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物工程有限公司，批号：13J31H10J1022）；其余试剂均为                    2.3 分组与给药
        分析纯，水为纯净水。                                              大鼠适应性饲养 1 周后，按体质量随机分为假手术
        1.3 动物                                              组（n＝10）和造模组（n＝75）。造模组大鼠按“2.1”项下
            SPF 级健康 SD 大鼠 85 只，雄性，体质量 180～220               操作复制 MsPGN 模型；假手术组大鼠在麻醉后开腹暴
        g，由辽宁长生生物技术有限公司提供，实验动物生产合                           露左侧肾脏，但不切除，其余步骤同造模组（皮下、腹腔、
        格证号：SCXY（辽）2015-0001。所有受试动物均饲养于                     尾静脉注射的均为生理盐水）。造模组大鼠在手术过程
        辽宁中医药大学实验动物中心，分笼饲养（每笼5只），饲                          中死亡2只（因手术线裂开、皮肤切口处感染导致），尾静
        养室温度为 20～23 ℃、相对湿度为 50％～60％。本研                      脉注射 LPS 引发超敏反应死亡 2 只，造模结束后 24 h 尿
        究经辽宁中医药大学动物伦理委员会批准，实验操作符                            常规检验显示尿蛋白为阴性1只，共有70只大鼠造模成
        合《实验动物管理条例》要求。                                      功。将这 70 只大鼠按体质量随机分为模型组，火绒草-
        2 方法                                                黄芪高、中、低剂量组（4.05、2.03、1.02 g/kg，以生药总量
        2.1 药物制备                                            计），火绒草单用组（2.70 g/kg，以生药量计），雷公藤多苷
        2.1.1  火绒草单煎液        取火绒草 150 g，加入 1 500 mL         片组（阳性对照 1，0.02 g/kg），盐酸贝那普利片组（阳性
        水，浸泡 30 min 后，煎煮 2 h，滤过，收集滤液；残渣加                    对照 2，0.02 g/kg），每组 10 只。各给药组大鼠灌胃相应
        1 000 mL水，煎煮1 h，滤过，收集滤液；残渣再加500 mL                  药物，假手术组与模型组大鼠灌胃相应体积蒸馏水，每
        水，煎煮0.5 h，滤过，收集滤液。合并3次滤液，浓缩，得                       天1次，给药体积均为15 mL/kg，连续给药5周。参照火
        到终体积约为833 mL的浓缩液（得率约为0.18 g/mL，以                    绒草民间用量为 15 g，黄芪在 2015 年版《中国药典》（一
        生药量计），于4 ℃下保存，待用。                                   部）中的用量为9～30 g设置剂量。火绒草+黄芪给药组
        2.1.2  火绒草-黄芪混煎液          取火绒草 150 g、黄芪 300         剂量设置依据：按火绒草人用量 15 g、黄芪人用量 30 g
        g，加4 500 mL水，浸泡30 min后，煎煮2 h，滤过，收集滤                 计，大鼠用量为45 g×0.018（大鼠200 g与人70 kg体质量
        液；残渣加 3 000 mL 水，煎煮 1 h，滤过，收集滤液；残渣                  的系数比）×5＝4.05 g/kg（以生药总量计），以此为高剂
        再加1 500 mL水，煎煮0.5 h，滤过，收集滤液。合并3次                    量；倍比稀释后，以其1/2、1/4倍剂量作为中、低剂量。火
        滤液，浓缩，得到终体积约为1 666 mL的浓缩液（得率约                       绒草单用组剂量设置依据：按火绒草人用量 15 g 计，大
        为0.27 g/mL，以生药总量计），于4 ℃下保存，待用。                      鼠用量为 15 g×0.018（系数比同上）×5＝1.35 g/kg（以生
        2.2  MsPGN模型的制备                                     药量计），以其2倍量（即2.7 g/kg，以生药量计）为大鼠的
            参考文献方法 并加以改进。大鼠用 10％水合氯                         给药剂量。雷公藤多苷片组剂量设置依据：按雷公藤多
                         [11]
        醛（3.0 mL/kg）腹腔注射麻醉后，俯卧位放置于无菌操作                      苷片人用量 0.1 g 计，大鼠用量为 0.1 g×0.018（系数比同
        台上，备皮，手术部位依次涂抹碘伏、75％乙醇进行消毒                          上）×5＝0.009 g/kg，其 2 倍量为 0.018 g/kg，为便于给药
        后，沿左肋脊角入口逐层剪开大鼠皮肤及肌肉层，暴露                            选择 0.02 g/kg 作为大鼠的给药剂量。盐酸贝那普利片
                                                                                                 [13]
        肾脏，快速用手术线（75％乙醇提前浸泡）结扎左侧肾脏                          组剂量设置依据：大鼠给药剂量为文献用量 的2倍。
        的肾动脉、肾静脉和输尿管，剪下左侧肾脏，并用青霉素                           2.4  24 h尿蛋白和血肌酐、尿肌酐水平测定
        钠处理结扎处，逐层缝合伤口，消毒，涂抹火棉胶。术后                               于给药结束的前 1 天，用代谢笼收集各组大鼠 24 h
        第 8 天，每只大鼠皮下注射 0.1 mg 弗氏完全佐剂+3 mg                   尿液，按相应试剂盒方法检测 24 h 尿蛋白、尿肌酐水
        BSA；术后第 15、22 天，每只大鼠分别皮下注射 0.1 mg                   平。末次给药 1 h 后，以 10％水合氯醛（3.0 mL/kg）腹腔
        弗氏不完全佐剂+3 mg BSA；术后第 30 天，每只大鼠连                     注射麻醉大鼠，腹主动脉采血，然后以 3 000 r/min 离心
        续 4 次腹腔注射 BSA，每次间隔 1 h，每次剂量分别为                      10 min，取上层血清，按照相应试剂盒说明书操作测定血
        0.5、1.0、1.5、3.0 mg；术后第 31 天，每只大鼠腹腔注射                清中肌酐水平。
        2.0 mg BSA；自术后第 37 天起，每只大鼠每日 1 次腹腔                  2.5 肾质量测定及肾组织病理形态学观察
        注射BSA，剂量从每只0.5 mg开始，每日增加0.5 mg，直                        各组大鼠腹主动脉取血后立刻解剖摘取右侧肾组
        至每只大鼠每日剂量达到 5.0 mg；术后第 46～87 天，每                    织，剥离肾外膜，称定肾组织质量。然后将大鼠右侧肾
        只大鼠从每日腹腔注射 BSA 5 mg 开始，每 7 天增加 1                    组织的一半于－80 ℃下冷冻保存，另一半肾组织置于
        mg，直到每日剂量达到 10 mg 为止。此外，于术后第 43                     4％多聚甲醛中固定，常规脱腊脱水后制备切片（厚度为
        天，每只大鼠尾静脉注射 100 µg LPS。于造模结束后                       5 µm），再行苏木精-伊红（HE）染色，在光学显微镜下观
        （即术后第 88 天），采用代谢笼收集大鼠尿液，进行 24 h                     察其病理形态学变化。
        尿蛋白检测，若尿蛋白水平显著升高则视为造模成功 。                           2.6 肾组织中NF-κB p65蛋白表达水平测定
                                                     [12]
        实验造模及给药过程中，对大鼠进行一般状况观察，并                                采用免疫组织化学法。每组随机选取6只大鼠的肾
        对死亡情况进行记录。                                          组织切片（“2.5”项下制备），于干燥箱中（温度 60 ℃）脱


        ·1844  ·  China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 15                                中国药房    2020年第31卷第15期
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