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腊至水，以磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤2次，每次7 min；滴 绒草单用组、雷公藤多苷片组和盐酸贝那普利片组大鼠
加3％过氧化氢溶液后，室温放置10 min，水洗脱2 min× 肾质量均显著降低（P＜0.05）。各组大鼠右侧肾质量测
3 次；将切片浸入 0.01 mol/L 枸橼酸盐溶液（pH 6.0）中， 定结果见表1。
加热至沸腾后取出，以 PBS 洗涤 5 min×2 次；滴加 5％ 表1 各组大鼠右侧肾质量测定结果（x±±s，n＝10）
BSA 封闭液，室温孵育 20 min；滴加 NF-κB p65 一抗 Tab 1 Right kidney weight of rats in each group（x±±
（1 ∶ 100），4 ℃孵育过夜；PBS洗涤7 min×3次，滴加二抗 s，n＝10）
（1 ∶ 4 000），37 ℃孵育20 min；PBS洗涤7 min×3次，加入 组别 右侧肾质量，g
二氨基联苯胺显色后以苏木素复染；水清洗，脱水，透 假手术组 0.85±0.08
模型组 1.76±0.10 ＊＊
明，树脂胶封片，在光学显微镜下进行观察。细胞内棕
火绒草+黄芪高剂量组 1.18±0.14 #
黄色颗粒为 NF-κB p65 蛋白阳性表达。用 JEOA 801D 火绒草+黄芪中剂量组 1.60±0.11
形态学图像分析系统计算各组大鼠肾组织中阳性细胞 火绒草+黄芪低剂量组 1.92±0.17
火绒草单用组 1.32±0.12 #
的平均光密度值，用来表示目标蛋白表达水平。
雷公藤多苷片组 1.13±0.12 #
2.7 肾组织中 NF-κB p65、IκBα、ERK、p-ERK 和 p38 盐酸贝那普利片组 1.09±0.11 #
MAPK蛋白表达水平测定 注：与假手术组比较， P＜0.01；与模型组比较，P＜0.05
＊＊
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#
＊ ＊
采用Western blotting法检测。每组随机选取5只大 Note：vs. sham operation group， P＜0.01；vs. model group，P＜
鼠肾组织（“2.5”项下冷冻保存），解冻后加入 RIPA 裂解 0.05
3.3 大鼠24 h尿蛋白和血肌酐、尿肌酐水平测定结果
液，用剪刀快速将组织剪成小碎块，匀浆，在4 ℃条件下
与假手术组比较，模型组大鼠 24 h 尿蛋白、血肌酐
以 12 000 r/min 离心 20 min，采用二喹啉甲酸（BCA）法
水平显著升高（P＜0.01），尿肌酐水平显著降低（P＜
测定蛋白浓度。蛋白变性后，取 50 µg 总蛋白进行十二
0.01）。与模型组比较，火绒草+黄芪高剂量组和雷公藤
烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳，然后以
多苷片组大鼠24 h尿蛋白、血肌酐水平均显著降低（P＜
恒流（100 mA，2 h）电转至聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上；以
0.05 或 P＜0.01），尿肌酐水平均显著升高（P＜0.01）；火
5％脱脂奶粉室温封闭2 h，分别加入NF-κB p65（1∶400）、
绒草单用组大鼠血肌酐水平显著降低（P＜0.05），尿肌
IκBα（1 ∶ 300）、ERK（1 ∶ 1 000）、p-ERK（1 ∶ 800）、p38
酐水平显著升高（P＜0.05），但 24 h 尿蛋白水平差异无
MAPK（1 ∶ 400）和β-actin（1 ∶ 1 000）一抗，4 ℃下孵育过
统计学意义（P＞0.05）；盐酸贝那普利片组大鼠 24 h 尿
夜；PBS洗膜10 min×3次，然后加入二抗（1∶4 000），室温孵
蛋白水平显著降低（P＜0.05），尿肌酐水平显著升高
育 2 h；PBS 洗膜 10 min×3 次，加入发光液（ECL）进行曝
（P＜0.01），但 血 肌 酐 水 平 差 异 无 统 计 学 意 义（P＞
光，在凝胶成像系统中显影。用 Image J V1.8.0.112 图
0.05）。各组大鼠24 h尿蛋白和血肌酐、尿肌酐水平测定
像分析软件进行灰度值分析，以目标蛋白条带与内参
结果见表2。
β-actin条带的灰度值比值表示目标蛋白的表达水平。
表 2 各组大鼠 24 h 尿蛋白和血肌酐、尿肌酐水平测定
2.8 统计学方法
结果（x±±s，n＝10）
采用SPSS 17.0统计学软件进行数据分析。计量资
Tab 2 24 h urine protein，serum creatinine and urine
料以x±s表示。首先对数据进行正态性检验，符合正态
creatinine of rats in each group（x±±s，n＝10）
分布的数据，多组间比较采用单因素方差分析，若方差
组别 24 h尿蛋白，mg/L 血肌酐，μmol/L 尿肌酐，μmol/L
齐性则采用LSD检验进行组间两两比较，若方差不齐性
假手术组 6.53±1.66 13.41±2.64 17.46±2.57
则采用 Dunnett’s T3 检验进行组间两两比较；若不符合 模型组 23.35±3.49 ＊＊ 39.15±8.05 ＊＊ 6.91±0.90 ＊＊
正态分布，则采用非参数检验进行组间比较。P＜0.05 火绒草+黄芪高剂量组 9.00±1.11 # 26.96±11.07 # 14.10±2.36 ##
火绒草+黄芪中剂量组 22.90±3.80 36.74±6.18 10.64±1.19
表示差异具有统计学意义。
火绒草+黄芪低剂量组 24.88±9.18 33.71±4.10 9.67±1.74
3 结果 火绒草单用组 21.00±2.02 28.98±7.48 # 12.80±1.72 #
3.1 大鼠一般情况观察结果 雷公藤多苷片组 8.80±1.13 # 25.39±7.92 ## 16.59±3.74 ##
盐酸贝那普利片组 8.83±0.87 # 32.92±10.83 13.04±2.19 ##
造模后，假手术组大鼠精神状态良好，活动度佳，饮
注：与假手术组比较， P＜0.01；与模型组比较，P＜0.05，P＜
#
##
＊＊
食正常；各造模大鼠出现饮食减少、倦怠懒动、精神萎
0.01
靡、毛发无光泽等情况。灌胃给药后，各给药组大鼠的 Note：vs. sham operation group， P＜0.01；vs. model group，P＜
#
＊ ＊
饮食和饮水量、毛发光泽度以及活动情况均较给药前有 0.05，P＜0.01
##
所改善；模型组大鼠一般情况无明显变化。 3.4 大鼠肾组织病理形态学观察结果
3.2 大鼠右侧肾质量测定结果 假手术组大鼠的肾小球结构无明显变化，胞外基质
与假手术组比较，模型组大鼠右侧肾质量显著增加 及系膜细胞未见增多，无炎性细胞浸润。模型组大鼠的
（P＜0.01）。与模型组比较，火绒草+黄芪高剂量组、火 肾小球明显肥大，偶有肾小球萎缩，系膜区细胞呈弥漫
中国药房 2020年第31卷第15期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 15 ·1845 ·