱图。结果，齐墩果
Fig 1 Chemical structural formulas of oleanolic acid 酸、熊果酸理论板数均大于10 000，分离度均大于1.5，空
and ursolic acid 白溶剂不干扰测定。色谱图见图2（空白溶剂图略）。
1 材料 75
30
1.1 仪器 20 50
1260 型高效液相色谱仪（美国 Agilent 公司）；KDM mAU 10 mAU 25
型电热套（山东鄄城华鲁电热仪器有限公司）；DLSB-ZC 0 0
型低温循环真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；E-6000 5 10 15 20 25 30 5 10 15 20 25 30
t，min t，min
型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；TDL-5-A型离心 A.齐墩果酸对照品溶液 B.熊果酸对照品溶液
机（上海安亭科学仪器厂）；DZF-6051型真空干燥箱（上 60
海精宏试验设备有限公司）；Free Zone型冷冻干燥机（美 40
国 Labconco 公司）；BS110S 型分析天平（北京赛多利斯 mAU 20
天平有限公司）；New Classic MC 型十万分之一电子天 0
平（瑞士Mettler Toledo公司）。 5 10 15 20 25 30
t，min
1.2 药品与试剂 C.供试品溶液
齐 墩 果 酸 对 照 品（批 号 ：110709-201607，纯 度 ： 注：1.齐墩果酸；2.熊果酸
91.7％）、熊果酸对照品（批号：110742-201622，纯度： Note：1. oleanolic acid；2. ursolic acid
94.7％）均购自中国食品药品检定研究院；甲醇、乙酸铵、 图2 齐墩果酸、熊果酸的高效液相色谱图
异丙醇为色谱纯，乙醇、活性炭等其余试剂均为分析纯， Fig 2 HPLC chromatograms of oleanolic acid and ur-
水为超纯水（山东中医药大学自制）。 solic acid
女贞子药材（批号：20170601）购自安徽九合堂国药 3.2 方法学考察
有限公司，经山东中医药大学药学院李峰教授鉴定为木 3.2.1 线性关系考察 精密吸取“2.1”项下齐墩果酸、熊
犀科植物女贞[L. lucidum Ait.]的干燥成熟果实，按照 果酸对照品贮备液适量，分别加甲醇稀释，制备齐墩果
2015年版《中国药典》（一部）“女贞子”项下要求检查，结 酸质量浓度分别为 0.413 0、0.330 4、0.247 8、0.165 2、
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果均符合规定 。 0.082 60、0.020 65 mg/mL，熊果酸质量浓度分别为0.215 9、
2 样品溶液的制备 0.172 7、0.129 5、0.086 36、0.043 18、0.010 80 mg/mL 的
2.1 对照品贮备液 系列对照品溶液。取上述对照品溶液，按“3.1”项下色谱
精密称取齐墩果酸对照品 11.26 mg，置于 25 mL 条件进样测定，记录峰面积。分别以对照品溶液质量浓
量瓶中，加甲醇溶解并定容，制成质量浓度为 0.413 0 度为横坐标（X，mg/mL）、峰面积为纵坐标（Y）进行回归
mg/mL的齐墩果酸对照品贮备液；精密称取熊果酸对照 分析，结果得齐墩果酸回归方程为 Y＝9 456.7X+28.773
品 11.40 mg，置于 50 mL 量瓶中，加甲醇溶解并定容，制 （R ＝0.999 0）、熊果酸回归方程为 Y＝9 744.9X+41.257
2
2
成质量浓度为0.215 9 mg/mL的熊果酸对照品贮备液。 （R ＝0.999 3），表明齐墩果酸、熊果酸分别在0.020 65～

中国药房 2020年第31卷第18期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 18 ·2197 ·