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Using acarbose as control,4-nitrophenol-α-D-glucopyranoside method was used to investigate in vitro inhibitory activity of
polysaccharide from L. chinensis seed to α-glucosidase. RESULTS:The optimal technology was the ratio of material to liquid 1 ∶ 19
(g/mL),decocting for 3 times,1 h for each time,concentrating the water extract to 40% of original volume,and adding ethanol
to 80% volume fraction. After deproteinization by Sevage method,the crude polysaccharide of L. chinensis seed was obtained. The
results of 3 times of validation tests showed that,extraction rates of polysaccharide were 7.61% ,7.89% ,7.99% ,average
extraction rate was 7.83%(RSD=2.52%,n=3). The contents of polysaccharide were 55.57%,55.83% and 56.66%,average
content was 56.02%(RSD=1.81%,n=3). The inhibitory activity of the polysaccharide from L. chinensis seed to α-glucosidase
were increased as concentration;its IC50 was 0.056 mg/mL,which was lower than positive control acarbose (0.196 mg/mL).
CONCLUSIONS:The optimal water extraction-ethanol precipitation technology of polysaccharide from L. chinensis seed is stable
and feasible. The polysaccharide from L. chinensis seed show significant in vitro inhibitory effect on α-glucosidase,which is better
than that of acarbose.
KEYWORDS Polysaccharide from Litchi chinensis seed;Water extraction-ethanol precipitation technology;Response surface
methodology;Single factor test;Technology optimization;α-glucosidase
荔 枝 核 为 无 患 子 科 植 物 荔 枝(Litchi chinensis 1.2 药品与试剂
Sonn.)的干燥成熟种子,主要产于我国的华南和东南等 荔枝核药材(批号:20190519)购自安徽亳州药材公
地区,又名荔仁、荔核等。荔枝核具有行气散结、祛寒止 司,经长春中医药大学人参研究院高其品教授鉴定为无
痛的功效,主要用于治疗寒疝腹痛、睾丸肿痛 [1-2] 。荔枝 患子科植物荔枝(L. chinensis Sonn.)的干燥成熟种子;
核的化学成分主要包括糖类、蛋白质与氨基酸类、有机 阿卡波糖对照品(批号:100808-201905,纯度:≥98%)、
酸、脂肪酸类、挥发油类、黄酮类、甾体类等 [3-5] ,其中多糖 葡萄糖对照品(批号:110833-201908,纯度:99.9%)均购
[6]
的含量约为2.85%~3.34% 。目前,荔枝核的研究主要 自中国食品药品检定研究院;α-葡萄糖苷酶(批号:
集中在黄酮类 [7-9] 和皂苷类 [10-12] 成分,而有关其多糖的研 SLBT8587)、4-硝基酚-α-D-吡喃葡萄糖苷(PNPG,批号:
究很少。多糖类化合物是中药中重要的一类活性物质, HY-15927)均购自美国Sigma公司;磷酸氢二钾、磷酸二
因其活性高、毒副作用小,日益受到学者的关注。已有 氢钾、碳酸氢钠均购自北京化工厂有限责任公司;正丁
研 究 表 明 ,荔 枝 核 多 糖 类 化 合 物 具 有 降 血 糖 的 作 醇、浓硫酸、苯酚、无水乙醇、三氯甲烷等试剂均为分析
用 [13-14] 。本课题组前期从荔枝核的降糖部位中分离得到 纯,水为纯化水。
均一多糖——荔枝核多糖(Litchi seed polysaccharide,以 2 方法与结果
[15]
下简称“LP”) 。在本研究中,笔者拟对LP的提取工艺 2.1 多糖含量测定方法的建立
进行优化。LP 现有提取工艺包括超声波提取 和表面 以葡萄糖为对照,采用苯酚-硫酸比色法 测定多糖
[16]
[19]
活性剂(聚山梨酯80)协同酶解辅助水解法 等,其中超 含量。
[17]
声波提取在生产中受仪器制约;而聚山梨酯80是一种亲 2.1.1 对照品溶液的制备 取干燥至恒定质量的葡萄
水性的表面活性剂,具有很强的细胞膜破坏能力以及溶 糖对照品适量,用水稀释,制成质量浓度约为100.0 μg/mL
血性和致敏性(组胺释放),故上述两种提取方法均不适 的对照品溶液,备用。
合于大规模生产。已有研究表明,水提醇沉法为提取多 2.1.2 供试品溶液的制备 精密称取 LP 干燥粉末(所
糖最常用的方法 ,该法简便、易行,由于不需要额外的 制 LP 经干燥、粉碎,过 80 目筛,即得)适量,加水溶解并
[18]
设备,所以提取成本较低。为此,本研究以LP提取率为 稀释至100 mL,混匀,分别精密吸取0.4 mL,加水定容至
指标,对其水提醇沉工艺进行优化并初步研究其体外降 1.0 mL,即得质量浓度为80 μg/mL的供试品溶液,备用。
糖活性,为荔枝核的进一步开发利用提供参考。 2.1.3 标准曲线的绘制 分别精密吸取“2.1.1”项下葡
1 材料 萄糖对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL,加水至1.0 mL
1.1 仪器 (质量分别为 20.8~104 μg);加入 5%苯酚溶液 1.0 mL,
UV754 型紫外-可见分光光度计(上海佑科仪器仪 混匀;加入浓硫酸 5.0 mL,混匀;放冷至室温,以水为空
表有限公司);AB204-N型分析天平(北京赛多利斯仪器 白对照,采用紫外-可见分光光度计于 490 nm 波长处测
系统有限公司);TL-5.0型台式离心机(上海市离心机械 定吸光度。以葡萄糖质量(x,μg)为横坐标、吸光度(y)
研究所有限公司);MK3型酶标仪[热电(上海)科技仪器 为纵坐标进行线性回归,得回归方程 y=0.010 5x-
有限公司];DHP-9052型电热恒温培养箱(苏州江东精密 0.020 2(r=0.999 1),表明葡萄糖检测质量的线性范围
仪器有限公司)。 为20.8~104 μg。
·1996 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 16 中国药房 2020年第31卷第16期