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µg/mL；the results of high content cell imaging analysis showed that at a certain concentration metabolite 2 may inhibit
        proliferation by changing the mitochondrial distribution and membrane permeability of HepG2 cells（studies on the pharmacological
        activities of metabolism 1 had been reported，it was skipped in this study）. CONCLUSIONS：In this study，two baicalin bile
        metabolites were successfully isolated and identified，of which baicalein 6-O-β-D-glucuronide has a significant inhibitory effect on
        the proliferation of HepG2 cells.
        KEYWORDS      Baicalin； Metabolite； Oroxylin A-7-O-β-D-glucuronide； Baicalein  6-O-β-D-glucuronide； Isolation  and
        purification；High content cell imaging analysis；Liver cancer HepG2 cells


            黄 芩 是 唇 形 科 植 物 黄 芩（Scutellaria baicalensis    工作台（苏州净化设备总厂）；Operetta 型高内涵细胞成
        Georgi）的干燥根，味苦、性寒，归肺、心、肝、胆、大肠经，                    像分析系统（美国Perkin Elmer有限公司）。
        在我国的应用已有上千年的历史，具有清热燥湿、泻火                           1.2 药品与试剂
                            [1]
        解毒、止血、安胎等功效 。黄芩中主要含有黄酮及其苷                              黄芩苷对照品（陕西昊辰生物科技有限公司，批号：
        类、萜类化合物和挥发油等成分 。其中，属于黄酮类化                          HQ190916，纯度：≥98％）；聚乙二醇 400（PEG400，广东
                                   [2]
        合物的黄芩苷作为黄芩最主要的有效成分，在黄芩中的                           西陇化工有限公司，批号：141025）；5-氟尿嘧啶（5-FU，
                        [3]
        含量为 9％～14％ 。近年来，随着对黄芩苷的深入研                         美 国 Sigma 公 司 ，批 号 ：0598）；胎 牛 血 清（批 号 ：
        究，发现其具有保肝、利胆、抗菌、抗炎、抗肿瘤、抗糖尿                         1809249）、DMEM 培养基（批号：8119220）、胰蛋白酶消
        病、抗病毒和抗氧化等药理作用             [4-8] 。                 化液（批号：25200-056）、二甲基亚砜（DMSO，批号：
            已有研究表明，黄芩苷进入大鼠体内后，先在肠道                         821D031）、青霉素-链霉素溶液（批号：20181222）、磷酸
        菌群分泌的β-葡萄糖醛酸苷酶（GUS）作用下水解为其                         盐缓冲液（PBS，批号：20181217）、MTT（批号：1015D059）
        苷元黄芩素，然后在肝部位经尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转                           均购自北京索莱宝科技有限公司；Bobo-3膜通透性染料
        移酶（UGT）作用转化成黄芩苷及其他代谢物后主要经                          （批号：QC217869）、DAPI 核染料（批号：QC217870）、线
        胆汁排泄 。另有研究发现，黄芩苷可抑制肝癌细胞                            粒体绿色荧光探针（批号：QC217868）均购自美国 Ther-
                [9]
        HepG2 的增殖，具有浓度和时间的依赖性，并可诱导                         mo Fisher Scientific公司；乙腈、甲醇为色谱纯，乙酸乙酯
        HepG2细胞的凋亡      [10-12] 。但黄芩苷经肝代谢产生的代谢             为分析纯，水为纯净水。
        物对肝是否具有毒副作用尚不清楚。因此，本研究首先                           1.3  动物
        使用高效液相色谱法初步确定了黄芩苷在胆汁中的主                                SD 大鼠，雄性，体质量（300±20）g，购自贵州医科
        要代谢物，然后利用半制备型高效液相色谱法分离纯化                           大学实验动物中心，动物使用许可证号：SYXK（黔）
        主要代谢物，并鉴定其结构；采用MTT法及高内涵细胞                          2018-0001。大鼠严格按照实验动物护理和使用指南饲
        成像分析法分析代谢物对HepG2细胞增殖的影响，以期                         养，将大鼠饲养在室温（22±2）℃和湿度（55±5）％的环
        为黄芩苷及其代谢物后续研究提供试验基础。                               境中，光照 12 h 循环，自由饮水。本实验所涉及动物的
        1 材料                                               相关操作均在贵州医科大学实验动物伦理委员会的批
        1.1  仪器                                            准下进行，并严格遵循相关准则。
            UltiMate 3000型超高效液相色谱-TSQ、Quantum型             1.4  细胞
        三重四极杆串联质谱（MS）仪（美国 Finnigan 公司）；UV                      肝癌细胞 HepG2 购自中国科学院典型培养物保藏
        2700型紫外可见分光光度计（日本岛津公司）；FT-IR型红                     委员会昆明细胞库，在第5次传代后用于后续试验。
        外光谱（IR）仪（美国赛默飞公司）；JE-OL-ECS-400MHz                 2 方法与结果
        型核磁共振（NMR）波谱仪（日本电子株式会社）；1100                       2.1 大鼠胆汁中黄芩苷代谢物的初步分析
                                                                                                     [13]
        型半制备型高效液相色谱仪（美国安捷伦科技有限公                            2.1.1  色谱条件      参考本课题组前期研究方法 进行
        司）；N-1300S 型旋转蒸发仪（长春乐镤科技有限公司）；                     试验，色谱柱为Diamosil C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm）；流
        CKX53 型 倒 置 显 微 镜（奥 林 巴 斯 中 国 有 限 公 司）；            动相为 0.2％磷酸水溶液-甲醇-乙腈溶液（60 ∶ 22 ∶ 18，V/
        MCO-18AC 型二氧化碳培养箱（日本松下公司）；Alleg-                   V/V）；流速为 1 mL/min；柱温为 40 ℃；检测波长为 275
        ra BHR 型超高速冷冻离心机（美国 Beckman 公司）；VI-                nm；进样量为20 µL。
        BRAX VXR basic 型自动漩涡振荡仪（德国 IKA 公司）；                2.1.2  黄芩苷对照品溶液的制备             精密称取适量的黄
        D101型氮吹仪（杭州蓝焰科技有限公司）；2XZ-1型旋片                      芩苷对照品，用甲醇溶解并定容至 10 mL 量瓶中，即得
        式真空泵（浙江黄岩黎明实业有限公司）；AB104-N Met-                    质量浓度为 10 mg/mL 的黄芩苷对照品溶液，于 4 ℃下
        tler 型电子天平（瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司）；                       保存，备用。
        800TS 型酶标仪（美国 Bio-tek 公司）；BBS-V800 型超净             2.1.3  大鼠胆汁样品的处理          取6只SD大鼠，经水合氯


        中国药房    2020年第31卷第7期                                               China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 7  ·801  ·
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