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SKOV3 cells proliferation，invasion and metastasis by regulating NF-κB/PRL-3 signaling pathway.
        KEYWORDS    Oleanolic acid；Ovarian cancer；SKOV3 cell；Proliferation；Invasion；Metastasis；NF-κB；PRL-3



            卵巢癌是最常见的女性生殖器官恶性肿瘤之一，其                         能蛋白转膜仪、TC20型细胞计数器、Gel Doc XR型凝胶
        致死率在妇科肿瘤中居首位，对女性生命健康造成严重                           成像系统、iQ5 型实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）仪
        威胁  [1-2] 。卵巢深居盆腔，体积小，卵巢癌早期缺乏典型                    等购自美国 Bio-Rad 公司；M400D 型离心机（上海迈皋
                                       [3]
        症状且发展迅速，极易发生侵袭转移 ，超过70％的患者                         科学仪器有限公司）；ML-T型分析天平（瑞士Mettler To-
                      [4]
        在晚期才被确诊 ，因此临床上卵巢癌治疗效果和患者                           ledo 多公司）；CKX31 型倒置显微镜（日本 Olympus 公
        预后均较差。流行病学调查结果表明，在全球范围内每                           司）。
        年新增卵巢癌病例超过22.5万，死亡人数超过14万                   [5-6] ，  1.2 药品与试剂
        临床在卵巢癌的预防和治疗方面均面临巨大挑战。目                                齐墩果酸对照品（批号：O110087，纯度：＞98％）、脂
        前，临床治疗卵巢癌以药物治疗为主，但奥拉帕利等卵                           多糖（LPS，批号：L118716）均购自上海阿拉丁试剂有限
        巢癌一线治疗药物的长期使用易引发多种不良反应，并                           公司；NF-κB p65质粒（北京华越洋生物科技有限公司，
        导致肿瘤细胞耐药 ，严重影响药物治疗效果及患者预                           批号：VECT76065）；Lipofectamine 2000 转染试剂（批
                        [7]
                                                                                         TM
                                                                                 TM
        后。因此，寻找安全有效防治卵巢癌的药物对于提升卵                           号 ：12566014）、TRIzol RNA 提 取 试 剂（ 批 号 ：
        巢癌的治疗效果具有重要的意义。                                    12183555）、BCA 蛋白定量试剂盒（批号：23227）、ECL超
            齐墩果酸是一种广泛存在于各种水果和可食用植                          敏化学发光液（批号：34580）、M-PER 哺乳动物蛋白提
                                                                                           TM
        物中的一种五环三萜类化合物，具有显著的抗炎作                             取试剂（批号：78501）均购自美国Thermo Fisher Scientif-
        用 [8-9] 。越来越多的研究证实，炎症是肿瘤微环境的基本                     ic公司；胎牛血清（FBS，批号：10099-141）、0.25％胰蛋白
        特征，炎症信号通路活化与肿瘤的发生发展密切相                             酶溶液（批号：25200-056）、青霉素-链霉素双抗（批号：
        关 [10-11] 。核因子κB（NF-κB）信号通路可促进肿瘤坏死因                15070063）均购自美国Gibco公司；DMEM培养基（美国
        子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）等炎症因子的释放，抑                   HyClone 公司，批号：SH30022.01）；NF-κB p65、PRL-3、
        制上皮钙黏着蛋白 E（E-cadherin）的表达进而促进肿瘤                    TNF-α、IL-6、E-cadherin、GAPDH等编码基因上、下游引
        细胞发生上皮间质转化，是肿瘤细胞增殖、侵袭、转移过                          物和探针均由生工生物工程（上海）股份有限公司设计
        程中重要的调节通路         [12-13] 。因此，抑制 NF-κB 信号通路        与合成；荧光定量 PCR 试剂（上海星汉生物科技有限公
        以调节肿瘤细胞炎症微环境，进而抑制细胞增殖、侵袭、                          司）；结晶紫染色液（北京索莱宝科技有限公司，批号：
        转移可作为防治肿瘤的新策略。McQueeney KE等 的                      G1063）；CCK-8 试 剂 盒（日 本 Dojindo 公 司 ，批 号 ：
                                                    [14]
        研究表明，肿瘤侵袭转移关键因子肝再生磷酸酶 3                            CK04）；NF-κB p65 兔单克隆抗体、PRL-3 兔多克隆抗
       （PRL-3）在卵巢癌细胞中呈高表达，其通过活化端粒结                         体、TNF-α兔单克隆抗体、白细胞 IL-6 兔单克隆抗体、
        合蛋白 RAP1 进而激活 NF-κB 信号通路以促进肿瘤侵                     E-cadherin兔单克隆抗体、β-肌动蛋白（β-actin）兔单克隆
                         [15]
        袭、转移；Wang Z等 的研究表明，NF-κB p65在卵巢癌                   抗体、辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔免疫球蛋白
        SKOV3 细胞中异常表达，抑制该蛋白的表达则可抑制                         （IgG）二抗均购自美国 CST 公司（批号分别为 8242、
        SKOV3 细胞的增殖、侵袭、转移。由此可见，NF-κB/                      6484、11948、12912、3195、4970、7074）；十二烷基硫酸
        PRL-3信号通路与卵巢癌细胞侵袭、转移密切相关，有望                        钠-聚丙烯酰胺电泳（SDS-PAGE）凝胶快速制备试剂盒
        作为卵巢癌防治的新靶标。研究表明，齐墩果酸对宫颈                           （上海联迈生物工程有限公司，批号：LM-048）；其余试
        癌、肝癌、肺癌等多种恶性肿瘤细胞的增殖、侵袭、转移                          剂均为实验室常用规格，水为超纯水。
        均具有抑制作用       [16-18] ，但其对卵巢癌细胞增殖、侵袭、转             1.3 细胞
        移的影响及其机制仍不明确。基于此，本研究以人卵巢                               人卵巢癌 SKOV3 细胞株（批号：TCHu185）购自中
        癌 SKOV3 细胞为对象，探讨齐墩果酸对其增殖、侵袭、                       国科学院生物化学与细胞生物学研究所。
        转移的影响及其机制，以期为该化合物防治卵巢癌提供                           2 方法
        理论研究基础。                                            2.1 细胞培养
        1 材料                                                   SKOV3细胞用含10％FBS、1％青霉素-链霉素双抗
        1.1  仪器                                            的 DMEM 培养基（以下简称“完全培养基”），在 37 ℃、
            3111型CO2培养箱（美国Thermo Fisher Scientific公        5％CO2的培养箱中培养（培养条件下同），待细胞处于对
        司）；xMark型酶标仪、164-5050型电泳仪、170-4156型全               数生长期时进行后续试验。


        中国药房    2020年第31卷第10期                                            China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 10  ·1191  ·
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