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3.5 Res 对 ALI 模型小鼠肺组织 TLR4、NF-κB 蛋白表 服吸收较慢，因此本研究选择 Res 的持续灌胃时间为 7
达的影响 d [8，13] 。尽管阳性对照组和Res组小鼠的给药方式和持续
与正常组比较，模型组小鼠肺组织中 TLR4、NF-κB 时间有所不同，但最后药物在体内发挥的效应相似（考
蛋白的相对表达量均显著升高（P＜0.01）；与模型组比 察指标数据结果相近），加之本研究以比较Res抗炎作用
较，阳性对照组和Res中、高剂量组小鼠肺组织中TLR4、 是否与地塞米松相近为重点，故设定了“2.1”项下的给药
NF-κB 蛋白的相对表达量均显著降低（P＜0.05 或 P＜ 方式。
0.01），详见图4、表4。 目前，ALI模型可分为肺内型和肺外型两大类 [13-14] ，
主要包括盲肠结扎穿孔、生理盐水肺灌注、鼻内滴注
NF-κB
LPS等，以肺W/D比值以及肺组织病理改变等为指标对
肺部病变情况进行判定 [15-16] 。本研究的主要目的在于观

TLR4 察 ALI 形成后，Res 是否能通过影响炎症因子表达而发
挥作用，对氧合指数以及是否发展为急性呼吸窘迫综合
征等不作研究，因此综合各方法的优缺点最终选择鼻内
β-actin
滴注LPS造模。本研究结果显示，模型组小鼠肺W/D比
正常组 模型组 阳性对 Res低剂 Res中剂 Res高剂 值显著升高，提示肺部水肿严重；病理切片显示小鼠肺
照组 量组 量组 量组
图4 Res对ALI模型小鼠肺组织中TLR4、NF-κB蛋白 组织充血明显，肺泡腔内可见出血和渗出，甚至可见红
表达影响的电泳图 色突变区，提示肺组织呈现急性炎症表现，证实 ALI 炎
Fig 4 Electrophoregrams of the effects of Res on the 症模型建立成功。
expression of TLR4 and NF-κ B in lung tissue 中性粒细胞凋亡在 ALI 的发生发展过程中起着重
of ALI model mice 要作用。ALI患者肺部急性炎症症状明显，出现大量聚
集的中性粒细胞 。中性粒细胞在正常生理条件下寿
[17]
表4 Res对ALI模型小鼠肺组织中TLR4、NF-κB相对
命极短，在外周血循环中半衰期为 2～8 h；在 ALI 发生
蛋白表达量的影响（x±±s，n＝10）
[18]
24 h后，肺泡灌注液中的中性粒细胞凋亡率明显上升 。
Tab 4 Effects of Res on the protein relative expres-
然而，尽管中性粒细胞凋亡率明显上升，但其聚集数量
sion of TLR4 and NF-κB in lung tissue of ALI
仍明显多于正常时期，从而导致了肺部严重炎症反应的
model mice（x±±s，n＝10）
发生。由此可见，若能采用恰当的手段减少肺组织中的
组别 TLR4 NF-κB
正常组 0.57±0.11 0.72±0.11 中性粒细胞，就能够有效减少致炎因子和炎症介质的释
[19]
模型组 0.95±0.07 ＊＊ 0.88±0.07 ＊＊ 放，从而有效改善肺部炎症症状 。Hoechst 33342染色
阳性对照组 0.21±0.02 ## 0.27±0.02 ## 结果和流式细胞结果显示，模型组小鼠由于 LPS 的刺
Res低剂量组 0.87±0.07 0.87±0.04 激，肺泡灌洗液中凋亡中性粒细胞明显增多，且凋亡率
Res中剂量组 0.72±0.04 # 0.75±0.04 #
Res高剂量组 0.67±0.03 ## 0.66±0.03 ## 较正常组显著升高；经Res预处理后，小鼠肺泡灌洗液中
##
#
＊＊
注：与正常组比较， P＜0.01；与模型组比较，P＜0.05，P＜0.01 的中性粒细胞凋亡率均较模型组显著上升。这提示在
#
Note：vs. normal group， ＊ ＊ P＜0.01；vs. model group， P＜0.05， 抗炎过程中，Res 能较模型组进一步促进中性粒细胞的
## P＜0.01 凋亡，从而减少中性粒细胞的聚集。
4 讨论 TLR4 信号通路参与了机体炎症反应，MyD88 依赖
有研究指出，Res 能减轻 LPS 诱导的牙周膜细胞损 的TLR4途径可促炎症因子的产生，从而激活NF-κB，后
伤并抑制 TLR4/NF-κB 活化，也可通过 TLR4/NF-κB 通 者可进一步释放炎症因子，从而引发“瀑布效应”导致全
路减轻缺氧复氧诱导的肝细胞损伤，其干预小鼠的剂量 身炎症反应的发生 。其中，IL-6是IL家族的核心成员，
[5]
以 30、100、400 mg/kg 不等，给药方式包括腹腔注射、股 在B细胞分化、T细胞增殖、急性期反应蛋白诱导等方面
静脉注射、灌胃等 。结合现有研究的数据 [7，11-12] 和本课 发挥着重要的作用，是反映机体炎症和疾病严重程度的
[10]
题组前期预实验结果，本研究采用Res 50、100、200 mg/kg 指标之一 ；TNF-α不仅对损伤细胞具有直接毒性，还能
[20]
以灌胃的方式进行干预；同时，为确保小鼠体内Res达到 通过结合多种细胞和活性物质间接对组织造成进一步
稳态浓度，本研究采用了造模前连续灌胃方式。地塞米 损伤 。有研究指出，在 ALI 发生初期（2 h），肺组织中
[21]
松为经典激素类抗炎药物，故本研究以该药作为 Res 抗 即可产生TNF-α，且随着时间的推移，最快6 h、最慢24 h
炎作用阳性对照药物。由于腹腔注射药物吸收快，因此 后 TNF-α含量即可达到最大值 [22-23] 。由此可见，IL-6 和
地塞米松选择腹腔注射，每日1次，连续3 d；Res的半衰 TNF-α参与了 ALI 早期严重炎症的发生。TLR4 作为
期为 9.2 h，达稳态浓度时间需要 4～5 个半衰期，且口 LPS 的特异性配体，参与了 LPS 致 ALI 的发病过程，

·1038 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 9 中国药房 2020年第31卷第9期