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状，加原体积的水可迅速恢复至冻干前状态，且粒径和 制备无BRE的空白辅料混悬溶液，按“2.3.2”项下方法制
PDI与混悬液状态所测结果无显著性差异为其冻干工艺 备无BRE的空白纳米晶，再按“2.4.3”项下方法制备空白
合格的筛选标准 。 辅料溶液。
[12]
2.3.1 冻干保护剂种类的筛选 取“2.2.3”项下制得的 2.4.5 专属性考察 取上述野黄芩苷对照品溶液、供试
BRE 纳米晶混悬液 15 mL，分别加入冻干保护剂 5％甘 品溶液、空白辅料溶液，按照“2.4.1”项下色谱条件进样
露醇、5％葡萄糖、5％乳糖各 0.75 g，同时考察不加入冻 分析，记录色谱图。结果，野黄芩苷的峰形对称，且空白
干剂的情况（不需振摇），振摇使其溶解均匀，分装于 25 辅料对其色谱峰无干扰，表明方法专属性良好。色谱图
mL 西林瓶中，于－40 ℃条件下预冻 5 h 后，加热升温 见图7。
至－20 ℃，维持此温度 20 h 后，加热升温至 20 ℃，并维 野黄芩苷
140 000
持此温度 5 h，即得 BRE 纳米晶。观察所制 BRE 纳米晶 120 000
的外观，并取适量以水溶解后，测定其粒径和PDI。平行 100 000
80 000
试验3次，以筛选冻干保护剂种类。结果，加入冻干保护 mAU 60 000
40 000
剂和不加冻干保护剂对 BRE 粒径和 PDI 的影响差异不
20 000
大，因此，选择不加冻干保护剂。冻干保护剂的筛选结 0
0 1 2 3 4 5 6 7 8
果见表1。 t，min
A.野黄芩苷对照品溶液
表1 冻干保护剂种类的筛选结果（x±±s，n＝3）
240 000 野黄芩苷
Tab 1 Screening result of lyoprotectants type（x±±s， 220 000
200 000
n＝3） 180 000
160 000
140 000
保护剂种类 外观 粒径，nm PDI mAU 120 000
100 000
5％甘露醇 质地疏松、色泽均匀的黄色粉末 284.86±3.87 0.225±0.018 80 000
60 000
5％葡萄糖 质地疏松、色泽均匀的黄色粉末 280.48±4.52 0.220±0.012 40 000
5％乳糖 质地疏松、色泽均匀的黄色粉末 287.56±4.69 0.219±0.020 20 000 0
不加保护剂 质地疏松、色泽均匀的黄色粉末 283.09±3.51 0.212±0.017 0 1 2 3 4 5 6 7 8
t，min
2.3.2 BRE 纳米晶冻干工艺验证 取“2.2.3”项下制得 B.供试品溶液
的 BRE 纳米晶混悬液 15 mL，分装于 25 mL 西林瓶中， －100
按“2.3.1”项下“于－40 ℃条件下预冻 5 h 后……并维持 －200
－300
此温度5 h”的步骤操作，平行制备3批BRE纳米晶。观 mAU －400
－500
察所制 BRE 纳米晶的外观，并取适量水溶解后，测定其 －600
－700
粒径和PDI。结果，BRE纳米晶混悬液冻干后不皱缩、无 －800
－900
塌陷，色泽均匀、无花斑，平均粒径为（283.09±3.51）nm， 0 1 2 3 4 5 6 7 8
t，min
平均PDI为0.212±0.017。
C.空白辅料溶液
2.4 BRE纳米晶中野黄芩苷含量测定方法的建立
图7 高效液相色谱图
2.4.1 色谱条件 色谱柱为 Diamonsil C18 （250 mm×4.6
Fig 7 HPLC chromatograms
mm，5 μm）；流动相为甲醇-0.1％甲酸水溶液（60 ∶ 40，
2.4.6 线性关系考察 分别精密量取“2.4.2”项下野黄
V/V）；检测波长为 335 nm；流速为 900 mL/min；柱温为
芩苷对照品贮备液 0.06、0.125、0.25、0.75、1.00、1.25 mL
35 ℃；进样量为10 μL。
2.4.2 野黄芩苷对照品溶液制备 精密称取野黄芩苷 至 5 mL 量瓶中，加甲醇稀释制成质量浓度分别为 4.8、
对照品10 mg于25 mL量瓶中，用甲醇溶解并定容，制成 10、20、60、80、100 μg/mL的系列线性溶液，用0.45 μm微
质量浓度为 400 μg/mL 的对照品贮备液；精密吸取 750 孔滤膜滤过后，取续滤液，按“2.4.1”项下色谱条件进样
μL 对照品贮备液于 5 mL 量瓶中，加甲醇制成质量浓度 分析，记录峰面积。以野黄芩苷质量浓度为横坐标（x，
为60 μg/mL的野黄芩苷对照品溶液。 μg/mL）、峰面积为纵坐标（y）进行回归分析，得回归方程
2.4.3 供试品溶液制备 精密称取“2.3.2”项下制备的 为 y＝21 485x－25 461（r＝0.999 6），表明野黄芩苷质量
BRE 纳米晶 15 mg（相当于含 BRE 10 mg），参照 2015 年 浓度线性范围为4.8～100 μg/mL。
[13]
版《中国药典》（四部）中溶出度测定第三法（小杯法） ， 2.4.7 检测限与定量限考察 取“2.4.6”项下制备的质
以 200 mL 水作为溶出介质，设置水温为（37±0.5）℃、 量浓度为 4.8 μg/mL 的野黄芩苷对照品溶液适量，用甲
转速为 35 r/min，于投样后 60 min 取样 3 mL，用 0.45 μm 醇倍比稀释，按“2.4.1”项下色谱条件进样分析，以信噪
微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。 比 3 ∶ 1、10 ∶ 1 分别计算检测限和定量限。结果，野黄芩
2.4.4 空白辅料溶液 按“2.2.3”项下处方比例和方法 苷的检测限为0.066 8 μg/mL，定量限为0.131 5 μg/mL。

·1864 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 15 中国药房 2020年第31卷第15期