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98％）；芸香柚皮苷对照品（上海源叶生物科技有限公 2.2 枳实中酚类化合物的结构鉴定
司，批号：YY90132，纯度：＞98％）；HW-40F 凝胶（日本
TOSOH公司）；大孔树脂HP-20（日本三菱化学公司）；柱
色谱硅胶（100～300 目）、GF254 薄层硅胶（青岛海洋化
工厂）；甲醇为色谱纯，石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯
甲烷等试剂均为分析纯，水为纯净水。
2 方法与结果
2.1 枳实中酚类化合物的提取与分离
取50 kg枳实，粉碎，采用5倍量（L/kg，下同）体积的
95％、70％乙醇依次渗漉提取20 d，提取液减压回收，得
浸膏；将浸膏用水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁
醇（各约50 L）萃取，减压浓缩得3种不同萃取物浸膏（其
中石油醚萃取部分亲脂性较强，故暂未进行分离）。
2.1.1 乙酸乙酯层浸膏的分离 取乙酸乙酯层浸膏 1
kg，经硅胶柱色谱分离，以二氯甲烷-甲醇（1 ∶ 0、49 ∶ 1、
19 ∶ 1、8 ∶ 2、7 ∶ 3、5 ∶ 5、0 ∶ 1，V/V）梯度洗脱，流速约 50
mL/min。依据薄层色谱检测结果，合并得 146 个流分。
其中第 133 流分再经 ODS 反相柱色谱分离，以水-甲醇
（1 ∶ 0、9 ∶ 1、8 ∶ 2、7 ∶ 3、6 ∶ 4、5 ∶ 5、4 ∶ 6、3 ∶ 7、2 ∶ 8、1 ∶ 9、0 ∶ 1， 3.73～3.42（4H，m，H-2′，3′，4′，5′）、δ H 4.60（1H，dd，J＝
V/V）梯度洗脱，流速为10 mL/min，并根据薄层色谱主斑
点合并得 22 个组分即 Fr.1A～Fr.22A。Fr.15A 组分经
HW-40凝胶柱色谱分离，甲醇洗脱，制备液相色谱[流动
相为甲醇-水（4 ∶ 6，V/V）]纯化，得化合物 1（29.5 mg）；
Fr.3A 析出结晶得化合物 3（68 mg）；Fr.11A 和 Fr.14A 同
样经HW-40凝胶柱色谱分离以及制备液相色谱[流动相
分别为甲醇-水（3 ∶ 7，V/V）和甲醇-水（4 ∶ 6，V/V）]纯化，得
到化合物 2（7 mg）和化合物7（60 mg）。第135流分同样
经ODS反相柱色谱分离，以水-甲醇（1∶0、9∶1、8∶2、7∶3、
6∶4、5∶5、4∶6、3∶7、2∶8、1∶9、0∶1，V/V）梯度洗脱，流速为
10 mL/min，并根据薄层色谱主斑点合并得 16 个组分即
Fr.1B～Fr.16B，其中 Fr.1B 组分经制备液相色谱[流动相
为甲醇-水（3 ∶ 7，V/V）]分离纯化，得到化合物4（40.7 mg）
和化合物6（42.3 mg）。
2.1.2 正丁醇层浸膏的分离 取正丁醇层浸膏 1.5 kg，
经过大孔树脂柱色谱分离，将30％乙醇洗脱部分经ODS
反相柱色谱分离，以水-甲醇（1 ∶ 0、9 ∶ 1、8 ∶ 2、7 ∶ 3、6 ∶ 4、
5 ∶ 5、4 ∶ 6、3 ∶ 7、2 ∶ 8、1 ∶ 9、0 ∶ 1，V/V）梯度洗脱，流速为 10
mL/min，得 22 个 组 分 即 Fr.1C～Fr.22C，其 中 Fr.3C、
Fr.17C 采用制备液相色谱[流动相分别为甲醇-水（4.5 ∶
5.5，V/V）和甲醇-水（4 ∶ 6，V/V）]纯化，分别得化合物 5
（77.1 mg）和化合物8（10 mg）；Fr.2C经HW-40凝胶柱色
