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柠檬酚对人肝癌 HepG2 细胞增殖、迁移和骨架相关蛋白表达的

影响及其与蛋白作用方式研究 Δ

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黄周锋 1，2＊ ，胡筱希 ，陆国寿 ，黄建猷 ，谭 晓（1.广西壮族自治区中医药研究院，南宁 530022；2.广西中药
质量标准研究重点实验室，南宁 530022）
中图分类号 R965 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2020）15-1849-06
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2020.15.10

摘 要 目的：研究柠檬酚对人肝癌HepG2细胞增殖、迁移及骨架相关蛋白表达的影响，并探讨其与骨架相关蛋白的相互作用方
式。方法：采用CCK-8法检测不同浓度柠檬酚（12.5、25、50、100、200 μmol/L）作用24 h后对HepG2细胞增殖的影响。将HepG2细
胞分为阴性对照组和柠檬酚低、高浓度组（50、100 μmol/L柠檬酚），加入相应药物作用24 h后，采用划痕试验检测细胞的迁移能力
并计算细胞迁移率，采用逆转录-聚合酶链式反应和 Western blotting 法检测细胞中聚合纤维状肌动蛋白（F-actin）、β-微管蛋白
（β-tubulin）及埃兹蛋白（Ezrin）的mRNA和蛋白表达水平。利用分子对接软件Schrodinger 2015分析柠檬酚与上述3种蛋白的分子
作用方式。结果：柠檬酚对HepG2细胞增殖具有显著抑制作用（P＜0.05或P＜0.01），且呈剂量依赖趋势。与阴性对照组比较，柠
檬酚低、高浓度组细胞迁移率和F-actin、β-tubulin、Ezrin 的mRNA及蛋白表达水平显著降低（P＜0.05或P＜0.01）。分子对接结果
显示，柠檬酚可与上述3种细胞骨架蛋白形成氢键和疏水键。结论：柠檬酚可抑制肝癌HepG2细胞的增殖和迁移；其作用机制可
能与下调F-actin、β-tubulin、Ezrin 的mRNA及蛋白表达有关；其与骨架相关蛋白的作用方式可能是形成氢键或疏水键。
关键词 柠檬酚；人肝癌HepG2细胞；增殖；迁移；骨架相关蛋白；分子对接

Study on the Effects of Citrusinol on the Proliferation，Migration and the Expression of Skeleton-related
Proteins of Human Hepatocellular Cells HepG2 and Its Interaction Mode with Skeleton-related Proteins
HUANG Zhoufeng ，HU Xiaoxi ，LU Guoshou ，HUANG Jianyou ，TAN Xiao（1. Guangxi Zhuang Autonomous
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Region Institute of TCM，Nanning 530022，China；2. Guangxi Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine
Quality Standard，Nanning 530022，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To study the effects of citrusinol on proliferation，migration and the expression of skeleton-related
proteins of human hepatocellular cells HepG2，and to investigate its interaction mode with skeleton-related proteins. METHODS：
CCK-8 assay was used to detect the effects of different concentrations（12.5，25，50，100，200 μ mol/L）of citrusinol on the
proliferation of HepG2 cells for 24 h. HepG2 cells were divided into negative control group，citrusinol low-concentration and
high-concentration groups（50，100 μmol/L citrusinol）. After treated for 24 h，the migration of HepG2 cells was detected by cell
scratch test；cell migration rate was calculated. mRNA and protein expression of F-actin，β-tubulin and Ezrin in HepG2 cells were
determined by RT-PCR and Western blotting assay. Molecular docking software Schrodinger 2015 was used to analyze the
interaction mode between citrusinol and above 3 kinds of proteins. RESULTS：Citrusinol showed significant inhibition effect on the
proliferation of HepG2 cells （P＜0.05 or P＜0.01），in dose-dependent trend. Compared with negative control group，cell
migration， mRNA and protein expression levels of F-actin， β-tubulin， Ezrin were decreased significantly in citrusinol
low-concentration and high-concentration groups（P＜0.05 or P＜0.01）. Molecular docking results showed that the citrusinol could
form hydrogen bond and hydrophobic bond with the above 3 skeleton-related proteins. CONCLUSIONS：Citrusinol can inhibit the
proliferation and migration of HepG2 cells，the mechanism may be associated with the down-regulation of mRNA and protein
expression of F-actin，β-tubulin and Ezrin. The mode of its interaction with skeleton-related proteins may be the formation of
hydrogen bond or hydrophobic bond.
KEYWORDS Citrusinol；HepG2 cells；Proliferation；Migration；Skeleton-related proteins；Molecule docking

Δ 基金项目：广西自然科学基金青年科学项目（No.2017GXNSF-
BA198214）；广 西 自 然 科 学 基 金 面 上 项 目（No.2019GXNS- 肝癌是常见的恶性肿瘤之一，发病率和病死率均很
FAA245081）；广西科技计划项目（No.桂科 AD18216002，No.桂科 高。近年来研究发现，从中药中提取分离的天然有效成
AD17195002） 分在肿瘤疾病的治疗中起到了积极作用 。柠檬酚是从
[1]
＊助理研究员，硕士。研究方向：天然药物化学。电话：0771-
壮瑶药材小槐花中分离得到的活性成分 ，是一种 A 环
[2]
5868986。E-mail：ferhung@126.com
并吡喃环黄酮类化合物（化学结构式见图1）。相关研究
# 通信作者：助理研究员，硕士。研究方向：天然药物化学。电
话：0771-5868986。E-mail：huxiaoxi0124@126.com 发现，具有A环并吡喃环黄酮结构的成分表现出良好的
中国药房 2020年第31卷第15期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 15 ·1849 ·