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0.01）；GSH content，SOD and GSH-Px activities were increased significantly，while the contents of AECA in BALF and serum
were decreased significantly（P＜0.01）. AECA in BALF of rats in model group was positively correlated with MDA（r＝0.710，
P＜0.05），and the AECA were negatively correlated with GSH，SOD and GSH-Px（r＝－0.754，－0.781，－0.736，P＜0.05）.
CONCLUSIONS：Methylprednisolone sodium succinate may achieve the purpose of the prevention of autoimmune emphysema
through reducing oxidative stress and inhibiting the expression of AECA.
KEYWORDS Autoimmune emphysema； Oxidative stress； Anti-endothelial cell antibodies； Methylprednisolone sodium
succinate；Rat

慢性阻塞性肺疾病（COPD）是常见的呼吸道疾病， 公司，规格500 mL∶4.5 g，作生理盐水用）；其余试剂均为
常因接触有毒的颗粒或气体导致患者气道和肺泡异常， 分析纯。
[1]
以持续的呼吸道症状和气流限制为特征 。肺气肿是指 1.3 动物
终末细支气管远端的气道弹性减退，过度膨胀、充气和 清洁级 SD 大鼠 24 只，雄性，10 周龄，体质量 240～
肺容积增大或伴有气道壁破坏的病理状态。COPD主要 280 g，由重庆市腾鑫科技公司提供，动物生产许可证号
包括慢支炎和肺气肿两种病理变化。国内外研究证实， 为SCXK（渝）2017-0010。实验室按正常昼夜节律，室内
自身免疫反应、氧化应激、抗内皮细胞抗体（AECA）均参 温度约为 22 ℃；所有大鼠均以深圳市腾鑫科技公司提
与了肺气肿或 COPD 的发生 [2-5] ；另外，本课题组前期研 供的无菌全营养饲料喂养，饮水为饮用水。
究也发现，氧化应激与自身免疫性肺气肿的形成关系密 1.4 人脐带
[6]
切 。那么，AECA 是否可通过增强氧化应激的途径而 人脐带样品取自贵州中医药大学第一附属医院产
促进自身免疫性肺气肿的形成？临床上常用的抗免疫 科孕妇足月自然分娩后的脐带，且上报医院医学伦理委
药物糖皮质激素对其干预效果如何？目前国内外尚无 员会批准、备案，并经产妇及其家属签字同意。
文献报道。因此，本研究拟以自身免疫性肺气肿模型大 2 方法
鼠为研究对象，在造模给药后（没有形成肺气肿前）第 2 2.1 细胞培养
[7]
天立即给予甲泼尼龙琥珀酸钠进行干预，检测其肺泡灌 取人脐带样品，参照本课题组前期晏木云 报道的
洗液（BALF）中丙二醛（MDA）、还原型谷胱甘肽（GSH） 提取人脐带静脉内皮细胞方法并加以改进完善后，提取
含量和超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶 静脉内皮细胞，并进行培养、传代及鉴定。
（GSH-Px）活性，以及 BALF 和血清中 AECA 的含量，以 2.2 造模
验证氧化应激指标与 AECA 的关系并评估甲泼尼龙琥 参照国外相关研究及本课题组前期经验 [5，8] 复制模
珀酸钠的预防效果，旨为肺气肿和 COPD 的治疗提供 型，基本步骤如下：取第 5 代人脐带静脉内皮细胞 1×10 7
参考。 个，加入胰蛋白酶，于37 ℃消化约45 s，以1 000 r/min离
1 材料 心 15 min，取沉淀加入新鲜 M199 培养基（其中青霉素-
1.1 仪器 链霉素占 0.97％，胎牛血清占 19.4％，VEGF 占 1.94％）1
CX23 型光学显微镜（日本 Olympus 公司）；ST16R mL后，再加入完全弗氏佐剂1 mL，混匀。将上述混合物
型 高 速 冷 冻 离 心 机（赛 默 飞 世 尔 科 技 公 司）；HH. 注入大鼠腹腔以建立自身免疫性肺气肿模型。
W21.420型电热恒温水浴箱（上海跃进医疗器械有限公 2.3 分组与给药
司）；HF160W型CO2恒温培养箱（新加坡Esco公司）；T6 将SD大鼠随机分为对照组、模型组和干预组，每组
新世纪型分光光度仪（北京普析通用仪器有限责任公 8只。除对照组大鼠单次腹腔注射等体积的完全弗氏佐
司）。 剂外，模型组和干预组大鼠均按“2.2”项下方法单次腹腔
1.2 药品与试剂 注射体外培养的人脐带静脉内皮细胞+完全弗氏佐剂混
注射用甲泼尼龙琥珀酸钠（比利时 Pfizer 公司，批 合物复制自身免疫性肺气肿模型。造模给药后第2天，
号：AJ5591，规格：40 mL）；完全弗氏佐剂（美国 Sig- 干预组大鼠腹腔注射甲泼尼龙琥珀酸钠 10 mg/（kg·d）
[9]
ma-Aldrich公司，批号：20190102，规格：10 mL）；GSH检 （剂量参照李莉等 的报道及本课题组前期研究 设计），
[10]
测试剂盒（美国 Cayman 公司）；GSH-Px 测定试剂盒（南 对照组和模型组大鼠均腹腔注射等体积氯化钠注射液，
京建成生物工程研究所）；SOD、MDA检测试剂盒（美国 每日1次，连续21 d。
AAT Bioquest公司）；AECA酶联免疫吸附测定（ELISA） 2.4 样品采集
试剂盒（美国 Abbkine 公司）；M199 培养基、胎牛血清、 末次给药后，称量各组大鼠体质量，腹腔注射 10％
0.25％胰蛋白酶溶液（美国 Gibco公司）；青霉素-链霉素 水合氯醛（0.3 mL/100 g）麻醉，以仰卧位固定四肢，常规
溶液（美国Hyclone公司）；血管内皮生长因子（VEGF，英 碘伏消毒皮肤后打开腹腔，游离腹主动脉，取腹主动脉血
国Peprotech公司）；苏木精-伊红（HE）染色液（珠海贝索 15 mL左右，分装于3～5个血清管中，于22 ℃下静置30
生物技术有限公司）；氯化钠注射液（贵州科伦药业有限 min后，以2 000 r/min离心10 min，取上清液，置于－80 ℃

中国药房 2020年第31卷第10期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 10 ·1209 ·