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用，且作用迅速 [3-5] ，其小鼠静脉注射的药效剂量为2.5～ 10 μL，加入乙酸乙酯 3 mL，涡旋萃取 3 min，以 4 000
5 mg/kg，半数致死量（LD50 ）为 9.382 mg/kg ，由此可见 r/min离心10 min；吸取上层有机相2.4 mL，置于5 mL离
[6]
其抗心律失常的治疗范围较窄，剂量不当常会导致中 心管内，并于 50 ℃水浴中以氮气流吹干，残渣加入 200
毒，甚至死亡。同时，Cre 的药动学数据显示，其半衰期 µL甲醇复溶，涡旋1.5 min，经0.22 μm微孔滤头过滤，取
较短 [7-8] 。因此，Cre 作为活性显著的心律失常先导化合 续滤液，备测。
物，其毒性较大、半衰期较短的问题亟待解决。本课题 2.3 Cre的血药浓度测定
组前期将 Cre 分别制备成了脂质体、纳米粒与经皮贴剂 2.3.1 色谱条件 色谱柱：Agilent ZORBAX Extend-C18
以期达到减毒、保效的作用 [9-13] ，结果显示，以聚乙二醇- （250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相：甲醇-0.01％三乙胺溶
（聚乳酸-羟基乙酸）-聚乙二醇三嵌段共聚物（PELGE）载 液（75 ∶ 25，V/V）；流速：1 mL/min；检测波长：280 nm；柱
体材料制备的Cre纳米粒（PELGE-Cre-NPs）的载药量较 温：30 ℃；进样量：20 μL。
高、稳定性较好。在前期研究的基础上，本研究主要考 2.3.2 专属性 取空白血浆、给药1 h后的含药血浆+内
察PELGE-Cre-NPs在家兔体内的药动学特征，旨在延长 标、空白血浆+Cre 对照品+内标，各 0.5 mL，分别置于离
Cre的半衰期，达到保效的目的。 心管内，按“2.2”项下方法，从“加入乙酸乙酯3 mL”开始
1 材料 处理样品。精密量取续滤液 20 µL，按“2.3.1”项下色谱
1.1 仪器 条件进样测定，记录色谱图，详见图1。
1260 Infinity 型高效液相色谱仪（美国 Agilent 公 10.0
司）；T-1000 型电子天平[美国双杰兄弟（集团）有限公 7.5
5.0
司]；HSC-12A 型氮吹仪（天津市恒奥科技发展有限公 mAU
2.5
司）；XHF-1型内切式匀浆机（宁波新芝生物科技有限公 0
司）；TGL-16G 型台式离心机（上海安亭科学仪器厂）； 0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 20 22.5
t，min
XK96-A 型快速混匀器（姜堰市新康医疗器械有限公 A.空白血浆
司）。 10.0
7.5
1.2 药品与试剂 mAU 5.0 Cre
PELGE-Cre-NPs（云南中医学院药剂实验室自制，批 2.5
号：2016011003，Cre含量：1.5 mg/mL，包封率：90.32％）； 0
Cre对照品[云南中医学院药剂实验室自制，提取自云南 0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 20 22.5
t，min
地不容（S. yunnanensis H.S.Lo），批号：20141101，纯度： B.含药血浆+内标
20
99.2％]；盐酸维拉帕米对照品（中国食品药品检定研究
15
院，批号：100223-200102，供含量测定使用）；氯化钠注 mAU 10 Cre
射液（昆明南疆制药有限公司，批号：20150917）；甲醇为 5 盐酸维拉帕米
色谱纯，乙酸乙酯等其余试剂为分析纯，水为纯化水。 0
0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 20 22.5
1.3 动物 t，min
C.空白血浆+Cre对照品+内标
SPF 级家兔 6 只，雌雄各半，体质量为 2～2.5 kg，购
图1 高效液相色谱图
自成都达硕生物科技有限公司，生产许可证号：SCXK
Fig 1 HPLC chromatograms
（川）2013-24。
2 方法与结果 由图1显示，空白血浆对检测无干扰；内标盐酸维拉
2.1 溶液的配制 帕米、Cre的出峰时间依次为8.095、9.399 min，分离度大
2.1.1 对照品溶液 取Cre对照品，精密称定，用甲醇溶 于1.5，拖尾因子均在0.95～1.05之间，峰形对称性良好，
解定量稀释制成150 μg/mL的对照品溶液。分别精密量 理论板数以 Cre 或盐酸维拉帕米计均不低于 2 000。这
取该溶液适量，用甲醇稀释制成合适的系列标准溶液。 表明该色谱条件专属性良好。
2.1.2 内标溶液 取盐酸维拉帕米对照品，精密称定， 2.3.3 线性关系与定量限考察 精密量取空白血浆0.5
用水溶解稀释制成质量浓度为4 000 μg/L的内标溶液。 mL，置于 10 mL 离心管内，分别加入“2.1.1”项下的系列
2.2 家兔血浆的处理 标准溶液各 20 μL，配制成 Cre 质量浓度分别为 45.0、
参考文献方法 [14-15] ，精密量取家兔血浆样品0.5 mL， 90.0、180.0、450.0、900.0、1 800.0、3 600.0 µg/L 的系列血
置于离心管内，加入盐酸维拉帕米内标溶液（4 000 μg/L） 浆样品。按“2.2”项下方法处理上述血浆样品后，精密量

中国药房 2020年第31卷第7期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 7 ·779 ·