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品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL，置于25 mL量瓶中， 表2 样品中总黄酮的含量测定结果（n＝3）
按“2.2.4”项下方法显色后，以空白溶剂显色体系为参比， Tab 2 Results of content determination of total flavo-
于500 nm波长处测定吸光度。以质量浓度（c，μg/mL）为 noids in samples（n＝3）
横坐标、吸光度（A）为纵坐标进行线性回归。结果，异 批号 含量，mg/g 平均含量，mg/g RSD，％
－ 2
荭草苷的回归方程为 A＝1.41×10 c－4.30×10 （r＝ 20170726 67.30 66.65 1.54
－ 3
67.19
0.999 9），异荭草苷检测质量浓度的线性范围为 7.73～
65.47
61.82 µg/mL。 20170727 66.11 65.10 1.84
2.2.6 精密度试验 取“2.2.1”项下对照品溶液3.0 mL， 63.78
65.41
按“2.2.4”项下方法显色后，于500 nm波长处重复测定6
20170728 65.34 66.01 1.29
次。结果，吸光度的 RSD 为 0.09％（n＝6），表明仪器精 66.97
密度良好。 65.73
2.2.7 稳定性试验 取“2.2.2”项下供试品溶液（批号： 2.3.2 供试品溶液的制备 同“2.2.2”项。
20170726）适量，按“2.2.4”项下方法显色后，分别于室温 2.3.3 阴性对照溶液的制备 同“2.2.3”项。
下放置 0、5、10、15、20、25、30 min 时，于 500 nm 波长处 2.3.4 色谱条件 色谱柱：250-4 Lichrocart C 18 （250 mm ×
测定吸光度。结果，吸光度的 RSD 为 0.44％（n＝7），表 4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇（A）-0.5％甲酸水溶液（B），
明供试品溶液在室温下显色后30 min内稳定性良好。 梯 度 洗 脱（0～10 min，20％ A；10～15 min，20％ A→
2.2.8 重复性试验 精密称取样品（批号：20170726）， 25％ A；15～20 min，25％ A→33.5％ A；20～23 min，
约0.2 g，共6份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再 33.5％ A；23～30 min，33.5％ A→40％ A；30～40 min，
按“2.2.4”项下方法显色后，于500 nm波长处测定吸光度 40％A→20％A）；流速：1.0 mL/min；检测波长：340 nm；
并按标准曲线法计算样品含量。结果，总黄酮的平均含 柱温：40 ℃；进样量：10 μL。
量为66.20 mg/g，RSD 为1.07％（n＝6），表明方法重复性 2.3.5 专属性试验 分别精密吸取上述混合对照品溶
良好。 液、供试品溶液、阴性对照溶液各 10 μL，按“2.3.4”项下
2.2.9 加样回收率试验 精密称取已知含量的样品（批 色谱条件进样测定，记录色谱图。结果，各色谱峰分
号：20170726），约0.1 g，共6份，分别精密加入异荭草苷 离度良好，均大于 1.5；理论板数按绿原酸峰计不低于
对照品适量，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按 3 000；阴性对照无干扰，详见图3。
“2.2.4”项下方法显色后，于500 nm波长处测定吸光度并
0.050
计算加样回收率，结果见表1。 0.040 2
AU 0.030
表1 加样回收率试验结果（n＝6） 0.020 1 3 4 5
0.010
Tab 1 Results of recovery tests（n＝6） 0 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40
t，min
称样量，g 已知含量，mg 加入量，mg 测得量，mg 加样回收率，％ 平均加样回收率，％ RSD，％ A.混合对照品溶液
0.104 4 6.96 5.12 11.84 95.31
0.102 0 6.80 5.12 11.70 95.70 0.050 2 5
0.104 2 6.94 5.12 11.95 97.85 95.87 1.41 0.040
0.100 4 6.69 5.12 11.49 93.75 AU 0.030 1 4
0.020
0.102 0 6.80 5.12 11.73 96.29 0.010 3
0
0.104 2 6.94 5.12 11.87 96.29
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40
2.2.10 样品含量测定 取3批样品，约0.2 g，按“2.2.2” t，min
B.供试品溶液
项下方法制备供试品溶液，取上述供试品溶液 0.5 mL，
0.030
按“2.2.4”项下方法显色后，于 500 nm 波长处测定吸光 0.025
0.020
度。每批样品平行测定3次，按标准曲线法计算样品中 AU 0.015
0.010
0.005
总黄酮的含量，结果见表2。 0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40
2.3 QAMS 法同时测定三叶青藤叶配方颗粒中 5 种成 t，min
C.阴性对照溶液
分的含量
注：1.新绿原酸；2.绿原酸；3.荭草苷；4.异荭草苷；5.异荭草苷-2′-
2.3.1 混合对照品溶液的制备 精密称取新绿原酸、绿
O-鼠李糖苷
原酸、荭草苷、异荭草苷、异荭草苷-2′-O-鼠李糖苷对照
Note：1. neochlorogenic acid；2. chlorogenic acid；3. orientin；4.
品适量，加甲醇超声使溶解，冷却至室温后，用甲醇制成 isoorientin；5. isoorientin-2′-O-rhamnoside
上 述 5 种 成 分 质 量 浓 度 分 别 为 0.093、0.205、0.046、 图3 高效液相色谱图
0.105、0.189 mg/mL的混合对照品溶液。 Fig 3 HPLC chromatograms

·942 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 8 中国药房 2020年第31卷第8期