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category，and others clustered into the other category. By principal component analysis，the contribution rates of three principle
        components were 52.834％ ，18.600％ and 8.387％ . Accumulative contribution rate was 79.821％ . Six constituents，such as
        shikonin，acetylshikonin and β，β'-dimethylacrylic acanine were screened as differential markers，representing the major differences
        of A. euchroma. The linear range of above three components were 0.72-90，2.05-410，2.50-500 µg/mL（r all more than 0.999），
        respectively. The limits of quantification were 0.132，0.135，0.118 µg/mL，respectively. The limits of detection were 0.040，0.041，
        0.036 µg/mL，respectively. RSDs of precision，stability （24 h），reproducibility and durability tests were all lower than 3％ .
        Recoveries were 95.959％-100.201％（RSD＝1.669％，n＝6），97.818％-102.698％（RSD＝1.788％，n＝6），95.831％-99.344％
       （RSD＝1.600％ ，n＝6）. The contents of above three components were 0.002％ -0.134％ ，0.025％ -1.388％ ，0.022％ -0.881％ .
        CONCLUSIONS：Established HPLC fingerprint and content determination method are simple and stable，can be used for quality
        evaluation and quantitative analysis of A. euchroma. Shikonin，acetylshikonin and β，β'-dimethylacrylic acanine are different in the
        content and are differential markers of A. euchroma from different source.
        KEYWORDS    Arnebia euchroma；HPLC；Fingerprint；Principle component analysis；Cluster analysis；Orthogonal partial least
        squares discriminate analysis；Content determination


            紫草为我国传统中药材，其种类丰富，药性因产地                         研究其化学组分特征，以筛选其质量差异标志物；同时，
                               [1]
        来源不同而存在明显差异 。在众多种类的紫草药材                            测定了其中3种萘醌类成分（左旋紫草素、乙酰紫草素、
        中，属产自新疆地区的新疆紫草质量最优，有道地药材                           β，β′-二甲基丙烯酰阿卡宁）的含量，旨在从生产源头确
            [2]
        之誉 。新疆紫草[Arnebia euchroma（Royle）Johnst.]又          保药材品质，亦为新疆紫草质量评价标准的完善提供参
        名新疆软紫草，属紫草科软紫草属，为我国二级保护植                           考。
        物，是维医常用药材，被收载于 2015 版《中国药典》（一                      1 材料
        部）中 。该药的主要活性成分为脂溶性的萘醌类天然                           1.1  仪器
             [3]
        色素——紫草素及其衍生物，此外还含有多糖、生物碱、                              LC20-AB 型 HPLC 仪，包括 LC-20AB 型二元泵、
        苯醌等化学成分，具有抗癌、抑菌、抗炎、保肝护肝等活                          SIL-20AC型自动进样器、SPD-M20A型二极管阵列检测
        性 [4-8] 。近年来，随着医药行业的科技创新，新疆紫草不                     器（日本 Shimadzu 公司）；AL204-IC 型电子天平[梅特
        仅被用于临床治疗，还作为天然色素被广泛应用于食                            勒-托利多仪器（上海）有限公司]；JBT/C-YCL400T/3P
        品、化妆品、印染工业等行业中            [9-11] 。由于新疆紫草生长         （D）型超声波药品处理机（济宁金百特工程机械有限公
        周期长，对环境要求苛刻，市场上供应的药材几乎皆为                           司）；RE-52B 型旋转蒸发器（上海洪纪仪器设备有限公
        野生品，加之多年掠夺式采挖严重，导致其野生资源日                           司）；UVS-1 型涡旋振荡器（北京优晟联合科技有限公
        益减少，且至今尚无成熟技术应用于该药材的大规模人                           司）。
        工种植，供需矛盾突出，以致市场上出现以假乱真、以次                          1.2  药品与试剂
                  [2]
        充好等现象 。因此，深入研究新疆紫草的质量监控方                               左旋紫草素对照品（批号：R18D8F50911，纯度：≥
        法，对于确保紫草药材的疗效和提高其药用价值具有重                           98％）、乙酰紫草素对照品（批号：R21J7F16576，纯度：≥
        要意义。                                               98％）、β ，β ′- 二 甲 基 丙 烯 酰 阿 卡 宁 对 照 品（批 号 ：
            指纹图谱和化学模式识别技术是评价中药材质量                          Y02A9H67135，纯度：≥98％）均购自上海源叶生物科技
        的有效手段。其中，指纹图谱主要关注整体性，可全面                           有限公司；甲酸、乙腈为色谱纯，石油醚（60～90 ℃）为分
        揭示药材中含有活性成分的数量与种类；化学模式识别                           析纯，水为纯净水。
        技术则强调差异性，可对指纹图谱数据信息进行充分的                               34 批新疆紫草药材（编号：S1～S34，其中 S1～S14
        整合和校正；两者结合可更加准确、客观地反映中药的                           为野生品、S15～S24为栽培品、S25～S34为市售品），经
        质量差异，进而整体描述和合理评价其质量，已广泛应                           新疆农业大学食品科学与药学学院马生军副教授鉴定
        用于种子鉴定、食品特征成分分析、中药鉴别及质量控                           均为紫草科植物新疆紫草[A. euchroma（Royle）Johnst.]
        制等领域    [12-15] 。目前，新疆紫草的相关研究主要为化学                 的干燥根。样品信息来源见表1。
        成分测定、提取和生物活性分析，而对其指纹图谱的研                           2 方法与结果
        究较少，且多集中于不同产地野生品或市售品指纹图谱                           2.1 HPLC指纹图谱的建立
        方法的建立     [16-20] ，对于新疆紫草栽培品及其化学模式识                2.1.1  供试品溶液的制备          取样品适量，粉碎。精密称
        别的研究尚未见报道。此外，新疆紫草的相关质量标准                           取上述粉末 0.5 g，加入石油醚 25 mL，称定质量，超声
        也仅有 2015 年版《中国药典》（一部）中规定了“β，β′-二                   （功率：250 W，频率：33 kHz）提取 30 min，放冷，再次称
                                           [3]
        甲基丙烯酰阿卡宁含量不得少于 0.3％”。基于此，本                         定质量，用石油醚补足减失的质量，混匀，滤过。取续滤
        研究采用高效液相色谱法（HPLC）建立了 34 批不同来                       液10 mL，置于锥形瓶中，蒸干，残渣加乙腈适量溶解，涡
        源新疆紫草药材的指纹图谱，并结合化学模式识别技术                           旋30 s，加乙腈定容至10 mL量瓶中，摇匀，经0.45 μm微


        中国药房    2020年第31卷第14期                                            China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 14  ·1733  ·
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