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tissue. RESULTS：In normal group，there were few apoptotic neutrophils in the BALF，and the lung tissue structure was intact，
without edema，hyperemia，exudation，inflammatory cell infiltration or other inflammatory manifestations. In model group，the
number of apoptotic neutrophils in BALF increased，and the apoptotic rate of neutrophils were enhanced significantly（P＜0.01）；
edema and hyperemia of lung tissue were significantly increased，and the red consolidation area was observed；the contents of IL-6
and TNF-α in plasma，the ratio of lung W/D，the relative expression of TLR4 and NF-κB in lung tissue were significantly increased
（P＜0.01）. Compared with model group，the number of apoptotic neutrophils in BALF were increased，and the apoptotic rate of
neutrophils were enhanced significantly（P＜0.05 or P＜0.01）above symptoms of lung tissue were improved to different extents；
the contents of IL-6 and TNF-α in plasma，lung W/D ratio as well as relative expression of TLR4 and NF-κB in lung tissue（except
for Res low-dose group）in administration groups were decreased significantly（P＜0.05 or P＜0.01）. CONCLUSIONS：Res has a
protective effect on ALI model mice，the mechanism of which may be related to reducing the generation of inflammatory cytokines
TNF-α and IL-6 by inhibiting TLR4/NF-kB expression.
KEYWORDS Resveratrol；Acute lung injury；TLR4；NF-κB；Inflammatory cytokines；Mechanism；Mice

急性肺损伤（Acute lung injure，ALI）主要表现为严 司，批号：20180207，纯度：99％）；地塞米松磷酸钠注射
重的肺部炎症反应、急性呼吸窘迫综合征或肺功能衰 液（阳性对照，后文简称“地塞米松”，辰欣药业股份有限
竭，重症监护病房（ICU）患者的发病率为 20％～40％， 公司，批号：20180311，规格：1 mL∶5 mg）；牛血清白蛋白
甚至可高达50％，病死率为30％～40％ [1-2] 。ALI的病因 （BSA）、LPS（美国 Sigma 公司）；兔源β-肌动蛋白（β-ac-
较为复杂，目前学者普遍认为该症的发生与炎症级联反 tin）、NF-κB、TLR4 抗体（美国 Abcam 公司，批号分别为
[3]
应、中性粒细胞黏附以及肺水肿等有关 。Toll样受体4 F1218、M1018、A0712）；辣根过氧化物酶（HRP）标记的
（TLR4）信号通路在炎症反应中具有重要作用，参与了 山羊抗兔 IgG 二抗、CCK-8 试剂盒、ECL 化学发光显色
[4]
ALI 的发病过程 。有研究指出，髓样分化因子 88 液、Hoechst 33242染色液、膜联蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素/
（MyD88）依赖的 TLR4 信号通路被激活后，核因子κB 碘化丙啶（Annexin Ⅴ-FITC/PI）染色试剂盒、蛋白提取
（NF-κB）也被激活，后者可进一步促进肿瘤坏死因子α 试剂盒（碧云天生物技术研究所，批号分别为 A0208、
（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）等炎症因子的释放，导致
20180711、20180621、C1027、C1062L、P0013B）；IL-6、
[5]
炎症级联反应的发生 。
TNF-α酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒（武汉优尔生
白藜芦醇（Resveratrol，Res）是一种多酚类化合物，
科技股份有限公司，批号分别为 20180313、20180411）；
在虎杖属植物中含量丰富，具有抗炎、抗氧化、预防肿瘤
苏木精-伊红（HE）试剂盒、BCA 蛋白定量试剂盒（北京
[6]
发生、抑制细菌生长等作用 。鉴于Res的抗炎作用，本
索 莱 宝 科 技 有 限 公 司 ，批 号 分 别 为 20180612、
课题组推测其可能对脂多糖（LPS）诱导的ALI具有一定
20180521）；氯化钠注射液（回音必集团江西东亚制药有
的减轻作用，并拟探索这一作用是否与 TLR4/NF-κB 关 限公司，批号：2018021822，规格：250 mL∶ 2.25 g，作生理
键因子的表达受到抑制有关。为此，本研究建立了ALI
盐水用）；其余试剂均为分析纯，水为超纯水。
小鼠模型，通过检测炎症因子 IL-6、TNF-α以及 TLR4、
1.3 动物
NF-κB等指标的变化来探索Res对小鼠的保护作用及可
SPF 级昆明种小鼠，雌雄各半，体质量 18～22 g，由
能机制，以期为该化合物防治 ALI 提供理论依据，为该
西南医科大学实验动物中心提供，动物生产许可证号：
症治疗新靶点的挖掘提供参考。
SCXK（川）2018-17。
1 材料
1.1 仪器 2 方法
2.1 分组、造模与给药
SpectraMax M3 型 酶 标 仪（美 国 MDS 公 司）；
取小鼠 60 只，适应性喂养 7 d 后，随机分为正常组、
SBK-YLQX-003552 型 流 式 细 胞 仪（美 国 BD 公 司）；
PAC300型电泳槽和转膜仪、ChemiDoc XRS+System/Im- 模型组、阳性对照组（地塞米松，0.5 mg/kg，以生理盐水
age Lab Software 型凝胶成像系统（美国 Bio-Rad 公司）； 为溶剂，剂量设置参考文献[7]）以及 Res 低、中、高剂量
TCS SP5 型激光共聚焦扫描显微镜（德国 Leica 公司）； 组（50、100、200 mg/kg，以生理盐水为溶剂制成混悬液，
CX23 型生物显微镜（日本 Olympus 公司）；DHG-9147A 使用前摇匀，剂量设置参考文献[7]），每组 10 只。造模
型恒温干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；THM 前，Res各剂量组小鼠按1 mL/100 g灌胃相应药物，每日
75005289 型 离 心 机（美 国 Thermo Fisher Scientific 公 1次，连续7 d；阳性对照组小鼠按0.1 mL/100 g腹腔注射
[8]
司）；DSH2-300型恒温振荡仪（太仓市实验设备厂）；Mil- 相应药物，每日 1 次，连续 3 d ；正常组和模型组小鼠按
li-Q Synthesis型超纯水系统（美国Millipore公司）。 1 mL/100 g灌胃生理盐水，每日1次，连续7 d。第7天给
1.2 药品与试剂 药后，除正常组外，其余各组小鼠均于鼻内单次滴注
[9]
白藜芦醇对照品（成都普斯生物科技股份有限公 LPS 5 mg/kg（滴注时间5 min）以建立ALI模型 。

中国药房 2020年第31卷第9期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 9 ·1035 ·