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40 kHz）提取1 h；放冷，称定质量，以70％乙醇补足减失 德）中汉黄芩素含量最低。从4种成分的含量构成特征
质量；滤过，取续滤液，过0.2 μm微孔滤膜，即得。 来看，S4 样品（产地：河北承德）中黄酮苷类成分含量较
2.1.4 色谱条件 色谱柱：Aquity BEH C18 （50 mm×2.1 高，相应的苷元类成分含量较低，其黄芩苷、汉黄芩苷、黄
mm，1.7 μm）；流动相：0.1％甲酸水溶液（A）-乙腈（B）， 芩素、汉黄芩素的含量结构比为 1 ∶ 0.224 ∶ 0.111 ∶ 0.013；
梯度洗脱（0～0.5 min，18％B；0.5～2.0 min，18％B→ 而 S6 样品（产地：内蒙古-2）中黄酮苷类成分含量较低，
20％B；2.0～6.0 min，20％B→30％B；6.0～8.0 min，30％ 相应的苷元类成分含量较高，4 种成分含量结构比为
B；8.0～10.0 min，30％B→60％B；10.0～12.0 min，60％ 1∶0.241∶0.713∶0.106。
B）；柱温：40 ℃；流速：0.4 mL/min；检测波长：280 nm；进 2.2 黄芩水提物和黄酮类成分模拟样品的细胞毒性和
样量：1 μL。 抗病毒活性评价
2.1.5 不同产地黄芩中4种黄酮类成分的含量测定 取 2.2.1 黄芩水提物样品溶液的配制 取8批不同产地黄
8 批黄芩样品粉末，先后按“2.1.1”“2.1.3”项下方法制备 芩药材粉末，按“2.1.1”项下方法制备水提物冻干粉。取
水提物冻干粉及供试品溶液，另取“2.2.1”项下混合对照 该冻干粉末适量，精密称定，以DMSO配制成母液（临用
品溶液，按“2.2.3”项下色谱条件进样测定，记录色谱图， 新配）；取该母液适量，用细胞培养液[含 10％FBS+100
按外标法计算黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的含 u/mL 青链霉素双抗的 F-12K Nutrient Mixture（1×）培养
量。每批样品平行2份操作，取平均值并计算不同黄酮 基，下同]稀释至不同浓度，备测。
类成分的含量及其构成比。色谱图示例见图 1（其余色 2.2.2 黄酮类成分模拟样品溶液的配制 精密称取黄
谱图及方法学考察内容略，可参见前期研究 ），含量测 芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素对照品各适量，按
[5]
定结果见表1。 “2.2.5”项下测得的8批不同产地黄芩水提物冻干粉中上
述4种黄酮类成分的含量构成比进行混合、研匀，得到8
0.10
1
AU 0.05 2 种代表不同产地黄芩中黄酮类成分组成特征的模拟样
3 4
0 品（分别编号为 E1～E8）。取该模拟样品粉末适量，精
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 密称定，以 DMSO 配制成母液（临用新配）；取该母液适
t，min
注：1.黄芩苷；2.汉黄芩苷；3.黄芩素；4.汉黄芩素 量，用细胞培养液稀释至不同浓度，备测。
[18]
Note：1. baicalin；2. wogonoside；3. baicalein；4. wogonin 2.2.3 两种样品的细胞毒性评价 参照文献方法 并
图1 供试品溶液的超高效液相色谱图（编号：S7） 略作调整后，采用MTT法考察两种样品对Hep-2细胞的
3
Fig 1 UPLC chromatogram of sample solution（No. 毒性。取对数生长期的 Hep-2 细胞，分别按 5×10 个/孔
S7） 接种于96孔板中，在37 ℃、5％CO2、饱和湿度条件下（以
表 1 黄芩水提物中黄酮类成分的含量及其构成比 下培养条件相同）培养 24 h 后，分别加入“2.2.1”“2.2.2”
（n＝2） 项下不同质量浓度的黄芩水提物样品（5、10、20、40、80、
Tab 1 Content and its constituent ratio of flavonoids 160、320、640 μg/mL，以水提物计）和黄酮类成分模拟样
in water extract of S. baicalensis（n＝2） 品（5、10、20、40、80、160、320、640 μg/mL，以混合对照品
总量计）溶液100 μL，继续培养72 h。吸弃原培养液，每
黄酮类成分含量，mg/g 4种黄酮类成分
样品编号
黄芩苷 汉黄芩苷 黄芩素 汉黄芩素 的含量构成比 ＊ 孔加入 5 mg/mL MTT 溶液 10 μL，反应 4 h 后，加入
S1 201.92 47.50 52.61 8.51 1∶0.235∶0.261∶0.042 DMSO 150 μL 终止反应，采用酶联免疫检测仪在 490
S2 165.76 38.71 75.44 10.64 1∶0.234∶0.455∶0.064 nm波长处测定每孔吸光度。本研究同时设置对照组和
S3 210.40 40.90 21.30 7.00 1∶0.194∶0.101∶0.033
S4 244.46 54.88 27.23 3.12 1∶0.224∶0.111∶0.013 阳性对照组，其中对照组加入细胞但不加入药物，阳性
S5 178.40 48.60 36.40 10.90 1∶0.272∶0.204∶0.061 对照组加入细胞和利巴韦林（2、4、8、16、32、64、128、256
S6 131.87 31.76 94.01 14.04 1∶0.241∶0.713∶0.106 μg/mL），同法处理并测定。各给药组剂量均参照文
S7 222.70 44.70 12.80 5.00 1∶0.201∶0.057∶0.022 献[18]和前期预试验结果设定。试验重复3次操作。采
S8 210.60 45.10 29.40 7.80 1∶0.214∶0.140∶0.037
[18]
用Reed-Muench法 计算各目标药物对Hep-2细胞的半
＊
注：各黄酮类成分的含量构成比均以黄芩苷含量为基准值1进行
数有毒浓度（TC50 ）。不同产地黄芩水提物及其对应黄酮
计算
Note： content constituent ratio of flavonoids were computated by 类成分模拟样品的细胞毒性测定结果见表2、表3。
＊
baicalin content as the reference value 1 由表 2、表 3 结果可知，不同产地黄芩水提物对
由表1可见，8批不同产地黄芩提取物中黄芩苷、汉 Hep-2 细胞的 TC50均高于 50 μg/mL，其对应的黄酮类成
黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素含量差异较大。其中，S4样品 分模拟样品的TC50为23.11～52.23 μg/mL。
（产地：河北承德）中黄芩苷、汉黄芩苷含量最高，S6样品 2.2.4 两种样品的抗病毒活性评价 参照文献方法 [18-19]
（产地：内蒙古-2）中黄芩素、汉黄芩素含量最高；S6样品 并略作调整后，采用细胞病变程度（CPE）法考察两种样
（产地：内蒙古-2）中黄芩苷、汉黄芩苷含量最低，S7样品 品对 RSV 的抗毒性活性。取 RSV，以维持液（按照文献
（产地：北京）中黄芩素含量最低，S4样品（产地：河北承 方法 配制）稀释至滴度为 100 倍半数组织培养感染剂
[18]

·1168 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 10 中国药房 2020年第31卷第10期