谱分离，甲醇洗脱，得 8 个流分，再将洗脱的第 2、5 流分
分别采用制备液相色谱[流动相分别为甲醇-水（4.5∶5.5，
V/V）和甲醇-水（3.5 ∶ 6.5，V/V）]纯化，得化合物 9（24.6
mg）、化合物10（12 mg）、化合物11（11.7 mg）、化合物12
（11 mg）。
中国药房 2020年第31卷第9期
采用波谱数据和理化性质以及红外光谱、质谱等方
法鉴定各化合物的结构。
化合物 1：黄色粉末。高分辨质谱显示其分子离子
峰 [M+Na] 质荷比（m/z）为 441.116 2，推测分子式为
+
C21H22O9 ；红外光谱中 3 435、1 634、1 497、1 400、1 385、
1 165、1 078、831 cm －1 的吸收峰表明该化合物含有羟
基、共轭酯基和苯环。薄层色谱（紫外光下观察，下同）
1
中为暗斑点，10％ 硫酸乙醇加热后显棕灰色。 H-NMR
中δ H 7.72（1H，d，J＝16.2 Hz，H-7″）和 6.62（1H，d，J＝
16.2 Hz，H-8″）为一对反式耦合双键上的 2 个 H 质子信
号，δH 7.63（2H，m）、7.42（3H，m）结合 C-NMR中δc 118.7
13
（C-8″）、129.4（C-3″，5″）、130.0（C-4″）、131.5（C-2″，6″）、
135.8（C-1″）、146.6（C-7″）、168.6（C-9″），说明分子中含
有 1 个肉桂酰基；δ H 6.12（2H，d，J＝2.4 Hz，H-2，6）、5.99
（1H，t，J＝1.8 Hz，H-4）和δ c 96.8（C-2，6）、98.1（C-4）、
160.2（C-3，5）、160.9（C-1），说明苯环上有间位 3 取代；
δ H 4.86（1H，d，J＝7.2Hz，H-1′）为糖的端基 H 质子，δ H
2.4、12.0 Hz，H-6′a）、4.32（1H，dd，J＝7.2、12.0 Hz，
H-6′b）结合δ c 65.0（C-6′）、71.8（C-4′）、74.9（C-2′）、75.5
（C-5′）、78.0（C-3′）、102.1（C-1′），说明该化合物为葡萄
糖苷，该糖苷经酸水解后通过薄层色谱鉴定为D型葡萄
糖，并根据耦合常数的大小推断该苷键构型为β-型。在
碳氢远程相关（HMBC）谱中，根据 δ c 168.6（C-9″）和δ H
4.60（1H，dd，J＝2.4、12.0 Hz，H-6′a）、4.32（1H，dd，J＝
7.2、12.0 Hz，H-6′b）有 HMBC 信号，并且δ c 168.6（C-9″）
还与反式双键的一对质子δ H 7.72（1H，d，J＝16.2 Hz，
H-7″）、6.62（1H，d，J＝16.2 Hz，H-8″）有远程相关，推测
肉桂酰基的羰基碳与葡萄糖的 6 位相连；δ c 160.9（C-1）
与δ H 4.86（1H，d，J＝7.2Hz，H-1′）有远程相关，并且还与
δ H 6.12（2H，d，J＝2.4 Hz，H-2，6）有远程相关，推测葡萄
糖的端基连有 1 个 3-取代苯环。因此，确定化合物 1 的
结构为 6′-O-trans-cinnamoyl-3，5-dihydroxyphenyl β-D-
glucopyranoside，经查阅美国化学文摘数据库，发现其为
新化合物。化合物1的化学结构见图1。
图1 化合物1的化学结构
Fig 1 Chemical structure of compound 1
化合物2：黄色油状物。薄层色谱中为暗斑点，10％
China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 9 ·1041 ·