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甲基苯丙胺俗称“冰毒”，是在世界范围内广泛使                         隆 抗 体（英 国 Abcam 公 司 ，批 号 分 别 为 ab182733、
        用、对公共卫生造成严重危害的毒品之一，属于苯丙胺                           ab185002、ab32042、ab76067、ab179467）；辣根过氧化物
        类神经兴奋剂，具有神经毒性。近年来的研究证实，甲                           酶标记的山羊抗兔免疫球蛋白 G（IgG）二抗（武汉艾美
        基苯丙胺的神经毒性与多种机制有关，其中氧化应激反                           捷科技有限公司，批号：6170-05）；TUNEL 染色试剂盒、
        应及细胞凋亡途径是被广泛认可的机制                  [1-3] 。纹状体是     RIPA 裂解液、BCA 蛋白定量试剂盒、上样缓冲液、转膜
        目前与甲基苯丙胺神经毒性相关性研究最集中的脑                             缓冲液、ECL 化学发光试剂盒（上海碧云天生物技术有
                    [5]
        区 ，徐静涛等 通过动物实验证实，甲基苯丙胺能够使                          限公司）；其余试剂均为分析纯或实验室常用规格，生理
          [4]
        大鼠纹状体中的氧化应激及细胞凋亡加剧，增加神经型                           盐水为自制，水为去离子水。
        一氧化氮合酶（nNOS）的表达，而给予nNOS抑制剂能够                       1.3 动物
        减轻甲基苯丙胺引起的氧化应激及细胞凋亡，表明                                 SPF成年SD大鼠，雄性，体质量250～300 g，购自昆
        nNOS 激活在甲基苯丙胺的神经毒性中起到关键作用，                         明医科大学实验动物学部，动物生产许可证号：SCXK
        抑制nNOS则是减轻其神经毒性的有效靶点。                              （滇）K2015-0002。动物均自由饮水摄食，自然节律
            天麻素是我国传统名贵药材天麻中的活性成分，现                         光照。
        代药理学研究证实，天麻素能够扩张椎基底动脉、增加                           2 方法
        脑血流量，并可改善脑缺血、头晕等症状                [6-7] 。章正祥等 [8]  2.1 分组、造模与给药
        的研究发现，在血管舒缩功能异常模型大鼠中，天麻素                           2.1.1  天麻素注射液对甲基苯丙胺诱导大鼠神经毒性
        对其内皮型一氧化氮合酶（eNOS）及诱导型一氧化氮合                         损伤的改善作用考察            将大鼠随机分为对照组、甲基苯
        酶（iNOS）的表达均具有抑制作用，但天麻素是否能够抑                        丙胺组、常规剂量天麻素组、加倍剂量天麻素组，每组10
        制 nNOS 的表达并起到神经保护作用尚未见报道。为                         只。对照组大鼠腹腔注射生理盐水，每日2次；甲基苯丙
        此，本研究在甲基苯丙胺诱导大鼠神经毒性损伤的基础                           胺组大鼠腹腔注射甲基苯丙胺（7.5 mg/kg，用生理盐水
        上，采用以现代制剂手段开发的天麻素单体注射剂，即                           制成药液；剂量参照徐静涛等 的研究设定），每日2次；
                                                                                     [5]
        天麻素注射液进行干预，拟探索天麻素注射液通过                             常规剂量、加倍剂量天麻素组大鼠提前30 min腹腔注射
        nNOS途径减轻甲基苯丙胺诱导的大鼠神经毒性损伤的                          天麻素注射液（10、20 mg/kg，用生理盐水制成药液；剂
        作用机制，为临床治疗甲基苯丙胺引起的神经损害提供                           量参照吴锋等 的研究设定），每日 1 次，然后按照甲
                                                                         [9]
        新思路。                                               基苯丙胺组方法腹腔注射甲基苯丙胺。各组大鼠每次
        1 材料                                               腹腔注射给药体积均为 1 mL/100 g，均连续注射给药
        1.1  仪器                                            3 d。
            90i型正置显微镜（日本Nikon公司）；ChemiDoc MP               2.1.2 nNOS在天麻素注射液改善甲基苯丙胺诱导大鼠
        型凝胶成像仪（美国 Bio-Rad 公司）；TGL16M 型高速冷                  神经毒性损伤中的作用考察               将大鼠随机分为NC腺病
        冻离心机（湖南恒诺仪器设备有限公司）；EPS-100 型电                      毒组、NC腺病毒+甲基苯丙胺组、NC腺病毒+天麻素组、
        泳仪（上海天能科技有限公司）；Synergy2型多功能酶标                      nNOS腺病毒+天麻素组，每组10只；同时以“2.1.1”项下
        仪（美国BioTek公司）；DW-2000/2000D型脑立体定位仪                 对照组大鼠作为对照。NC腺病毒组大鼠根据脑立体定
       （成都泰盟软件有限公司）。                                       位图谱定位至纹状体，用微量进样器一次性注射 NC 腺
        1.2  药品、病毒与试剂                                      病毒3 μL（病毒数量：4.8×10 PFU，以下各组相同），然后
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            天麻素注射液（西安博森生物制药有限责任公司，                         腹腔注射生理盐水，每日2次；NC腺病毒+甲基苯丙胺组
        批号：2018C92E，规格：1 mL ∶ 0.1 g）；盐酸甲基苯丙胺               大鼠在纹状体一次性注射NC腺病毒3 μL，然后腹腔注射
        对 照 品（中 国 食 品 药 品 检 定 研 究 院 ，批 号 ：171218-          甲基苯丙胺（7.5 mg/kg），每日 2 次；NC 腺病毒+天麻素
        201806，纯度：＞99％）；过表达 nNOS 的重组腺病毒、阴                  组大鼠在纹状体一次性注射 NC 腺病毒 3 μL，然后提前
        性对照（NC）腺病毒（上海闪晶分子生物科技有限公司，                         30 min腹腔注射天麻素注射液（20 mg/kg），每日1次，再腹
                          10
        病毒滴度均为1.6×10 PFU/mL）；丙二醛（MDA）检测试                   腔注射甲基苯丙胺（7.5 mg/kg），每日2次；nNOS腺病毒+
        剂盒（硫代巴比妥酸法）、超氧化物歧化酶（SOD）检测试                        天麻素组大鼠在纹状体一次性注射nNOS腺病毒3 μL，然
        剂盒（羟胺法）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）检测试剂盒                        后提前30 min腹腔注射天麻素注射液（20 mg/kg），每日
       （微板法）、一氧化氮（NO）检测试剂盒（比色法）（南京建                        1次，再腹腔注射甲基苯丙胺（7.5 mg/kg），每日2次。甲
        成生物工程研究所，批号分别为 A003-1-2、A001-3-2、                  基苯丙胺、天麻素注射液的药液配制方法及腹腔注射给
        A005-1-2、A012-1-2）；兔 Bax 单克隆抗体、兔 Bcl-2 单克          药体积均同“2.1.1”项下方法，均连续注射给药3 d。
        隆抗体、兔活化胱天蛋白酶3（Cleaved caspase-3）单克隆                2.2 大鼠刻板行为评价
        抗体、兔nNOS单克隆抗体、兔β-肌动蛋白（β-actin）单克                       评价“2.1.1”项下各组大鼠的刻板行为。每次注射


        中国药房    2020年第31卷第10期                                            China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 10  ·1173  ·
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